叢日琳 岳媛媛 王旭超

（1 榮成市中醫(yī)院臨床藥學室，山東 榮成 264300；2 榮成市石島人民醫(yī)院臨床藥學室，山東 榮成 264300；3 長春中醫(yī)藥大學藥學院，吉林 長春 130117）

風濕病是一種常見的反復發(fā)作的急性或慢性全身性結(jié)締組織炎癥，主要累及心臟、關(guān)節(jié)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、皮膚和皮下組織，臨床表現(xiàn)以心臟炎和關(guān)節(jié)炎為主，急性發(fā)作時通常以關(guān)節(jié)炎較為明顯［1-3］。

紅花祛風方為紅花、延胡索等中藥的提取物外加少量冰片、麝香制備成的粉末，臨用時取處方量加入少量醫(yī)用乙醇攪拌成糊狀，涂抹于患處，用醫(yī)用紗布固定。該處方的有效性已在臨床上得到證明，但本方最大缺點是需要“現(xiàn)用現(xiàn)配”，用藥時一般需要他人配合，上藥后需盡量避免大量運動，且用藥后在皮膚上有殘留，一般需要用熱水擦去，給患者使用帶來了不便。本著方便患者使用的原則，達到隨用隨貼，方便用藥和去除的目的，擬將其開發(fā)為貼劑，并開發(fā)成院內(nèi)制劑。前期實驗研究已經(jīng)確定了方中主要活性成分（總黃酮和總生物堿）的最佳提取工藝，本研究主要對紅花祛風帖的制備方法和初步藥理學研究進行討論。

1 材料與方法

1.1 儀器 Precisa電子分析天平（瑞士）；AB104-S電子分析天平（梅特勒）；熱風循環(huán)涂布機組（沈陽杰飛醫(yī)藥設(shè)備制造有限公司）；PHS-3C型數(shù)字酸度計（上海精科儀器有限公司）；DHG-9030A電熱恒溫鼓風干燥箱（上海善志儀器設(shè)備有限公司）；HJ-5多功能恒溫攪拌器（江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司）。

1.2 材料與試劑 紅花祛風方提取物（自制）；氨水（北京化工廠，批號：170606）；氮酮（上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批號：B1729034）；聚丙烯酸酯壓敏膠（國藥集團化學試劑有限公司，批號：170912）；鄰苯二甲酸二乙酯（國藥集團化學試劑有限公司，批號：171112）；丙二醇（上海麥克林生化科技有限公司，批號：D10053512）；聚乙二醇 400（天津市光復精細化工研究所，批號：20171213）。

1.3 實驗動物 昆明種小鼠［合格證號：SCXK-（吉）2017-0004］，EWG/B豚鼠 ［合格證號：SCXK-（吉） 2017-0011］，所有實驗動物及飼料均購于吉林大學白求恩醫(yī)學院實驗動物中心。

1.4 實驗方法

1.4.1 涂料制備工藝

1.4.1.1 貼劑制備方法 按處方稱取壓敏膠、增稠劑和潤濕劑，混合均勻，加氨水調(diào)節(jié)pH 8；取紅花祛風提取物，加入氮酮、鄰苯二甲酸二乙酯研磨均勻，加入制備好的聚丙烯酸酯壓敏膠，研勻，靜置，將涂料涂布于裱背材料上，烘干，覆蓋襯，切割為 7 cm× 10 cm，即得［4－7］。

1.4.1.2 壓敏膠的選擇 根據(jù)預試驗結(jié)果，選定提取物加入量為14%，氮酮加入量為3%，鄰苯二甲酸二乙酯加入量為0.5%，依法制備貼劑［4－7］。以外觀和初黏力為考核指標，觀察壓敏膠∶增稠劑∶潤濕劑的比值對各指標的影響。

表1 壓敏膠的研究

結(jié)果表明，當壓敏膠∶增稠劑∶潤濕劑在所選定范圍內(nèi)均能與物料分散均勻，但只有在比例為 100∶0.75∶0.25時貼劑的黏性適中。

1.4.1.3 載藥量的研究 其他實驗條件不變，使壓敏膠∶增稠劑∶潤濕劑的比例為 100∶0.75∶0.25，以外觀和黏力為考核指標，按表中設(shè)計的載藥量依法制備貼劑，考察其對外觀和初黏力的影響。

表2 載藥量的選擇

結(jié)果表明，當載藥量為12%～14%時，貼劑分散均勻，且初黏力較好，所以確定貼劑的載藥量范圍為12%～14%。

1.4.1.4 分散劑的研究 根據(jù)以上試驗結(jié)果，其他實驗條件不變，以外觀和初黏力為考核指標，以聚乙二醇 400作為分散劑，考察分散劑用量對考核指標的影響。

表3 分散劑的選擇

結(jié)果表明，不加入分散劑時，貼劑的外觀和初黏力都較好，加入分散劑后，初黏力反而下降，所以確定貼劑處方中不加入分散劑。

1.4.1.5 增塑劑的研究 （1）增塑劑種類的選擇：其他實驗條件不變，以外觀和初黏力為考核指標，分別考察鄰苯二甲酸二乙酯、不同比例檸檬酸酯（TEC）與癸二酸二乙酯 （DES） 合用對產(chǎn)品質(zhì)量的影響［4－7］。

表4 增塑劑種類的選擇

結(jié)果表明，以鄰苯二甲酸二乙酯為增塑劑，貼片黏性適中，以不同比例TEC與DES合用為增塑劑，在常用比例范圍內(nèi)，貼片黏性較低，因此鄰苯二甲酸二乙酯為增塑劑。

（2）增塑劑加入量的選擇：其他實驗條件不變，按表格加入不同量的鄰苯二甲酸二乙酯，依法制備貼劑。以鋼球平均滑行距離、殘留量為考核指標，對增塑劑鄰苯二甲酸二乙酯的加入量進行考察。

表5 增塑劑用量的選擇

結(jié)果表明，鄰苯二甲酸二乙酯的加入量為0.25%～0.5%時，黏性適中，貼于皮膚揭下后，皮膚上無壓敏膠殘留。

1.4.1.6 驗證試驗 根據(jù)單因素試驗結(jié)果，選擇壓敏膠∶增稠劑∶潤濕劑的比例為 100∶0.75∶0.25，提取物加入量為14%，增塑劑加入量為0.4%，以分散性、初黏力為考察指標，按5000片投料量制備涂料，結(jié)果表明，三批樣品的分散度均較好，鋼球平均滑行距離約為 4.2 cm，RSD值為0.83%。驗證結(jié)果表明該工藝穩(wěn)定可行。

1.4.2 貼劑成型工藝

1.4.2.1 濕膏重量的選擇 按表格稱取不同量的驗證工藝制備出的濕膏，均勻涂布在裱褙上，60℃干燥1 h，考察不同貼劑的濕膏重（不含布）對產(chǎn)品質(zhì)量的影響，確定貼劑的最佳濕膏重量［4－7］。

表6 濕膏重量的選擇

結(jié)果表明，當貼劑的濕膏重（不含布）最大為1.8 g時，貼劑的黏性較好，所以確定貼劑的最佳濕膏重量為1.8 g。

1.4.2.2 烘干溫度的選擇 選擇濕膏重量為 1.8 g，其他實驗條件不變制備貼劑，以初黏力為考核指標，考察不同烘干溫度對其的影響，確定貼劑的最佳烘干溫度［4－7］。

表7 烘干溫度的選擇

結(jié)果表明，當烘干溫度大于60℃時，貼劑的黏性均較好，考慮經(jīng)濟因素，所以確定貼劑的最佳烘干溫度為 60℃。

1.4.2.3 烘干時間的選擇 選擇濕膏重量為1.8 g，干燥溫度為60℃，其他條件不變制備貼劑，考察不同烘干時間對產(chǎn)品質(zhì)量的影響，確定貼劑的最佳烘干時間。

表8 烘干時間的選擇

結(jié)果表明，烘干時間為 30 min，物料未干，沒有誘發(fā)出其黏度，未制成貼劑；當烘干時間 60～90 min時貼劑的黏性均較好；超過 90 min，貼劑的黏度有下降的趨勢，考慮經(jīng)濟因素，所以確定貼劑的最佳烘干溫度為60 min。

綜上所述，貼劑最佳制備工藝為壓敏膠∶增稠劑∶潤濕劑比例為 100∶0.75∶0.25，載藥量為 14%，增塑劑用量為0.4%，取濕膏（不含布）1.8 g，烘干溫度 60℃，烘干時間 60 min。

按擬定的最佳制備工藝，按5000片貼劑投料量投料，制備樣品，結(jié)果制得樣品初黏力均值約為4.18 cm，持黏力均值約為8 min，剝離強度均值約為15 kg（詳細質(zhì)量分析方法和檢測結(jié)果、穩(wěn)定性等見《紅花祛風貼質(zhì)量標準及穩(wěn)定性研究》）。

2 初步藥理學實驗

2.1 紅花祛風帖緩解疼痛實驗 采用小鼠扭體法進行實驗。取昆明種小鼠隨機分為4組，每組12只。高、低劑量組實驗將小鼠腹部毛剪掉，去毛范圍為（2.0×2.0）cm2，受試面積為高劑量組 （1.5×1.5） cm2，低劑量組 （1.0×1.0） cm2，貼紅花祛風帖，對照組按原給藥方式，按高劑量組貼劑所含提取物量稱取提取物，加適量乙醇攪成糊狀，貼于小鼠去毛區(qū)（1.5×1.5） cm2，用醫(yī)用紗布固定好，30 min后每只小鼠腹腔注射0.6%乙酸0.1 mL×10 g-1體質(zhì)量，用計數(shù)器記錄15 min內(nèi)各只小鼠的扭體次數(shù)。

空白對照組的方法注射乙酸并記錄小鼠扭體次數(shù)?？瞻讓φ战M不貼貼劑，直接依法注射乙酸［8-10］，比較紅花祛風貼組和空白對照組的差異。

表9 紅花祛風帖小鼠緩解疼痛實驗研究

結(jié)果表明，與空白對照組比較，紅花祛風貼高、低劑量組和對照組均使乙酸所引起的小鼠扭體次數(shù)顯著降低 （P<0.05）。

2.2 急性毒性實驗 按5000 mg/kg體質(zhì)量的劑量，剪取紅花祛風貼（5.0×5.0） cm2，貼在豚鼠背部脫毛區(qū)（范圍10～10 cm2），用兩層硫酸紙覆蓋，用無刺激性膠布封閉固定，24 h后去除受試物，觀察動物中毒體征，觀察期7 d，第7天稱重 1次，實驗結(jié)束處死動物并觀察大體病理改變［10-12］。

表10 紅花祛風貼對豚鼠急性經(jīng)皮毒性實驗結(jié)果

結(jié)果表明，給予紅花祛風貼后，動物未出現(xiàn)中毒體征，觀察期動物無死亡，大體病理解剖學檢查未見異常，LD50均大于5000 mg/kg體質(zhì)量，紅花祛風貼對豚鼠皮膚急性毒性為實際無毒。

2.3 多次刺激性實驗 實驗前 24 h將豚鼠背部脊柱兩側(cè)毛剪掉，范圍各約 3 cm×3 cm。實驗時，剪取受試物貼在右側(cè)脫毛區(qū)，粘貼面積為2.5 cm×2.5 cm，用無刺激性膠布封閉固定1 h，左側(cè)脫毛區(qū)為對照，每天1次，連續(xù)14 d，從第2天開始，每次粘貼受試物前剪毛，用蒸餾水清除殘留受試物，1 h后觀察結(jié)果［10-12］。

表11 受試物對豚鼠多次皮膚刺激性實驗結(jié)果

使用紅花祛風貼第2天后，有2只動物受試部位皮膚依稀可見紅斑，平均每天每只動物積分均值為0.21，結(jié)果表明受試物對豚鼠多次皮膚刺激性為無刺激性。

3 小結(jié)與討論

貼劑已成為現(xiàn)代常用制劑之一，但市場上貼劑的質(zhì)量良莠不齊：有些貼在患者身上，只要稍加運動貼劑就會因汗液而脫離。而有些貼劑則是“貼上去容易撕下來難”，引起患者的疼痛感。究其原因主要是黏度調(diào)整的不好。因此本實驗首先以單因素和正交實驗并用的方法，以黏度為重點考核指標考察了涂料的制備工藝和貼劑的成型工藝，結(jié)果表明所選擇的工藝制備出的貼劑黏度適中，經(jīng)過項目組內(nèi)實驗室人員的親身試驗，自制貼劑粘在皮膚上在正?；顒拥那闆r下不會脫落，在取下時也不會有不適感。

同時本研究還對紅花祛風貼進行了初步藥理學實驗，結(jié)果表明紅花祛風貼高、低劑量組能顯著降低小鼠扭體次數(shù)（P<0.05），說明紅花祛風貼陣痛效果明顯，其經(jīng)皮給藥作用迅速，分析其可能與選用了合適的透皮吸收促進劑有關(guān)。急性毒性實驗表明紅花祛風貼的最大耐受量為5000 mg/kg，7 d后病理解剖學檢查未見異常，證明紅花祛風貼對豚鼠皮膚實際無毒；皮膚刺激性試驗證明紅花祛風貼對豚鼠皮膚無刺激性，但在多次刺激性實驗中，使用紅花祛風貼第2天后，有2只動物受試部位皮膚依稀可見紅斑，第8天恢復正常，平均每天每只動物積分均值為0.21，從動物積分均值來看自制貼劑無刺激性，但其是否具有長期毒性積累還需要未來更多的藥理學實驗來進行驗證。后續(xù)項目組還將對紅花祛風貼的工業(yè)化生產(chǎn)、皮膚轉(zhuǎn)運機制、量效關(guān)系等進行系統(tǒng)研究。