黃彥通，周丹英，余琪

（浙江省中藥研究所有限公司，浙江杭州310023）

高血脂癥是指人體脂質(zhì)代謝障礙導致的血漿膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇等的異?，F(xiàn)象，與心血管疾病、動脈粥樣硬化的發(fā)生密切相關(guān)[1]。人群血清膽固醇水平的升高導致2010年～2030年期間我國心血管病事件約增加920萬[2]。我國成人血脂異常水平和患病率與西方發(fā)達國家相比還處于較低水平，但比10年前有了較大升高，隨著年齡增加有上升的趨勢[3]。我國血脂異?？偦疾÷蕿?4 %，城鄉(xiāng)差別不大，城市患病率為35.1 %，鄉(xiāng)村為26.3%，男性患病率41.9%，高于女性患病率32.5%[4]。我國兒童青少年高膽固醇血癥患病率也有明顯升高，兒童青少年合并血脂異?？偦疾÷蕿?5.3 %，7 歲～18歲兒童青少年血脂異?？偦疾÷剩?1.6 %）高于2歲～6 歲兒童（9.0%）[5]。對于高血脂癥，臨床治療多使用降血脂藥物，但藥物具有一定的毒副作用，不適合長期服用，因此，開發(fā)既有營養(yǎng)價值又有降脂功效的保健食品是防治高脂血癥的一個重要研究方向。本產(chǎn)品紅曲蜂膠片是以紅曲、蜂膠乙醇提取物為主要原料開發(fā)的保健食品。現(xiàn)代藥理學研究表明，紅曲、蜂膠均有良好的調(diào)節(jié)血脂作用[6-7]，而由蜂膠乙醇提取物、紅曲粉為原料組合而成的具有降脂功效的保健食品還未見報道。因此，本文依照《關(guān)于印發(fā)抗氧化功能評價方法等9 個保健功能評價方法的通知》對紅曲蜂膠片的功效性進行評價。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

紅曲蜂膠片非定型粉末：浙江某生物科技有限公司，棕紅色，由功能性紅曲米粉與蜂膠乙醇提取物配合輔料制成，主要功效性成分為洛伐他汀和總黃酮，規(guī)格為0.5 g/片，每日兩次，每次2 片。以每人60 kg 體重計算，折合劑量0.033 g/（kg·d）。

膽固醇測定試劑盒、甘油三酯測定試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒：中生北控生物科技股份有限公司。

1.2 試驗動物

雄性SD 大鼠，50只，體重180 g～220 g，無特定病原體，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司，實驗動物合格證號：SCXK（滬）2012-0002；實驗動物維持飼料由浙江省實驗動物中心提供；實驗動物模型飼料由北京科奧協(xié)力飼料有限公司提供。

1.3 儀器與設(shè)備

TBA-40FR型全自動生化分析儀：東芝公司；Thermo16離心機：賽默飛世爾科技公司；eppendorf Researchplus可調(diào)移液器：德國艾本德股份公司。

1.4 方法

1.4.1 動物分組

空白對照組、模型組按1 mL/100 g 體重灌胃去離子水，紅曲蜂膠片低劑量、中劑量、高劑量組分別以0.17、0.33、1.00 g/kg 劑量等容灌胃（分別相當于人推薦攝入量的5、10、30 倍）。空白對照組繼續(xù)給予維持飼料，模型對照組及3 個劑量組繼續(xù)給予模型飼料，并每周定期稱量體重。

1.4.2 實驗方法

50只SD 大鼠于屏障環(huán)境適應6 d，按體重隨機分為2 組，10 只大鼠給予維持飼料作為空白對照，40 只給予模型飼料作為模型組。模型組給予模型飼料12 d后，空白對照組和模型組大鼠不禁食采血（尾部），采血后20 ℃靜置1 h，分離血清，測定血清總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）水平。根據(jù)TC 水平將模型組隨機分成4 組，每組10 只，分別為模型對照組和樣品的3 個劑量組，4 組比較LDL-C、TG、TC、HDL-C 差異均無顯著性（P＞0.05）。分組后，空白對照組繼續(xù)給予維持飼料，模型對照組及3 個劑量組繼續(xù)給予模型飼料，并每周定期稱量體重。于給受試樣品后第31 天和第42 天不禁食采血，采血后20 ℃靜置1 h，分離血清，采用全自動生化分析儀測定血清LDL-C、TG、TC、HDL-C 水平。

1.4.3 統(tǒng)計方法

用SPSS11.5 統(tǒng)計軟件統(tǒng)計。方差符合齊性要求時，用方差分析進行統(tǒng)計；如果各組均數(shù)之間差異有顯著性，則進一步用q 檢驗進行兩兩比較。方差不符合齊性要求時，用秩和檢驗進行統(tǒng)計。

2 結(jié)果

2.1 高脂血癥動物模型的建立

造模后、實驗第31 天及實驗第42 天，大鼠不禁食采血（尾部），采血后室溫靜置1 h，分離血清，測定血清TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平，結(jié)果見表1～表3。大鼠血清TC、TG、LDL-C 與對照組比較均顯著升高（P＜0.01），表明高脂血癥動物模型成立。

表1 造模后大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平（±s）Table 1 Serum lipids level of TC，TG，LDL-C，HDL-C in model rats（±s）

表1 造模后大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平（±s）Table 1 Serum lipids level of TC，TG，LDL-C，HDL-C in model rats（±s）

注：與空白對照組比較，**表示差異極顯著，P＜0.01。

組別 鼠數(shù) LDL-C/（mmol/L） TG/（mmol/L） TC/（mmol/L） HDL-C/（mmol/L）空白對照組 10 0.43±0.04 1.31±0.25 1.61±0.15 0.95±0.08模型組 40 0.90±0.10** 4.11±1.12** 3.75±0.58** 1.22±0.12**t 21.412 14.468 20.509 6.496 P 0.000 0.000 0.000 0.000

表2 實驗第31 天大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平（±s）Table 2 Serum lipids level of TC，TG，LDL-C，HDL-C in each group rats on the day 31 after administration（±s）

表2 實驗第31 天大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平（±s）Table 2 Serum lipids level of TC，TG，LDL-C，HDL-C in each group rats on the day 31 after administration（±s）

注：與空白對照組比較，**表示差異極顯著，P＜0.01。

組別 鼠數(shù) LDL-C/（mmol/L） TG/（mmol/L） TC/（mmol/L） HDL-C/（mmol/L）空白對照組 10 0.30±0.07 1.42±0.26 1.47±0.20 0.78±0.12模型組 10 0.73±0.07** 2.81±0.44** 3.43±0.45** 0.86±0.07 t 13.679 8.588 12.665 1.935 P 0.000 0.000 0.000 0.069

表3 實驗第42 天大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平（±s）Table 3 Serum lipids level of TC，TG，LDL-C，HDL-C in each group rats on the day 42 after administration（±s）

表3 實驗第42 天大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平（±s）Table 3 Serum lipids level of TC，TG，LDL-C，HDL-C in each group rats on the day 42 after administration（±s）

注：與空白對照組比較，**表示差異極顯著，P＜0.01。

組別 鼠數(shù) LDL-C/（mmol/L） TG/（mmol/L） TC/（mmol/L） HDL-C/（mmol/L）空白對照組 10 0.34±0.04 1.33±0.37 1.54±0.22 0.76±0.15模型組 10 0.72±0.07** 2.47±0.47** 3.23±0.50** 0.76±0.10 t 14.260 6.029 9.725-0.090 P 0.000 0.000 0.000 0.930

表4 各組大鼠體重變化情況（±s）Table 4 Weight changes of each group rats（±s）

表4 各組大鼠體重變化情況（±s）Table 4 Weight changes of each group rats（±s）

組別 鼠數(shù) 始重/g 第14 天體重/g 第31 天體重/g 第42 天體重/g模型對照組 10 306.5±17.7 401.9±19.4 499.0±21.7 530.8±22.5低劑量組 10 318.2±20.7 407.7±26.8 493.4±35.8 530.6±38.5中劑量組 10 315.9±14.9 409.0±23.7 496.4±34.5 533.8±40.3高劑量組 10 306.2±16.6 398.9±23.1 474.5±30.5 509.9±32.7

2.2 紅曲蜂膠片對高脂血癥大鼠體重及血脂的影響

大鼠喂飼維持飼料觀察6 d 后，按體重隨機分成模型組（40 只）和空白對照組（10 只），體重分別為（204.5±9.6）g 和（206.1±9.0）g，差異無統(tǒng)計學意義（t=-0.486，P＞0.05）。造模后，樣品對大鼠體重的影響結(jié)果見表4，原始數(shù)據(jù)均符合方差齊的要求（P＞0.05）。給樣前、中、末期，低、中、高3 劑量組大鼠體重分別和模型對照組比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

紅曲蜂膠片對高脂血癥大鼠血脂的影響見表5，喂飼高脂飼料31 d 后，模型對照組大鼠血清TG、TC、LDL-C、HDL-C 值與高、中、低劑量組比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），中、高劑量組的血清TG 值及中劑量組的血清TC 值與模型對照組相比稍有降低。喂飼高脂飼料42 d 后，模型對照組大鼠血清TG 與高、中劑量組比較有明顯降低，差異顯著（P＜0.05）；模型對照組大鼠血清LDL-C 與中劑量組比較有明顯降低，差異顯著（P＜0.05）。

表5 各組大鼠血清TG、TC、LDL-C、HDL-C 含量測定結(jié)果（±s）Table 5 The results of serum TG，TC，LDL-C，HDL-C content of each group rats（±s）

表5 各組大鼠血清TG、TC、LDL-C、HDL-C 含量測定結(jié)果（±s）Table 5 The results of serum TG，TC，LDL-C，HDL-C content of each group rats（±s）

注：與空白對照組比較，*表示差異顯著P＜0.05。

組別 鼠數(shù) LDL-C/（mmol/L） TG/（mmol/L） TC（/mmol/L） HDL-C/（mmol/L）實驗前 31 d 后 42 d 后 實驗前 31 d 后 42 d 后 實驗前 31 d 后 42 d 后 實驗前 31 d 后 42 d 后模型對照組 10 0.90±0.12 0.76±0.10低劑0.73±0.07 0.72±0.07 4.04±1.05 2.81±0.44 2.47±0.47 3.80±0.53 3.43±0.45 3.23±0.50 1.27±0.10 0.86±0.07 0.75±0.10中劑量組 10 0.87±0.09 0.72±0.09 0.69±0.08 4.01±1.16 2.83±0.48 2.21±0.42 3.78±0.36 3.47±0.38 3.22±0.37 1.23±0.10 0.88±0.08 0.70±0.04高劑量組 10 0.92±0.09 0.70±0.07 0.62±0.07*4.05±1.17 2.64±0.52 1.94±0.46*3.72±0.38 3.30±0.47 3.03±0.56 1.20±0.10 0.86±0.08量組 10 0.92±0.12 0.75±0.09 0.70±0.08 4.16±1.04 2.40±0.56 1.93±0.40*3.84±0.60 3.56±0.60 3.25±0.56 1.16±0.11 0.85±0.12 0.74±0.07

各項實驗結(jié)果表明：給受試樣品42 d 后，中劑量組大鼠血清LDL-C 含量，中、高劑量組大鼠血清TG含量均明顯低于模型對照組，差異均有統(tǒng)計學意義。綜上所述，在本實驗條件下，紅曲蜂膠片輔助降血脂功能動物實驗結(jié)果陽性。

3 結(jié)論與討論

近年來，我國人群的血脂水平逐步升高，血脂異常患病率明顯提高且有低齡化趨勢。血脂異常受飲食及生活方式的影響，飲食治療和生活方式改善是治療血脂異常的基礎(chǔ)措施[8]。紅曲是藥食兩用的傳統(tǒng)中藥，以大米為原料經(jīng)紅曲霉發(fā)酵而成，具有降血脂、降血壓、抗肥胖、防治老年癡呆及骨質(zhì)疏松等多種藥理作用[9]。高躍中等[10]通過人體試食實驗研究了功能性紅曲具有明確的調(diào)脂功能，并且無明顯不良反應。1979年日本遠藤章教授在紅曲菌發(fā)酵液中得到可以抑制體內(nèi)膽固醇合成的活性物質(zhì)Monacolin K，后來證明Monacolin K 即為洛伐他汀，該類化合物在臨床應用中可作為羥甲基戊二酰輔酶A（HMG-CoA）還原酶的競爭性抑制劑，能有效減少或阻斷內(nèi)源性膽固醇的合成[11]。他汀類藥物雖然降低血脂異常的效果較明確，但可引起較嚴重的不良反應。研究表明，紅曲降脂作用較為溫和，不良反應少[12]，從紅曲中提取的洛伐他汀有明顯降低膽固醇及甘油三酯的作用[13]。Chen C H 等[14]研究了紅曲的3 個產(chǎn)品的溶解性、物態(tài)、口服生物藥效率，并與純洛伐他汀進行比較，結(jié)果顯示紅曲產(chǎn)品溶解度高并結(jié)晶度減少，因而具有比純洛伐他汀更高更快的口服生物藥效率。有研究表明，紅曲中非他汀類物質(zhì)也具有輔助降血脂的功能，并且只需紅曲中所含他汀類純品十分之一的劑量即能表現(xiàn)出較好的功效[15]。蜂膠為天然蜂產(chǎn)品，食用歷史悠久，屬可用于保健食品的物品，具有抗炎鎮(zhèn)痛、增強免疫、保護心血管、抗腫瘤、抗氧化、護肝等方面的藥理作用[16]。蜂膠中富含黃酮類化合物，已從蜂膠中分離鑒定的黃酮化合物有30 余種，許多黃酮種類為蜂膠所特有，已有報道證明黃酮類物質(zhì)為降血脂，清除自由基，擴張冠狀血管等多種保健功能的活性成分[17]。有研究表明，蜂膠中黃酮含量越高，輔助降血脂作用越明顯[18]。

本實驗通過喂食高脂模型飼料建立了大鼠混合型高脂血癥模型，研究了紅曲蜂膠片的輔助降血脂功能。研究表明，紅曲蜂膠片可降低血清中TG、LDL-C的含量，與模型對照組比較有顯著性差異（P＜0.05）。紅曲蜂膠片以傳統(tǒng)食品紅曲與蜂膠乙醇提取物為主要原料，經(jīng)過科學的配比，經(jīng)由現(xiàn)代制劑工藝加工而成，方中紅曲能健脾消食，活血化瘀，蜂膠能補虛弱，化濁脂。紅曲蜂膠片的主要功效性成分為洛伐他汀與總黃酮，紅曲中的洛伐他汀能有效減少或阻斷內(nèi)源性膽固醇的合成，從而實現(xiàn)輔助降血脂的功效；而蜂膠能促進肝臟的脂質(zhì)代謝，抑制甘油三酯和膽固醇與蛋白質(zhì)的結(jié)合，抑制脂蛋白和血管壁膠原纖維蛋白的結(jié)合，蜂膠中的多種黃酮類物質(zhì)可與膽固醇或其轉(zhuǎn)化物膽酸結(jié)合，從而抑制其在腸內(nèi)的吸收促進降解和排泄[19]。LDL-C 升高是動脈粥樣硬化性心血管疾?。╝therosclerotic cardiovascular disease，ASCVD）重要的危險因素[20]，故認為紅曲蜂膠片對防治動脈粥樣硬化方面疾病也具有積極意義。近年來，越來越多的關(guān)于輔助降血脂類保健食品正在興起，其中以蜂膠降脂類產(chǎn)品與紅曲降脂類產(chǎn)品未完全普及，具有非常廣闊的市場前景。