余姝毅，連若純，曾勇，李玉葉

(深圳中山泌尿外科醫(yī)院生殖中心，深圳市圍著床期生殖免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，深圳中山生殖與遺傳研究所，深圳 518045)

在胚胎種植和發(fā)育過程中，子宮蛻膜局部聚集了多種免疫細(xì)胞，其數(shù)量和功能直接影響到妊娠的維持和發(fā)展。蛻膜免疫細(xì)胞主要包括自然殺傷細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，T細(xì)胞，樹突狀細(xì)胞及少量B細(xì)胞。近年來，免疫細(xì)胞在母胎界面的調(diào)控作用及其分子機(jī)制，已成為生殖免疫學(xué)研究的熱點(diǎn)。然而以往的報(bào)道主要是對(duì)母體蛻膜自然殺傷細(xì)胞(NK cells)，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞等免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的研究，而對(duì)CD8+T細(xì)胞的關(guān)注較少。本文主要從蛻膜CD8+T細(xì)胞的含量，活化及功能等方面闡述近年來蛻膜CD8+T細(xì)胞在妊娠過程中的研究進(jìn)展。

一、蛻膜CD8+T細(xì)胞的含量

研究發(fā)現(xiàn)在孕早期，CD3+T細(xì)胞占蛻膜免疫細(xì)胞的10%左右[1]，其含量僅次于自然殺傷細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，隨著孕周的增大，CD3+T細(xì)胞在蛻膜中的含量逐漸升高，在妊娠中期達(dá)到17%[2]。和外周血中相反，蛻膜CD3+CD8+T細(xì)胞的比例高于CD3+CD4+T細(xì)胞，其中45-75%的T細(xì)胞為CD8+T細(xì)胞，30%～45%為CD4+T細(xì)胞[1，3-4]。Klentzeris等[5]發(fā)現(xiàn)在種植窗期CD8+T細(xì)胞顯著增多，提示CD8+T細(xì)胞在胚胎種植過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。Galgani等[6]的研究顯示與正常對(duì)照相比，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者蛻膜CD8+T細(xì)胞數(shù)量顯著增加。而Lachapelle等[7]卻得出了相反的結(jié)果，即復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者的蛻膜中，CD8+T細(xì)胞數(shù)量明顯減少。這兩篇完全相反的結(jié)論，可能是由于檢測人群，樣本量和實(shí)驗(yàn)條件等因素的差異而造成的，因此蛻膜CD8+T細(xì)胞的數(shù)量在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者蛻膜中是否發(fā)生變化以及CD8+T細(xì)胞的變化是否導(dǎo)致流產(chǎn)的發(fā)生，還需深入研究和探討。

二、蛻膜CD8+T細(xì)胞的細(xì)胞表型

記憶型CD8+T分為中央記憶型T(central memory T，TCM)細(xì)胞和效應(yīng)記憶型T(effector memory T，TEM)細(xì)胞。CD45RO+TEM僅占外周血T細(xì)胞的30%，而在蛻膜中，這個(gè)比例達(dá)到60%，這提示我們CD8+T細(xì)胞在母胎界面受到激活，其免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[8]，因此關(guān)于蛻膜CD8+T細(xì)胞的表型和功能的研究尤為重要。與外周血CD8+T細(xì)胞相比，妊娠早期的蛻膜CD8+T細(xì)胞不僅增殖能力提高，而且表達(dá)多種活化分子如CD69、HLA-DR、CD38、CD63等[9-10]，呈活化狀態(tài)。多篇文獻(xiàn)已報(bào)道發(fā)現(xiàn)蛻膜CD8+T細(xì)胞具有抗原特異性[11-12]。雖然母胎界面的CD8+T細(xì)胞被認(rèn)為是識(shí)別胎兒HLA抗原并回應(yīng)的主要候選細(xì)胞[13-14]，但目前尚未有證據(jù)證明是胚胎抗原激活了CD8+T細(xì)胞。

近年來，越來越多的研究關(guān)注CD8+CD122+PD-1+Treg細(xì)胞，與傳統(tǒng)CD4+Treg細(xì)胞相比，它具有更強(qiáng)的抑制同種異體排斥反應(yīng)能力和更高效的增殖能力[15-16]。有研究指出人胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞能激活CD8+Treg細(xì)胞，并表達(dá)抑制分子CD101和CD103[17]，Uss等[18]報(bào)道CD103的表達(dá)標(biāo)志著同種異體抗原誘導(dǎo)的CD8+Treg細(xì)胞將產(chǎn)生大量免疫抑制因子IL-10。林羿教授團(tuán)隊(duì)的研究發(fā)現(xiàn)，CD8+CD122+PD-1+Treg細(xì)胞大量聚集在早期妊娠蛻膜中，并且在母胎免疫抑制中起重要作用[10]。

蛻膜CD8+T細(xì)胞根據(jù)其上是否表達(dá)CD28，可分為CD8+CD28+和CD8+CD28-T細(xì)胞。與外周血CD8+CD28-T細(xì)胞相比較，蛻膜CD8+CD28-T細(xì)胞幾乎不表達(dá)穿孔素[9]。研究證實(shí)蛻膜CD8+T細(xì)胞大部分為CD8+CD28-T細(xì)胞。CD8+CD28-T為抑制性CD8+T細(xì)胞，通常也表達(dá)CD103分子，具有類似于調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的功能，是一組具有免疫調(diào)節(jié)功能的細(xì)胞群，在維持機(jī)體免疫功能穩(wěn)態(tài)及建立母胎免疫耐受中發(fā)揮重要作用[19]。此類CD8+T細(xì)胞通過細(xì)胞間直接接觸機(jī)制改變抗原提呈細(xì)胞表面抑制受體(ILT3、ILT4)和協(xié)同刺激分子表達(dá)，并分泌抑制性細(xì)胞因子(IL-10等)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能[20]。

三、蛻膜CD8+T細(xì)胞的來源

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，趨化因子CXCR3和CCL5的內(nèi)源性表達(dá)不足會(huì)限制小鼠蛻膜中T細(xì)胞的聚集[21]，證實(shí)趨化因子與CD8+T細(xì)胞在母胎界面的招募相關(guān)。但目前還無法檢測出在人體中是哪些因子促使外周血的CD8+T細(xì)胞募集到蛻膜組織，且蛻膜CD8+T細(xì)胞是否在蛻膜局部大量擴(kuò)增，也有待深入研究。

四、蛻膜CD8+T細(xì)胞發(fā)揮的主要作用

1.殺傷作用

研究證明，正常未孕女性的子宮內(nèi)膜CD8+T細(xì)胞發(fā)揮的作用和外周血CD8+T細(xì)胞相似，具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性。然而到分泌期，其毒性作用幾乎消失。在母胎界面CD8+T細(xì)胞毒性作用的這種“開關(guān)式”的調(diào)節(jié)，為黃體中期胚胎種植提供了有利的環(huán)境，使得母體對(duì)胚胎不產(chǎn)生排斥反應(yīng)。同時(shí)也提示了CD8+T細(xì)胞在母胎界面免疫耐受的調(diào)節(jié)中發(fā)揮關(guān)鍵作用[22]。

Tilburgs教授團(tuán)隊(duì)的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)與外周血CD8+T相比，蛻膜CD8+T細(xì)胞的顆粒酶和穿孔素的表達(dá)顯著降低，但顆粒酶和穿孔素mRNA仍保持高水平，因此作者推測，母體可能通過microRNA等調(diào)控了顆粒酶和穿孔素的轉(zhuǎn)錄后或翻譯后修飾，使得翻譯過程受阻，進(jìn)而影響蛋白的表達(dá)[23]。但是在感染等炎癥環(huán)境下，蛻膜CD8+T細(xì)胞的殺傷功能會(huì)相應(yīng)升高，但仍低于外周血CD8+T細(xì)胞[24]。此外，Scaife 等[25]的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果則顯示蛻膜CD8+T細(xì)胞對(duì)P815細(xì)胞系有較強(qiáng)的細(xì)胞殺傷及毒性作用。然而這一證據(jù)并不能說明蛻膜CD8+T細(xì)胞對(duì)母體內(nèi)胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞具有殺傷作用，因此在母胎界面滋養(yǎng)層細(xì)胞如何調(diào)控蛻膜 CD8+T細(xì)胞的殺傷及毒性作用還需進(jìn)一步探討。

2.分泌細(xì)胞因子

Th1/Th2免疫平衡的維持對(duì)正常妊娠尤為重要，和CD4+T細(xì)胞一樣，蛻膜CD8+T細(xì)胞也可以通過分泌細(xì)胞因子參與母胎界面免疫平衡的調(diào)節(jié)。在妊娠早期，蛻膜CD8+T細(xì)胞可分泌大量的細(xì)胞因子如IL-8，參與調(diào)控母胎界面的免疫耐受[25]。日本學(xué)者研究結(jié)果顯示，蛻膜CD8+T細(xì)胞表達(dá)Th2型細(xì)胞因子的特異性分子標(biāo)記物CRTH2，提示蛻膜CD8+T細(xì)胞能分泌Th2型細(xì)胞因子[26]；Powell等[27]發(fā)現(xiàn)蛻膜CD8+T細(xì)胞不僅可以分泌IFN-γ，還有1.2%的CD8+T細(xì)胞分泌IL-4，而在外周血中這個(gè)比例僅有0.7%；此外，Piccinni等[28-29]發(fā)現(xiàn)，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者蛻膜CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的LIF、IL-4及IL-10的表達(dá)明顯降低，這進(jìn)一步說明蛻膜CD8+T細(xì)胞可通過分泌Th2型細(xì)胞因子參與調(diào)控母胎界面的免疫耐受。Blois等[30]在小鼠實(shí)驗(yàn)中，證實(shí)CD8+T通過孕酮誘導(dǎo)的封閉因子(PIBF)維持母胎界面Th1/Th2的免疫平衡；CD8+T細(xì)胞去除后，促炎細(xì)胞因子表達(dá)增加，導(dǎo)致流產(chǎn)。因此，蛻膜CD8+T細(xì)胞在維持母胎界面細(xì)胞因子免疫平衡中發(fā)揮著舉足輕重的作用。

3.與滋養(yǎng)層細(xì)胞的相互作用

母體蛻膜T細(xì)胞與胎兒絨毛外滋養(yǎng)層(EVT)細(xì)胞有直接接觸[27]，研究發(fā)現(xiàn)滋養(yǎng)層細(xì)胞可顯著促進(jìn)CD8+T細(xì)胞的增殖，抑制CD8+T細(xì)胞毒性，并誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞分泌IL-10等細(xì)胞因子；進(jìn)一步的機(jī)制研究揭示滋養(yǎng)層細(xì)胞表達(dá)的sHLA-G可與CD8分子結(jié)合促進(jìn)CD8+T細(xì)胞表達(dá)CD95L，通過活化性細(xì)胞死亡(AICD)效應(yīng)，使活化CD8+T細(xì)胞發(fā)生凋亡，從而避免T細(xì)胞的過度活化[31]，提示滋養(yǎng)層細(xì)胞在母胎界面的免疫平衡的形成過程中發(fā)揮重要作用。此外，Scaife等[25]研究發(fā)現(xiàn)活化的蛻膜CD8+T細(xì)胞可顯著增強(qiáng)孕早期滋養(yǎng)層細(xì)胞的侵襲能力。這些研究結(jié)果揭示了CD8+T細(xì)胞和滋養(yǎng)層細(xì)胞間相互聯(lián)系，相互調(diào)節(jié)，共同促進(jìn)妊娠的順利進(jìn)行。

那么CD8+T細(xì)胞是否與蛻膜中的其他免疫細(xì)胞發(fā)生相互聯(lián)系，還有待深入探討。研究證明蛻膜的巨噬細(xì)胞，NK細(xì)胞能夠影響CD8+T細(xì)胞的活性，但具體的分子機(jī)制尚不清楚[32]。目前，研究發(fā)現(xiàn)CD8+T細(xì)胞可通過誘導(dǎo)IDO的產(chǎn)生及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的擴(kuò)增介導(dǎo)腫瘤免疫耐受[33]。這一功能的揭示將為研究蛻膜CD8+T細(xì)胞與其他免疫細(xì)胞間的相互調(diào)控提供新的思路。

五、展望

蛻膜CD8+T細(xì)胞在妊娠過程中的確切作用及其分子機(jī)制還處于探索階段，相信隨著研究的逐步深入，蛻膜CD8+T細(xì)胞調(diào)控胚胎種植和發(fā)育的分子機(jī)制，如對(duì)Th1/Th2細(xì)胞因子的調(diào)控，對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞及其他免疫細(xì)胞的調(diào)控等諸多疑團(tuán)會(huì)一一解開。相信隨著分子機(jī)制的明確，未來以調(diào)控CD8+T細(xì)胞功能為主的相關(guān)治療方法會(huì)應(yīng)用于妊娠相關(guān)疾病中，為臨床治療開辟一條新的途徑。