蔣蒙 劉亞允 梁雪松

乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染是在我國(guó)乃至全球都非常普遍的問(wèn)題，據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球有超過(guò)20億人曾感染過(guò)HBV[1]。慢性HBV感染和肝硬化、肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，并導(dǎo)致每年約70萬(wàn)人死亡[2]，嚴(yán)重危害人類健康。

HBV感染人體后并不直接導(dǎo)致肝細(xì)胞病變，而是由宿主免疫介導(dǎo)的病毒清除和炎癥造成肝細(xì)胞損傷，因此，宿主的免疫應(yīng)答對(duì)HBV感染的臨床轉(zhuǎn)歸具有重要意義。然而慢性HBV感染者病毒特異性T細(xì)胞往往功能低下或存在免疫耐受，導(dǎo)致機(jī)體難以產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答清除病毒，且其機(jī)制不完全清楚[3]。證據(jù)表明，機(jī)體內(nèi)存在一類免疫抑制細(xì)胞，能夠抑制CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞等分化、增殖和效應(yīng)功能，從而不利于HBV的自發(fā)清除，如來(lái)源于T淋巴細(xì)胞的CD4+CD25hiFoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)。近年來(lái)，研究者同樣在B細(xì)胞群中發(fā)現(xiàn)一類具有免疫抑制功能的細(xì)胞亞群，并將其命名為調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(Breg)。本文擬對(duì)Breg細(xì)胞的來(lái)源、分化、免疫調(diào)控機(jī)制以及在慢性HBV感染中的作用等研究現(xiàn)狀進(jìn)行綜述。

一、Breg細(xì)胞的來(lái)源和分化

Breg細(xì)胞來(lái)源于B細(xì)胞，是B細(xì)胞的一種亞型。B細(xì)胞在骨髓中分化和發(fā)育成熟后遷移到外周免疫器官，受到抗原刺激并分化增殖為能夠分泌特異性抗體的漿細(xì)胞，發(fā)揮體液免疫的功能。在一定條件下，未成熟B細(xì)胞、成熟B細(xì)胞和漿細(xì)胞均可被誘導(dǎo)分化成為Breg細(xì)胞，該過(guò)程需要多種信號(hào)通路刺激和介導(dǎo)，按照條件刺激來(lái)源可分為內(nèi)源性信號(hào)通路和外源性信號(hào)通路[4]。

(一)Breg細(xì)胞的內(nèi)源性信號(hào)通路

1.CD80/CD86通路：CD80和CD86是活化T細(xì)胞時(shí)的協(xié)同刺激因子，CD80/CD86表達(dá)于活化B淋巴細(xì)胞、活化T淋巴細(xì)胞、外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)及樹突狀細(xì)胞等，在自身免疫監(jiān)控、體液免疫應(yīng)答及移植反應(yīng)等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。有研究發(fā)現(xiàn)，多發(fā)性硬化(MS)患者在治療后，Breg細(xì)胞表面的CD80/CD86水平較治療前顯著降低。

2．CD40/CD40L通路：CD40/CD40L通路是機(jī)體獲得性免疫中的一條重要的信號(hào)通路， CD40與其配體CD40L結(jié)合是體內(nèi)Breg細(xì)胞激活的基本路徑之一。CD40屬于腫瘤壞死因子(TNF)受體超家族成員，其作用在許多病理過(guò)程中均得到證實(shí)。有研究[5]報(bào)道，CD40缺陷的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓膜炎(EAE)小鼠Breg細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素-10(IL-10)的能力明顯降低，同時(shí)伴有Thl和Thl7表達(dá)顯著升高。

3.B細(xì)胞活化因子(BAFF)： BAFF是TNF家族的B細(xì)胞活化因子成員之一， 許多研究證實(shí)，BAFF與B淋巴細(xì)胞的激活、分化和增殖有著密切的聯(lián)系。近期研究[6]發(fā)現(xiàn)，低劑量的BAFF可促進(jìn)B淋巴細(xì)胞發(fā)育成熟，并分化為能夠分泌IL-10的Breg細(xì)胞。

4.內(nèi)源性抗原的刺激信號(hào)： Fillatreau等[7]證實(shí)，同源性抗原的刺激和功能性B細(xì)胞受體(BCR)可促進(jìn)Breg細(xì)胞的生成。在內(nèi)源性抗原作用下，B淋巴細(xì)胞可分化增殖為具有抗體分泌功能的漿細(xì)胞，但與此同時(shí)，B淋巴細(xì)胞或漿細(xì)胞也可因抗原刺激而向Breg細(xì)胞方向分化，通過(guò)免疫負(fù)向調(diào)節(jié)功能對(duì)機(jī)體起到免疫制衡的作用。

(二)Breg細(xì)胞的外源性信號(hào)通路 Toll樣受體(TLR)是參與機(jī)體固有免疫的一類重要信號(hào)通路，也是連接固有免疫和獲得性免疫的橋梁。當(dāng)外源性刺激突破機(jī)體的物理屏障(如皮膚、黏膜等)時(shí)，TLR可對(duì)其進(jìn)行識(shí)別并促進(jìn)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。同時(shí)，表達(dá)于B細(xì)胞表面的TLR也可刺激B細(xì)胞向Breg細(xì)胞方向分化，起到免疫抑制的負(fù)向調(diào)節(jié)作用。

二、Breg細(xì)胞的表型及其免疫調(diào)控機(jī)制

Breg細(xì)胞表型繁多，就目前所知，Breg細(xì)胞尚無(wú)明確的特異性表型，但可以明確的一點(diǎn)是，所有的Breg均具有負(fù)向免疫調(diào)節(jié)作用，且凡是具有分泌免疫抑制功能細(xì)胞因子的B細(xì)胞均可成為Breg細(xì)胞，因此有學(xué)者根據(jù)其分泌的功能性抗體來(lái)命名，如將分泌IL-10的CD1dhiCD5+B細(xì)胞稱為B10細(xì)胞[8]。Breg細(xì)胞可分泌IL-10等細(xì)胞因子抑制機(jī)體的免疫應(yīng)答，通過(guò)FasL、程序性死亡因子1配體(PD-L1)途徑直接誘導(dǎo)效應(yīng)細(xì)胞凋亡，此外，Breg細(xì)胞還可以通過(guò)細(xì)胞間接觸影響Treg細(xì)胞的數(shù)量及功能來(lái)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。迄今為止已有大量研究證實(shí)，Breg細(xì)胞在多種疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中均發(fā)揮著重要的作用。

(一)分泌細(xì)胞因子 Breg細(xì)胞主要以IL-10的分泌介導(dǎo)負(fù)向免疫調(diào)控。有報(bào)道指出EAE小鼠癥狀顯著加劇的主要原因是分泌IL-10的Breg細(xì)胞缺陷[5]。此外，在炎癥性腸病(IBD)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)等多種實(shí)驗(yàn)性驗(yàn)證小鼠體內(nèi)，Breg細(xì)胞均可被激活并分泌IL-10，從而抑制炎癥進(jìn)展和促進(jìn)疾病恢復(fù)。除動(dòng)物實(shí)驗(yàn)以外，大量研究證實(shí)人類也具有與小鼠Breg細(xì)胞類似的負(fù)向免疫調(diào)節(jié)功能。Simma等[9]用BCR和CD40刺激健康人靜脈血分離B細(xì)胞，證實(shí)Breg細(xì)胞同樣存在于人體，并通過(guò)分泌IL-10等細(xì)胞因子參與機(jī)體的負(fù)向免疫調(diào)節(jié)。

IL-35是最近發(fā)現(xiàn)的一種具有免疫抑制功能的細(xì)胞因子。Fillatreau等[10]在小鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)IgM+CD138hiTACI+CXCR4+CDldintTim-1int漿細(xì)胞除分泌IL-10以外，還具有分泌IL-35的功能。該研究發(fā)現(xiàn)，缺乏分泌IL-35Breg細(xì)胞的EAE小鼠和MS小鼠病情顯著惡化，但這類小鼠對(duì)沙門氏菌感染表現(xiàn)出明顯改善的抵抗力。此外，CD19+CD38+CDld+IgM+CD147+B細(xì)胞能夠分泌顆粒酶B(Granzyme B)、吲哚胺2，3-雙氧化酶(IDO)[11-12]，CD39+CD73+B細(xì)胞能夠分泌腺苷(Adenosine)[11，13]，抑制樹突狀細(xì)胞成熟和巨噬細(xì)胞功能。還有一些Breg細(xì)胞亞型可通過(guò)分泌轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)抑制效應(yīng)T細(xì)胞功能，誘導(dǎo)效應(yīng)T細(xì)胞凋亡，并產(chǎn)生效應(yīng)分子減輕機(jī)體炎癥反應(yīng)[11]。

(二)誘導(dǎo)效應(yīng)細(xì)胞凋亡 一些Breg亞型細(xì)胞膜表面可表達(dá)FasL、PD-L1等分子，直接誘導(dǎo)效應(yīng)細(xì)胞凋亡。有研究發(fā)現(xiàn)，血吸蟲性肉芽腫患者外周血B細(xì)胞表面表達(dá)高水平FasL，可通過(guò)直接誘導(dǎo)CD4+T淋巴細(xì)胞凋亡促進(jìn)疾病的恢復(fù)[14]。此外，在HIV感染者外周血中，分泌IL-10的Breg細(xì)胞同時(shí)也表達(dá)PD-L1分子，可直接抑制CD8+T淋巴細(xì)胞對(duì)HIV的殺傷作用，而通過(guò)清除B細(xì)胞或阻斷IL-10和PD-L1通路可上調(diào)CD8+T淋巴細(xì)胞的比例[15]。這說(shuō)明Breg細(xì)胞可能通過(guò)PD-L1和IL-10協(xié)同機(jī)制發(fā)揮對(duì)效應(yīng)細(xì)胞的抑制功能。

(三)誘導(dǎo)產(chǎn)生Treg細(xì)胞 Breg細(xì)胞還可以通過(guò)細(xì)胞間接觸介導(dǎo)Treg細(xì)胞表達(dá)水平上調(diào)，并參與維持Treg細(xì)胞功能，從而進(jìn)一步調(diào)控細(xì)胞免疫反應(yīng)的進(jìn)展。研究表明，分泌IL-10的Breg細(xì)胞可能具有誘導(dǎo)產(chǎn)生Treg細(xì)胞的作用，并且在小鼠中發(fā)現(xiàn)靶向清除分泌IL-10的Breg細(xì)胞可顯著降低Treg細(xì)胞水平，而過(guò)繼性回輸B細(xì)胞可重塑Treg細(xì)胞的數(shù)量及功能[16]。

三、Breg細(xì)胞在慢性HBV感染中的作用

慢性HBV感染者的免疫特征為病毒特異性T細(xì)胞功能缺失或耗竭，具體表現(xiàn)為抗病毒細(xì)胞因子水平低下和(或)HBV特異性細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)活性下降以及T細(xì)胞免疫失衡等[17]。既往有文獻(xiàn)報(bào)道，造成這種免疫衰竭的機(jī)制包括持續(xù)高病毒復(fù)制、病毒基因突變等病毒因素，以及PD-1/PD-L1途徑、Treg細(xì)胞高表達(dá)以及Treg/Th17免疫失衡等免疫調(diào)節(jié)因素。此外，Breg細(xì)胞還可以通過(guò)多種機(jī)制抑制機(jī)體的T細(xì)胞免疫，阻礙機(jī)體產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答清除病毒。

(一)IL-10 既往研究表明，Breg細(xì)胞可通過(guò)IL-10的分泌抑制CTL的細(xì)胞殺傷作用，抑制CD4+T淋巴細(xì)胞增殖和分泌INF-γ等炎癥因子，促進(jìn)初始CD4+T淋巴細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化，并抑制其向Th1分化[5]。Das等[18]發(fā)現(xiàn)，在慢性HBV感染的過(guò)程中，CHB患者外周血IL-10和分泌IL-10的Breg細(xì)胞水平顯著升高，且升高水平和HBV載量及肝臟炎癥活動(dòng)呈正相關(guān)，在體外阻斷IL-10可恢復(fù)HBV特異性T細(xì)胞的功能。分泌IL-10的Breg細(xì)胞表型為CD19+CD24hiCD38hiB細(xì)胞，CD19+CD24hiCD38hi細(xì)胞通過(guò)IL-10的分泌抑制HBV特異性CD8+T細(xì)胞反應(yīng)。Gong等[19]也證實(shí)CHB患者分泌IL-10的Breg細(xì)胞、IL-10水平均高于急性乙型肝炎患者和健康者，而Th1水平明顯降低，且Th1水平同分泌IL-10的Breg細(xì)胞水平呈負(fù)相關(guān)。Liu等[20]則證實(shí)CHB患者CD24hiCD38hiBreg細(xì)胞通過(guò)IL-10的分泌抑制Th1和Th17極化反應(yīng)，并促進(jìn)CD4+T細(xì)胞向Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)化。這些研究均表明Breg細(xì)胞可通過(guò)IL-10的分泌參與慢性HBV感染的免疫調(diào)節(jié)。

(二)IL-35 IL-35屬于IL-12家族，可促進(jìn)CD4+CD25+Treg細(xì)胞擴(kuò)增，并直接抑制CD4+CD25-效應(yīng)T細(xì)胞和Th17細(xì)胞極化，從而參與宿主免疫調(diào)節(jié)過(guò)程，影響感染性疾病的進(jìn)展。最近有研究[21]證實(shí)，分泌IL-35的Breg細(xì)胞及IL-35亦參與慢性HBV感染的進(jìn)程，但目前分泌IL-35的Breg細(xì)胞表型尚不明確。該研究表明，在抗病毒治療前，CHB患者外周血中分泌IL-35的Breg細(xì)胞及IL-35水平均升高，且炎癥程度低的患者外周血分泌IL-35的Breg細(xì)胞水平及IL-35水平高于炎癥程度高的患者，這說(shuō)明在肝臟炎癥的低活動(dòng)期分泌IL-35的Breg細(xì)胞及IL-35的高表達(dá)可抑制機(jī)體的免疫應(yīng)答，阻礙HBV的自發(fā)清除。

(三)Treg細(xì)胞 目前已有大量研究證實(shí)，Treg細(xì)胞在慢性HBV感染的過(guò)程中發(fā)揮重要的免疫抑制作用，而Breg細(xì)胞可通過(guò)細(xì)胞間接觸誘導(dǎo)Treg細(xì)胞的分化增殖[16]，介導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA-4)表達(dá)水平上調(diào)。CTLA-4和PD-1均是由活化T淋巴細(xì)胞表達(dá)的抑制性受體，在體內(nèi)PD-1分子和CTLA-4結(jié)合可抑制效應(yīng)T細(xì)胞活化。這說(shuō)明Breg細(xì)胞對(duì)Treg細(xì)胞的數(shù)量及功能均具有重要的調(diào)節(jié)作用，但Gong[18]等研究發(fā)現(xiàn)，清除CHB患者PBMC中的Treg細(xì)胞并不降低Breg細(xì)胞比例和IL-10水平，提示相對(duì)于Treg細(xì)胞而言，Breg細(xì)胞可能是IL-10的主要來(lái)源，且其對(duì)CHB患者的免疫調(diào)節(jié)不依賴于Treg細(xì)胞。

四、總結(jié)和展望

綜上所述，Breg細(xì)胞可通過(guò)多種機(jī)制負(fù)向調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答，這種負(fù)向調(diào)節(jié)作用一方面可抑制機(jī)體過(guò)度的炎癥反應(yīng)，對(duì)機(jī)體起到保護(hù)作用，但另一方面，也可能促進(jìn)病原體逃逸機(jī)體免疫監(jiān)視，從而利于病原體生存。在慢性HBV感染過(guò)程中，Breg細(xì)胞可通過(guò)IL-10、IL-35等細(xì)胞因子的分泌抑制宿主HBV特異性T細(xì)胞的免疫應(yīng)答，同時(shí)通過(guò)細(xì)胞間接觸誘導(dǎo)Treg細(xì)胞分化增殖和介導(dǎo)CTLA-4表達(dá)水平上調(diào)，從而在慢性HBV感染者的疾病進(jìn)展和臨床轉(zhuǎn)歸過(guò)程中發(fā)揮重要作用。研究證明，Breg細(xì)胞可能是IL-10等細(xì)胞因子的主要來(lái)源，CHB患者Breg細(xì)胞對(duì)Treg細(xì)胞具有調(diào)節(jié)作用，而清除Treg細(xì)胞對(duì)Breg細(xì)胞的比例則無(wú)影響。因此Breg細(xì)胞可能成為比Treg細(xì)胞更好的免疫治療靶點(diǎn)，抑制或清除Breg細(xì)胞可能有助于清除細(xì)胞內(nèi)的病原體，提高CHB患者抗病毒治療的效果，甚至為CHB患者的治療尋找到一條新的路徑。