賈英杰

上海冠生園蜂制品有限公司（上海 201419）

近年來，中國蜂蜜年產(chǎn)量呈現(xiàn)穩(wěn)步上升趨勢，年消費量不斷提升，行業(yè)規(guī)模不斷擴(kuò)大。國家統(tǒng)計局?jǐn)?shù)據(jù)顯示，2008年全國蜂蜜產(chǎn)量38.47萬 t，2013年為43.66萬 t，2017年為54.25萬 t，其中2017年天然蜂蜜出口數(shù)量12.93萬 t，蜂蜜產(chǎn)量不斷攀升，反映消費端旺盛的蜂蜜需求，隨著消費量不斷增加，蜂蜜作為天然的健康產(chǎn)品，影響日趨擴(kuò)大，引起監(jiān)管部門和消費者對蜂產(chǎn)品行業(yè)的廣泛關(guān)注。

從全球來看，中國是養(yǎng)蜂大國，聯(lián)合國糧食與農(nóng)業(yè)組織統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，2017年中國養(yǎng)蜂規(guī)模達(dá)915.6萬群，僅次于印度的1 276.4萬群，占全球蜂群數(shù)量的10%；從蜂蜜產(chǎn)量來看，2017年全球蜂蜜產(chǎn)量186.9萬 t，其中中國蜂蜜產(chǎn)量占全球的比重近30%，蜂群單產(chǎn)蜂蜜量處于世界前列，反映中國整體的蜜蜂飼養(yǎng)技術(shù)處于較高水平。從養(yǎng)蜂產(chǎn)業(yè)模式來看，歐美發(fā)達(dá)國家通過養(yǎng)蜂授粉實現(xiàn)增產(chǎn)的現(xiàn)象較為普遍，中國養(yǎng)蜂多以生產(chǎn)蜂蜜等蜂產(chǎn)品為主。從全球情況來看，中國養(yǎng)蜂技術(shù)水平較高，這與養(yǎng)蜂過程中的精細(xì)化管理分不開，這種情形帶來單產(chǎn)較高的同時，也會帶來一些負(fù)面效應(yīng)，如養(yǎng)蜂過程中獸藥使用問題，加之養(yǎng)蜂環(huán)節(jié)較為分散，養(yǎng)蜂過程中獸藥的不合理使用對行業(yè)下游環(huán)節(jié)形成為挑戰(zhàn)。

目前國內(nèi)外在檢測蜂蜜中獸藥殘留常見的方法主要有高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[4]、液相色譜法[5]、常規(guī)理化檢測法[6]、酶聯(lián)免疫法[7-8]、毛細(xì)管電泳法等[9]。

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)是國內(nèi)外在動物源性食品中獸藥殘留檢測技術(shù)使用最常見的技術(shù)方法之一[10]。該項技術(shù)能同時獲得定性、定量的指標(biāo)，而且在實現(xiàn)獸藥殘留色譜峰分離的情況下，利用各檢測獸藥化合物物質(zhì)之間質(zhì)荷比的差別進(jìn)行高靈敏度的檢測。中國在蜂蜜及蜂產(chǎn)品中獸藥殘留的檢測標(biāo)準(zhǔn)中也采用相關(guān)技術(shù)方法。采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜能應(yīng)用于同一類獸藥殘留的檢測，并能對不同種類獸藥實現(xiàn)同時檢測[11]。

1 蜂蜜中主要存在的獸藥殘留

蜂蜜中獸藥殘留問題主要是因為蜜蜂在生長過程中會出現(xiàn)不同的疾病，蜂農(nóng)在養(yǎng)殖過程中使用或濫用一些獸藥[1]，獸藥殘留的問題嚴(yán)重阻礙中國蜂產(chǎn)業(yè)發(fā)展，也是國際貿(mào)易中經(jīng)常面臨的困境之一。

中國蜂農(nóng)在預(yù)防蜜蜂疾病的常用獸藥主要有硝基咪唑類藥物、氯霉素抗生素、四環(huán)素類抗生素、大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類藥物、磺胺類、頭孢類、硝基呋喃及其代謝物[2]。這些獸藥因在人體中具有潛在的安全隱患，而且國內(nèi)外對獸藥殘留都有制定殘留限度[3]。因此對蜂蜜中獸藥殘留的檢測技術(shù)尤為重要。

2 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在蜂蜜中獸藥殘留的應(yīng)用

2.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在蜂蜜中硝基呋喃類藥物殘留檢測中的應(yīng)用

因為硝基呋喃類藥物能夠?qū)θ梭w造成不同程度的損害，2002年中國對硝基呋喃類藥物實行禁令。因此蜂蜜產(chǎn)品中硝基呋喃類藥物的檢測是行業(yè)面臨的問題之一。張平安等[12]利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在多反應(yīng)模式下對蜂蜜中呋喃唑酮進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)使用乙酸乙酯在液-液萃取條件下，可達(dá)0.5 μg/kg；余建新等[13]通過微量化樣品前處理，對蜂蜜及水產(chǎn)品中的硝基呋喃類藥物進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)蜂蜜樣品中呋喃唑酮代謝物和呋喃西林代謝物存在污染的可能性。蔣原等[14]通過液相色譜-電噴霧質(zhì)譜技術(shù)對蜂蜜中硝基呋喃類藥物進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)Agilent Extend C18色譜柱有較好的分離效果，同時甲醇流動相具有較高的分離度和分辨率。祝偉霞等[15]通過固相支撐萃取-平行前處理方法，同位素內(nèi)標(biāo)法定量，對蜂種4種硝基呋喃類藥物進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)通過使用硅藻土作為固相支撐物能夠?qū)Ψ涿壑械南趸秽愃幬镞M(jìn)行凈化和富集，同時利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)能夠快速對食品中的殘留藥物進(jìn)行檢測。

2.2 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在蜂蜜中硝基咪唑類藥物殘留檢測中的應(yīng)用

張璐等[16]通過使用在線凈化裝置，利用超高效液質(zhì)聯(lián)用儀器對蜂蜜中硝基咪唑類藥物進(jìn)行測定，其建立以Cyclone-P為凈化柱、Hypersil GOLD aQ為色譜分析柱的分析方法，能夠快速有效檢測出蜂蜜中殘留的硝基咪唑類藥物。劉永明等[17]通過液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對蜂蜜中3種硝基咪唑類藥物進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)使用HLB固相萃取柱能夠富集3種硝基咪唑類藥物，進(jìn)行LC-MS測定可以達(dá)到國外硝基咪唑類藥物的檢測要求。殷局易等[18]對蜂產(chǎn)品中9種硝基咪唑類藥物進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)乙腈提取后使用MCX固相萃取柱凈化，在蜂蜜和蜂王漿樣品中使用高效液相串聯(lián)質(zhì)譜法測定其定量限可達(dá)0.5 μg/kg，凍干粉樣品中其定量限可達(dá)1.0 μg/kg。郭少飛等[19]使用乙腈-氯仿-異丙醇體系對蜂蜜中的硝基咪唑類藥物進(jìn)行提取，使用高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法測定，發(fā)現(xiàn)經(jīng)此方法前處理能夠快速有效地測定出蜂蜜中3種硝基咪唑類藥物殘留。

2.3 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在蜂蜜中喹諾酮類藥物殘留檢測中的應(yīng)用

丁濤等[20]利用高效液相串聯(lián)質(zhì)譜方法對蜂蜜中19種喹諾酮類藥物殘留進(jìn)行測定，同時比較3種不同固相萃取柱的提取凈化方法，發(fā)現(xiàn)強陰離子固相萃取柱能較好地富集凈化蜂蜜中的藥物殘留，同時發(fā)現(xiàn)該方法的定量限達(dá)1.0 μg/kg。曹彥忠等[21]通過使用磷酸鹽緩沖液提取喹諾酮藥物，使用HLB固相萃取柱凈化，建立蜂蜜中14種喹諾酮藥物的檢測方法，其檢測限達(dá)1.0 μg/kg。陳曉紅等[22]對蜂蜜中4種喹諾酮藥物進(jìn)行質(zhì)譜測定，發(fā)現(xiàn)使用磷酸鹽緩沖液溶解提取喹諾酮藥物，使用MAX固相萃取柱凈化，建立質(zhì)譜方法其檢出限達(dá)到0.5 μg/kg。何強等[23]使用超高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法對蜂蜜中15種喹諾酮藥物殘留進(jìn)行測定，其使用C18色譜柱進(jìn)行分離，其建立方法檢出限1.0 μg/kg。

2.4 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在蜂蜜中磺胺類獸藥殘留檢測中的應(yīng)用

徐慧等[24]通過使用CAPCELL PAK C18色譜柱，利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀建立檢出限0.1 μg/kg的17種磺胺類藥物測定方法。盛雪飛等[25]通過使用超快速液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對蜂蜜中磺胺類藥物殘留進(jìn)行方法建立，可在短時間內(nèi)同時測定20種磺胺類藥物殘留。李小運等[26]使用乙腈快速提取蜂蜜中磺胺類藥物殘留，使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法建立11種磺胺類藥物殘留快速檢測技術(shù)，方法定量限2.0 μg/kg。容裕棠等[27]通過鹽析、胺丙基鍵合硅膠萃取凈化蜂蜜，利用QuEChERS技術(shù)，使用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對蜂蜜中21種磺胺類藥物殘留進(jìn)行快速測定，方法檢出限為0.12～2.46 μg/kg，達(dá)到快速檢測要求。

2.5 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在蜂蜜中多類別獸藥殘留檢測中的應(yīng)用

王偉等[28]通過使用QuEChERS方法對蜂蜜中60種獸藥殘留進(jìn)行質(zhì)譜測定，發(fā)現(xiàn)使用此前處理方法并用乙腈提取能夠得到較好的回收率。何強等[29]通過使用HLB和PSA固相萃取柱對蜂蜜中硝基咪唑類、喹諾酮類、磺胺類藥物進(jìn)行凈化富集，建立超高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜方法，其檢測限達(dá)0.4～4.0 μg/kg。圖雅等[30]使用同位素內(nèi)標(biāo)法，對蜂蜜中氯霉素和甲硝唑藥物殘留進(jìn)行質(zhì)譜測定，通過MCS固相萃取柱凈化，其方法檢出限達(dá)0.05 μg/kg。王建妹等[31]使用HLB固相萃取柱凈化，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析蜂蜜中39種抗生素和25種農(nóng)藥，其建立方法檢出限為0.2～3.8μg/kg。徐瀟穎等[32]利用磁性多壁碳納米管作為固相萃取，使用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對蜂蜜中44種獸藥殘留進(jìn)行測定，其建立的方法檢出限為0.2～2.0 μg/kg。

3 展望

國內(nèi)越來越多標(biāo)準(zhǔn)和法規(guī)開始使用質(zhì)譜檢測技術(shù)作為內(nèi)在方法之一，同時國際上越來越多國家建立以高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)為基礎(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)，實現(xiàn)蜂蜜中獸藥殘留能夠更快、更精確檢測，同時由于質(zhì)譜檢測技術(shù)的發(fā)展，該技術(shù)可更高效檢測多種獸藥種類，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在蜂蜜檢測領(lǐng)域中的作用更加凸顯。隨著社會各方對食品安全方面投入的不斷加大，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在蜂產(chǎn)品企業(yè)和地方性檢測機(jī)構(gòu)中將得到越來越多的應(yīng)用。

解決蜂蜜中獸藥抗生素殘留問題，除了監(jiān)管部門的大力監(jiān)管外，還需企業(yè)通過快速有效的檢測技術(shù)手段做好蜂原料的篩選工作，并通過檢測信息不斷向蜂產(chǎn)品行業(yè)上游進(jìn)行壓力傳導(dǎo)，輔助市場化的原料采收機(jī)制，督促養(yǎng)蜂科學(xué)用藥，通過各方努力與實踐，取得較好效果。