龔 勝，鄧樹(shù)勇，甘凌秀

（廣西壯族自治區(qū)畜牧研究所，廣西南寧 530001）

臨床上抗生素耐藥性是一個(gè)世界性問(wèn)題，大多數(shù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究認(rèn)為，食品性動(dòng)物耐藥性的主要因素是由于抗生素生長(zhǎng)促進(jìn)劑的使用，它們促使耐藥性的發(fā)展和傳播，威脅到許多疾病的控制能力（Chesson，2006）。雖然抗生素具有促生長(zhǎng)、提高飼料利用率和預(yù)防胃腸道感染等作用，但抗生素耐藥性是限制其使用的主要原因。目前全期已經(jīng)有幾種細(xì)菌對(duì)抗生素產(chǎn)生了耐藥性（Aarestrup，1995），引起世界衛(wèi)生組織（WHO）對(duì)抗生素耐藥性的廣泛關(guān)注，因此，歐盟在早些年就已全面禁止在飼料中添加抗生素。目前對(duì)腸球菌、鏈球菌、沙門(mén)氏菌、彎曲桿菌和大腸桿菌的治療也因抗生素耐藥性帶來(lái)一些問(wèn)題（Wegener，2006）。從豬身上分離的大腸桿菌也被證實(shí)對(duì)新霉素、土霉素、萘二酸和氯霉素產(chǎn)生了耐藥性（Loh等，2006）。因此，在動(dòng)物生產(chǎn)中尋找抗生素的替代品是急迫和重要的。已有大量研究表明，天然代謝產(chǎn)物對(duì)家禽生產(chǎn)具有重要作用，與活微生物相比，代謝物在貯存、運(yùn)輸?shù)确矫婢哂袃?yōu)勢(shì)。因此，本試驗(yàn)以肉仔雞為研究對(duì)象，評(píng)估日糧中添加不同水平的植物乳桿菌代謝物對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、糞微生物菌群、揮發(fā)性脂肪酸含量和小腸絨毛形態(tài)的影響，為有益菌代謝產(chǎn)物的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)選擇健康、體重一致的1日齡AA肉雞576只，隨機(jī)分為6組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)24只雞。試驗(yàn)采用單因素設(shè)計(jì)，共6種日糧，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧+80 mg/kg新霉素，處理組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.1%，0.2%，0.3%，0.4和0.5%的植物乳桿菌代謝產(chǎn)物（購(gòu)自北京英惠爾生物科技有限公司）。本試驗(yàn)分為1～21 d和22～42 d兩個(gè)階段，共進(jìn)行42 d。基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 1～41 d各組日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.2 數(shù)據(jù)和樣品收集 每周對(duì)各重復(fù)雞只進(jìn)行個(gè)體稱重，統(tǒng)計(jì)飼料用量。試驗(yàn)結(jié)束后計(jì)算試驗(yàn)全期各重復(fù)雞只的總增重、平均日增重、平均日采食量和飼料轉(zhuǎn)化率。

1.3 糞細(xì)菌和揮發(fā)性脂肪酸含量的測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)束前3 d每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選擇5只雞連續(xù)收集糞樣，將每只雞連續(xù)3 d的糞樣混合，參考Foo等（2003）的研究方法測(cè)定糞中大腸桿菌和乳酸桿菌的含量。剩余糞樣-20℃保存，取1 g樣品，加入1 mL用1.5 mol/L硫酸稀釋的24%偏磷酸。參考Jin等（1998）的研究方法測(cè)定糞中總揮發(fā)性脂肪酸（VFA）、乙酸、丙酸、丁酸和其他VFA的含量。

1.4 小腸絨毛形態(tài) 試驗(yàn)結(jié)束后，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選擇3只雞進(jìn)行屠宰，收集小腸腸段，將十二指腸、空腸、回腸分離后，用于測(cè)定各腸段絨毛高度、隱窩深度及絨毛高度與隱窩深度比值。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS（19.0版）單因素方差分析（One-way ANOVA），以不同水平植物乳桿菌代謝產(chǎn)物為方差分析的主因素，各組差異用Tukey法進(jìn)行多重比較，P＜0.05判定為差異顯著，結(jié)果以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同水平植物乳桿菌代謝產(chǎn)物對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響 由表2可知，處理4組較對(duì)照組、處理1組、3組和5組顯著提高了42 d肉雞末重、總增重和平均日增重（P＜0.05），其他組之間對(duì)上述指標(biāo)無(wú)顯著影響（P＞0.05）。各組對(duì)肉雞平均日采食量無(wú)顯著影響。處理1組和處理3組較處理4組顯著提高了肉雞飼料轉(zhuǎn)化率（P＜0.05），其他組之間對(duì)飼料轉(zhuǎn)化率無(wú)顯著影響（P＞0.05）。

2.2 不同水平植物乳桿菌代謝產(chǎn)物對(duì)肉雞糞中微生物菌群和揮發(fā)性脂肪酸含量的影響 由表3可知，對(duì)照組與植物乳桿菌代謝產(chǎn)物組對(duì)糞中乳酸桿菌含量無(wú)顯著影響（P＞0.05）。對(duì)照組較各植物乳桿菌代謝產(chǎn)物組顯著提高了糞中大腸桿菌含量（P＜0.05），植物乳桿菌代謝產(chǎn)物組之間對(duì)糞中大腸桿菌含量無(wú)顯著影響（P＞0.05）。對(duì)照組與植物乳桿菌代謝產(chǎn)物組對(duì)糞中丙酸和其他揮發(fā)性脂肪酸的含量均無(wú)顯著影響（P＞0.05）。與處理4組相比，對(duì)照組、處理1、2、5組顯著降低了糞中乙酸含量（P＜0.05），處理3組與處理4組對(duì)糞中乙酸含量的影響無(wú)顯著差異（P＞0.05）。處理1組較處理3、4和5組顯著提高了糞中丁酸含量（P＜0.05）。處理4組總揮發(fā)性脂肪酸含量最高，顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。

表2 不同水平植物乳桿菌代謝產(chǎn)物對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

2.3 不同水平植物乳桿菌代謝產(chǎn)物對(duì)肉雞小腸絨毛形態(tài)的影響 由表4可知，處理4組十二指腸和空腸絨毛高度顯著高于其他各組（P＜0.05），處理2組和3組十二指腸絨毛高度顯著高于對(duì)照組、處理1和5組（P＜0.05），處理2組空腸絨毛高度顯著高于對(duì)照組、處理4和5組（P＜0.05）。處理1組回腸絨毛高度最高（P＜0.05）。對(duì)照組和處理1組十二指腸和空腸隱窩深度顯著高于處理4組和處理5組（P＜0.05），但對(duì)照組回腸隱窩深度最低（P＜0.05）。各組對(duì)小腸絨毛高度與隱窩深度比值的影響與對(duì)絨毛高度和隱窩深度的影響一致。

3 討論

3.1 日糧添加不同水平植物乳桿菌代謝物對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響 本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，日糧添加0.4%植物乳桿菌代謝產(chǎn)物較對(duì)照組、0.1%、0.3%和0.5%植物乳桿菌代謝物組顯著提高了42 d肉雞末重、總增重和平均日增重，而0.1%和0.3%植物乳桿菌代謝物組較0.4%組顯著提高了肉雞飼料轉(zhuǎn)化率。研究表明，有益菌的代謝產(chǎn)物是抗生素的潛在替代物，其抗菌效果與抗生素相似（Loh等，2006）。Foo等（2003）用乳酸菌喂斷奶后的大鼠發(fā)現(xiàn)，乳酸菌可以提高大鼠的生長(zhǎng)速度，Ogunbanwo等（2004）用植物乳桿菌代謝物飼喂肉雞，得到的生長(zhǎng)性能結(jié)果與本試驗(yàn)結(jié)果一致。抗菌素對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)性能的改善作用主要在于其對(duì)胃腸道的抑菌、殺菌作用，其殺菌作用已在SPF動(dòng)物上得到證實(shí)（Butaye等，2003）。抗生素的作用機(jī)制主要包括降低由細(xì)菌產(chǎn)生的毒素，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收率，降低亞臨床感染的發(fā)生率（Butaye等，2003）

表3 不同水平植物乳桿菌代謝產(chǎn)物對(duì)肉雞糞中微生物菌群的影響

表4 不同水平植物乳桿菌代謝產(chǎn)物對(duì)肉雞小腸絨毛形態(tài)的影響

3.2 日糧添加不同植物乳桿菌代謝產(chǎn)物對(duì)糞中細(xì)菌及揮發(fā)性脂肪酸含量的影響 對(duì)照組較各植物乳桿菌代謝產(chǎn)物組顯著提高了糞中大腸桿菌含量。與0.4%植物乳桿菌代謝物組相比，對(duì)照組、0.1%、0.3%和0.5%植物乳桿菌代謝物組顯著降低了糞中乙酸含量，0.4%植物乳桿菌代謝物組總揮發(fā)性脂肪酸含量最高。本試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了植物乳桿菌代謝物的作用，可以減少胃腸道大腸桿菌的含量，與Savadogo等（2004）的研究結(jié)果一致，認(rèn)為有益菌代謝產(chǎn)物有廣泛的抗菌活性，可以從多方面抑制病原體，如革蘭氏陽(yáng)性菌（芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、肺炎鏈球菌等）和革蘭氏陰性菌（大腸桿菌）。代謝產(chǎn)物可以降低胃腸道大腸桿菌感染風(fēng)險(xiǎn)（Pascual等，1999）。乳酸菌的作用機(jī)制主要從兩個(gè)方面，即作用位點(diǎn)和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；此外，除了腸道本事的物理屏障外，乳酸菌不利于有害菌的繁殖，代謝產(chǎn)物具有抗菌功能（Reid，2000）。日糧添加植物乳桿菌代謝物提高了糞中揮發(fā)性脂肪酸的含量，肉雞糞揮發(fā)性脂肪酸增加的主要原因之一是隨著代謝物的添加量升高，可以提高其他腸道發(fā)酵物質(zhì)的含量，如乳糖、生物胺等（Gibson和 Fuller，2000）。

3.3 日糧添加不同水平植物乳桿菌代謝物對(duì)小腸絨毛形態(tài)的影響 0.4%代謝物組十二指腸和空腸絨毛高度顯著高于其他各組，0.2%和0.3%代謝物組十二指腸絨毛高度顯著高于對(duì)照組、0.1%和0.5%代謝物組，0.2%代謝物組空腸絨毛高度顯著高于對(duì)照組、0.1%和0.5%代謝物組，上述結(jié)果與Savadogo等（2004）研究結(jié)果一致。絨毛是小腸對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收的重要組成部分。絨毛高度越大，腸道上皮的表面積相應(yīng)增加，可以促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。絨毛作為腸屏障對(duì)防御病原菌的入侵也具有積極作用，病原菌在腸上皮內(nèi)正常菌群中可能會(huì)改變絨毛的滲透性，從而導(dǎo)致病原菌的入侵，影響?zhàn)B分的吸收和代謝（Podolsky，1993）。植物乳桿菌代謝物含有抗菌成分和有機(jī)酸，可以抑制病原菌的生長(zhǎng)，從而降低細(xì)菌在腸上皮細(xì)胞定植的風(fēng)險(xiǎn)，減少腸黏膜的感染。

4 結(jié)論

日糧添加植物乳桿菌代謝產(chǎn)物可以改善肉雞生長(zhǎng)性能，降低糞中大腸桿菌含量，提高小腸絨毛高度和糞中揮發(fā)性脂肪酸含量，其中日糧添加0.2%和0.4%植物乳桿菌代謝產(chǎn)物對(duì)肉雞增重、飼料轉(zhuǎn)化率和絨毛高度的影響表現(xiàn)最佳。