佟若菲，張金芬，孫燕燕

(天津市兒童醫(yī)院，天津 300134)

噴膜劑是一種新型透皮制劑，結(jié)合了貼劑、膜劑、噴霧劑的優(yōu)點(diǎn),以溶液狀態(tài)儲(chǔ)存，并能以霧狀噴出后快速形成通氣性良好的生物膜[1]。鹽酸小檗堿噴膜劑為本院研制的口腔科用藥，臨床用于治療小兒鵝口瘡取得較好療效。該制劑以鹽酸小檗堿為主藥，采用聚維酮為成膜材料，以龍腦、氮酮為促滲劑，加入菠蘿香精等調(diào)味制備而成；根據(jù)《中國(guó)藥典》(2015年版)中關(guān)于膜劑的要求及目前文獻(xiàn)關(guān)于噴膜劑的質(zhì)量控制的研究情況，采用HPLC測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，初步建立了其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 HPLC-2010(日本島津)；LC solution色譜工作站；XS-205電子天平(瑞士-梅特勒托利多公司)；柱溫箱(Model 100，天津科貝爾公司)；KQ-100B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；酸度計(jì)PHS-25(數(shù)顯，上海精密科學(xué)儀器有限公司)。

1.2試藥 鹽酸小檗堿對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)130555-200602)；鹽酸小檗堿原料藥(上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)Y18D8C50814)；龍腦[阿拉丁試劑(上海)有限公司，批號(hào)E1816012，藥用]；聚維酮(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號(hào)20140314，藥用)；氮酮(山東優(yōu)索化工科技有限公司，批號(hào)20150419，藥用)；菠蘿香精(廣東省陽(yáng)東縣化工工業(yè)公司，批號(hào)20171226，食品用)；庚烷磺酸鈉(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)201811010，藥用)；磷酸二氫鉀、三乙胺、95%乙醇均為分析純；乙腈(色譜純，迪馬科技有限公司，批號(hào)R141552)；水為去離子水。

2 方法與結(jié)果

2.1鹽酸小檗堿噴膜劑的制備

2.1.1處方 鹽酸小檗堿33.6 g，龍腦 1.5 g，聚維酮100 g，氮酮10 ml，菠蘿香精0.50 g，95%乙醇300 ml，純化水加至1 000 ml。

2.1.2制備 ①取鹽酸小檗堿33.6 g，95%乙醇300 ml溶解，取1.5 g龍腦、10 ml氮酮放入鹽酸小檗堿溶液中，使之充分溶解；②稱(chēng)取100 g聚維酮置燒杯中，加純凈水300 ml使其溶脹，靜置過(guò)夜，加200 ml沸水溶解，放置冷卻后，加入菠蘿香精0.50 g；③將聚維酮混合液緩慢加入鹽酸小檗堿溶液中，攪拌混勻，純化水加至1 000 ml，即得[2-4]。

2.2鹽酸小檗堿噴膜劑的含量測(cè)定

2.2.1色譜條件 色譜柱：依利特Sinochrom ODS-BP(150 mm ×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相：0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液和0.05 mol/L庚烷磺酸鈉溶液(1∶1)(含0.2%三乙胺，并用磷酸調(diào)節(jié)pH 值至3.0)-乙腈(60∶40)，流速：1 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為263 nm；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量20 μl[5]。

2.2.2溶液制備

2.2.2.1對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取鹽酸小檗堿對(duì)照品10 mg，置10 ml量瓶中，加沸水使溶解，靜置放冷后稀釋至刻度，搖勻。精密量取3 ml，置50 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，制成每1 ml中含0.06 mg的溶液。

2.2.2.2供試品溶液 精密稱(chēng)取本品1 ml(約相當(dāng)于鹽酸小檗堿33.6 mg)，置量瓶中，加水20 ml，于水浴上溫?zé)崾谷?，放冷，? ℃下放置2 h，濾過(guò)，濾液置100 ml量瓶中，殘?jiān)?0 ml水分4次洗滌，合并洗液與濾液，用水稀釋至刻度，搖勻。精密量取10 ml，置100 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2.3陰性樣品溶液 按處方比例配成不含鹽酸小檗堿的噴膜劑，按供試品溶液制備方法，制得陰性樣品溶液。

2.2.3專(zhuān)屬性試驗(yàn) 分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各20 μl,按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，鹽酸小檗堿出峰時(shí)間適宜，峰型良好，且輔料無(wú)干擾；理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算值為3 136，見(jiàn)圖1。

1.鹽酸小檗堿圖1 供試品(A)對(duì)照品(B)陰性樣品(C)HPLC色譜圖

2.2.4線(xiàn)性范圍 精密稱(chēng)取鹽酸小檗堿對(duì)照品50 mg，置50 ml量瓶中，加沸水20 ml溶解，加流動(dòng)相稀釋至刻度，作為對(duì)照品貯備液。精密量取對(duì)照品貯備液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5和4.0 m1分別置50 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以鹽酸小檗堿濃度(C)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程：A=1.200×105C+1.167×106(r=0.999 5，n=7)，表明鹽酸小檗堿在20～80 μg/ml的范圍內(nèi)具有良好線(xiàn)性關(guān)系。

2.2.5精密度試驗(yàn) 取“2.2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得鹽酸小檗堿峰面積的RSD為0.52%，符合要求。

2.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品，按照“2.2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備操作，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，分別在0、4、8、10、12和24 h進(jìn)樣，進(jìn)樣量20 μl，測(cè)得各自峰面積值的RSD為1.44%，符合要求。

2.2.7重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品適量，共6份，分別按照“2.2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備操作，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，進(jìn)樣量20 μl，樣品中鹽酸小檗堿平均含量為33.6 μg/ml，RSD為0.77%，符合要求。

2.2.8加樣回收率試驗(yàn) 精密量取供試品1.0 ml 9份，分別精密加入相當(dāng)于鹽酸小檗堿含量80%、100%和120%的鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液各3份，按照“2.2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備操作，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，進(jìn)樣量20 μl，計(jì)算回收率。結(jié)果鹽酸小檗堿的平均回收率為99.95%，RSD為1.34%。見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.2.9樣品測(cè)定 取鹽酸小檗堿噴膜劑樣品3批(批號(hào) 20180701、20180702、20180703)，每批2份，按照“2.2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備操作，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，進(jìn)樣量20 μl，用外標(biāo)法計(jì)算樣品中鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果鹽酸小檗堿含量的平均值為33.45 μg/ml,RSD為1.49%。見(jiàn)表2。

表2 3批鹽酸小檗堿噴膜劑含量測(cè)定結(jié)果

2.3性狀 按照處方工藝制備的小檗堿噴膜劑的外觀為淡黃色澄明液體[6]。

2.4pH值 取小檗堿噴膜劑約 5 ml，加純化水 15 ml稀釋溶解，測(cè)定 pH，根據(jù)人體口腔正常pH值，溶液pH值應(yīng)為6.5～7.2[7]。

2.5成膜時(shí)間 37 ℃條件下，將噴膜劑噴涂在載玻片上，成膜時(shí)間應(yīng)在 5 min 之內(nèi)。

2.6溶膜試驗(yàn) 將藥液噴涂于患處，待藥膜形成后再次噴涂，以用棉簽?zāi)軐⒌谝淮嗡幠げ恋艏礊槿苣?，將此試?yàn)重復(fù) 30 次，結(jié)果應(yīng)均為陽(yáng)性，表明該藥既能保持創(chuàng)面連續(xù)用藥，又不會(huì)妨礙創(chuàng)面分泌物的排泄[8]。

3 討論

鵝口瘡(thrush)又名雪口病、白念菌病(moniliasis)，是由白色念珠菌感染引起的真菌病，在黏膜表面形成白色斑膜，多見(jiàn)于嬰幼兒。白色念珠菌有時(shí)也可在正常人的口腔中找到。當(dāng)嬰兒營(yíng)養(yǎng)不良或身體衰弱時(shí)可以發(fā)病[9]。目前，小兒鵝口瘡多以局部治療為主，嚴(yán)重病例及慢性念珠菌感染常輔以全身治療。臨床常用制霉菌素、氟康唑等抗真菌藥，但隨之而來(lái)的耐藥現(xiàn)象越來(lái)越嚴(yán)重，尋找以生物膜為靶向的藥物是近年的研究熱點(diǎn)。

小檗堿是中藥黃連中的主要有效成分，是一種廣譜抗菌藥物，且具有不易耐藥的特點(diǎn)。在小檗堿影響下，生物膜內(nèi)細(xì)胞的存活率降低，白色念珠菌生長(zhǎng)活力下降。白色念珠菌生物膜活性減低，生物膜的生物量減少，說(shuō)明小檗堿對(duì)體外白色念珠菌生物膜的形成有抑制作用，表明小檗堿有體外抑制白色念珠菌的活性[10]。另外研究發(fā)現(xiàn)小檗堿對(duì)白色念珠菌細(xì)胞生長(zhǎng)周期造成不同程度的影響，藥物濃度增高，處于S、G2、M期的細(xì)胞比率降低，細(xì)胞分裂被明顯抑制。表明小檗堿可抑制白色念珠菌的細(xì)胞生長(zhǎng)周期，最佳作用時(shí)間為12 h[11]。

本院研發(fā)的醫(yī)院新制劑小檗堿噴膜劑選取小檗堿為主要藥效成分；所選成膜材料聚維酮是一種常用的水溶性高分子成膜材料，易溶于極性溶劑，安全無(wú)毒，對(duì)皮膚黏著力強(qiáng)，無(wú)刺激性，常作為噴膜劑的成膜材料；促滲劑以龍腦、氮酮聯(lián)合應(yīng)用，以達(dá)到協(xié)同作用。質(zhì)量控制方面噴膜劑的酸堿度應(yīng)該在中性范圍(pH 5～8)內(nèi)，這樣才能減小對(duì)皮膚的刺激性，更好地發(fā)揮皮膚的性能，增強(qiáng)藥物的吸收，本試驗(yàn)制備的噴膜劑pH值在6.5～ 7.2，符合質(zhì)量要求。