裴莉 杜鳳霞

人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)為小型雙鏈DNA病毒，具有多種亞型，不同亞型致病性不同，根據(jù)其感染后致癌性可分為低危型和高危型兩大類。研究表明高危型HPV的持續(xù)感染是引發(fā)宮頸癌的重要因素[1-2]。因此，HPV基因型檢測對宮頸癌及癌前病變的早期篩查、診斷和防治具有重要意義。本研究通過對大連地區(qū)健康體檢女性進(jìn)行HPV基因分型檢測，從而探討HPV感染狀況、基因型分布特征及相關(guān)影響因素，為宮頸癌的診療、防治以及抗宮頸癌新疫苗的研發(fā)提供可靠的理論依據(jù)。現(xiàn)將調(diào)查結(jié)果報告如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 收集2017年6月至2018年8月大連療養(yǎng)院健康管理中心1 132例體檢女性普查的HPV檢測分型結(jié)果。被檢女性均為非經(jīng)期、24 h內(nèi)無性行為、72 h內(nèi)未陰道給藥或進(jìn)行沖洗，均簽定知情同意書。本研究中被檢者年齡22～83歲，平均年齡(40.68±8.21)歲。均未行子宮切除術(shù)、無HPV感染治療史及宮頸細(xì)胞學(xué)病史。按照年齡分為5組(21～30歲、31～40歲、41～50歲、51～60歲、61歲及以上)，其中因61歲以上人數(shù)過少，故把61～83歲合并為一組。

1.2 儀器與試劑 實驗中使用到儀器為GeneAmp PCR System 9700基因擴(kuò)增儀(杭州日博科技有限公司)和FYY-3分子雜交箱(興化市分析儀器廠)，試劑采用杭州艾康人乳頭狀瘤病毒基因分型(25型)檢測試劑盒(PCR-反向點雜交法)。

1.3 標(biāo)本采集與處理 標(biāo)本均為女性宮頸脫落細(xì)胞。采集：婦科醫(yī)生以擴(kuò)陰器暴露宮頸口，先用無菌棉拭子將宮頸口過多的分泌物擦去，再將專用宮頸刷伸入宮頸口處，緊貼宮頸口黏膜順時針輕柔轉(zhuǎn)動4～5周后慢慢取出，置于裝有細(xì)胞保存液的專用取樣管中，擰緊瓶蓋并充分震蕩，直立放置常溫或4℃保存，72 h以內(nèi)完成檢測。如同時行細(xì)胞學(xué)檢查及HPV檢測，應(yīng)先取細(xì)胞學(xué)標(biāo)本，后取HPV標(biāo)本。采樣中血液或黏液太多影響檢測結(jié)果，取材前應(yīng)先去除。

1.4 HPV分型檢測 原理：本試劑盒采用PCR體外擴(kuò)增和DNA反向點雜交相結(jié)合的基因檢測技術(shù)。通過HPV特異引物，擴(kuò)增出包含25種HPV基因型的目標(biāo)片段，再將擴(kuò)增產(chǎn)物與固定在膜條上的型特異性探針進(jìn)行雜交，依據(jù)雜交信號來判斷是否有這些HPV型的存在。

具體操作過程中的試劑配制、PCR擴(kuò)增、雜交、洗膜、顯色及結(jié)果判定等步驟嚴(yán)格按照試劑盒和儀器說明書的要求進(jìn)行。本方法可檢測25種HPV基因型，包括17種高危型(HPV16，18，26，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，73 型 )以及8種低危型(HPV6，11，40，42，43，44，81，83型)。本研究中的多重感染即同時獲得二重或二重以上的感染。

1.5 結(jié)果分析 采用Excel 2007錄入整理數(shù)據(jù)并建立數(shù)據(jù)庫，采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，計數(shù)資料以率表示，組間比較采用X2檢驗，計量資料用(s)表示，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 健康體檢女性HPV感染情況和基因型分布共納入1 132例健康體檢女性為研究對象，其中21～30歲組253例，31～40歲組439例，41～50歲組118例，51～60歲組228例，61歲及以上組94例。經(jīng)統(tǒng)計分析檢出HPV感染212例，總感染率為18.73%(212/1 132)，HPV單一感染為158例，其感染率為13.96%(158/1 132)，占總感染人數(shù)的74.53%(158/212)，多重感染54例，為總感染人數(shù)的25.47%(54/212)。其中不同年齡組段HPV的感染率也不盡相同(表1)。25種HPV基因型均有檢出，總計296型次，其中高危型238型次，占80.41%，高風(fēng)險HPV感染率為21.02%(238/1 132)，低風(fēng)險HPV感染率為5.12%(58/1 132)。其中高?；蛐椭蠬PV52、HPV53、HPV58和HPV16位居檢出型次的前四位，分別為14.19%(42/296)、9.12%(27/296)、8.78%(26/296)和8.45%(25/296)(表2)。

表1 不同年齡組HPV感染情況(n)

2.2 不同年齡組HPV感染情況 31～40歲年齡組HPV陽性感染人數(shù)最多73人(圖1)，但其感染率卻最低16.63%(圖2)；61歲及以上和21～30歲兩組HPV陽性檢出率均較其他組高，分別為23.40%和20.16%，即單一和多重感染率均高于其他組。各年齡組人群HPV感染均以單一感染為主(圖3)，在41～50歲組段中未檢測到三重及三重以上的感染。高危型HPV52、HPV16在單一和多重感染中的感染率在31～40歲組段中最高，分別為24.14%、14.58%(14/58，7/48)和15.52%、8.33%(9/58，4/48)。HPV陽性感染率經(jīng)X2檢驗，各年齡組間比較，P＞0.05，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(X2＝3.009，P＝0.556)。

圖1 不同年齡組人群HPV陰性和陽性感染人數(shù)情況

圖2 不同年齡組人群HPV陽性感染率

圖3 各重感染在不同年齡組人群中的分布

表2 單一和多重感染的HPV基因型分布情況(n)

3 討論

3.1 引起HPV感染率和基因分型差異的相關(guān)因素 宮頸癌已成為中國女性第二大惡性腫瘤[3-4]，是最致命同時也是最容易明確病因的腫瘤之一，高危型HPV的持續(xù)感染是誘發(fā)宮頸癌的罪魁禍?zhǔn)譡5]。HPV從潛伏感染到宮頸癌病變需要經(jīng)歷一定的時間，早期治療的宮頸癌患者生存率高達(dá)90%，因此有效的進(jìn)行HPV基因型檢測對預(yù)防宮頸癌的發(fā)生具有重要的意義。不同的地域、不同的人群以及不同年齡段的HPV感染率和基因分型存在著較大的差異，這可能與當(dāng)?shù)氐慕?jīng)濟(jì)發(fā)展水平、生活習(xí)慣、衛(wèi)生條件、保健意識以及醫(yī)療技術(shù)水平等因素密切相關(guān)。因此準(zhǔn)確了解本地區(qū)人群HPV感染情況、基因型分布特征和相關(guān)影響因素能為宮頸癌的診療、防治以及抗宮頸癌新疫苗的研發(fā)提供可靠的理論依據(jù)。

3.2 本地區(qū)HPV感染特征 本地區(qū)女性HPV感染以單一高危型感染為主，以HPV52、HPV53、HPV58和HPV16最為常見，且21～30歲及61歲及以上年齡組單一和多重感染率均較高，這與楊煉等和Wang等[6-7]的研究結(jié)果相似。高危亞型與成都地區(qū)[8](HPV52、16、58和39)，云南曲靖市[9](HPV16、52、58和18)，甘肅地區(qū)[4](HPV16、58、52和18)，河北地區(qū)[10](HPV16、58和52)、牡丹江地區(qū)[11]的(HPV16、52、58和51)前四位相比，感染亞型排序有所不同。本研究顯示大連地區(qū)1 132例健康體檢女性HPV總感染率為18.73%，單一感染率為13.96%，均低于張青等[12](2014)的23.19%和16.70%，且與之檢出最高型次的HPV16、HPV58和HPV52的順序也略有差別。與王詩卓等[13]的遼寧地區(qū)的總感染率17.35%，單一感染率14.16%基本相似。61歲及以上和21～30歲兩組HPV陽性感染率最高，與國外[14]文獻(xiàn)報道的HPV感染年齡近似為“U”型分布相符。鄧任堂等[15]認(rèn)為以20～30歲、＞50歲年齡段陽性率較高，呈現(xiàn)“雙峰”狀。即青年、老年感染率高，而中年感染率相對低。在本研究中，感染的主要年齡段集中在30歲及以下和61歲及以上人群，檢出率分別為20.16%和23.40%。分析原因可能與年輕女性生殖道黏膜免疫防御系統(tǒng)尚不夠成熟，加之性生活活躍抗感染能力較弱，宮頸鱗狀上皮較敏感容易受到HPV的感染。此外，國內(nèi)學(xué)者[16]認(rèn)為也有可能與生活環(huán)境不固定，作息時間不規(guī)律，過早性行為，性伴侶不固定等因素相關(guān)。感染后大多數(shù)女性可以自主的清除掉體內(nèi)的HPV，只有少數(shù)人群由于無法清除進(jìn)入體內(nèi)的HPV造成感染，才有可能引起宮頸癌前病變。本研究發(fā)現(xiàn)60歲及以上年齡組HPV感染率最高，一方面可能與參選樣本量少有關(guān)，本年齡段的人數(shù)僅為94人；另一方面隨著年齡的增長機(jī)體的免疫力逐漸下降，機(jī)體清除HPV的能力也隨之降低。還可能因其處于絕經(jīng)期，激素水平降低，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能減退，從而容易引起持續(xù)性感染。

3.3 為本地區(qū)的疫苗研發(fā)提供理論依據(jù) 目前已上市的抗宮頸癌疫苗以二價(HPV16和18)、四價(HPV6、11、16和18) 及九價(HPV6、11、16、18、31、33、45、52和58)為主。本次檢測的四種常見基因型HPV52、53、58和16并未全部涵蓋在九價疫苗中。研究顯示疫苗對HPV基因型有交叉保護(hù)性[9]，但由于HPV型別特異性強(qiáng)，誘導(dǎo)產(chǎn)生的中和抗體交叉保護(hù)性較低。機(jī)體雖可以通過自身的免疫系統(tǒng)清除早期的HPV感染，但由于病毒的致病性加之持續(xù)感染極易引起癌變。因此因地制宜、有針對性的研發(fā)適合本地區(qū)人群的HPV疫苗尤為重要，而不能以偏概全。

綜上所述，HPV基因分型檢測對易感染人群的及早發(fā)現(xiàn)、及早診斷、及早治療起著重要作用，對新疫苗的研發(fā)評價、接種有著重要價值。因此建議凡有性生活一年以上的女性應(yīng)該定期做HPV分型檢測，而更有效的方式是行液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查和HPV二者聯(lián)合檢測。應(yīng)當(dāng)引起足夠的重視，從而降低宮頸癌的發(fā)病率，保護(hù)女性健康。