鄧毅，雷鳴，趙飛駿，張曉紅

(1 南華大學(xué)病原生物研究所，湖南衡陽421001；2 南華大學(xué)附屬常德市第一人民醫(yī)院)

梅毒是一種可累及人體多器官系統(tǒng)的性傳播疾病，其病程長(zhǎng)、臨床表現(xiàn)復(fù)雜多變，嚴(yán)重危害人類健康。其病原體為密螺旋體屬蒼白密螺旋體蒼白亞種，俗稱梅毒螺旋體(Tp)。盡管有研究者對(duì)其在體外以棉尾兔細(xì)胞做載體進(jìn)行了培養(yǎng)，但仍未真正實(shí)現(xiàn)Tp的體外人工培養(yǎng)繁殖，極大限制了相關(guān)的基礎(chǔ)與臨床研究[1]。近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，在重組膜脂蛋白、表面蛋白基礎(chǔ)上，許多新的梅毒重組蛋白[2]如感染依賴性抗原、假定蛋白、黏附相關(guān)蛋白及鞭毛蛋白等，都被納入梅毒血清學(xué)診斷的候選蛋白進(jìn)行了相應(yīng)評(píng)價(jià)。現(xiàn)對(duì)這些蛋白在血清學(xué)診斷方面的應(yīng)用綜述如下。

1 Tp感染依賴性抗原及假定蛋白

活的Tp在感染階段時(shí)，可能新合成分泌了一些抗原到菌體內(nèi)外或胞質(zhì)；這類抗原可通過調(diào)控宿主細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，介導(dǎo)Tp與宿主細(xì)胞間的相互作用，在梅毒感染早期的炎癥反應(yīng)以及在宿主體內(nèi)持續(xù)慢性感染過程中發(fā)揮重要作用，因此被稱為Tp感染依賴性抗原[3]。

1.1 Tp0971、Tp0768、Tp0462 Tp0971基因全長(zhǎng)615 bp,可編碼305個(gè)氨基酸，蛋白晶體結(jié)構(gòu)分析顯示其可能是一種周質(zhì)膜脂蛋白，具有乳鐵蛋白結(jié)合特性和金屬離子穩(wěn)態(tài)作用[4, 5]。張躍軍等[6]研究發(fā)現(xiàn)，Tp0971膜脂蛋白能刺激THP-1細(xì)胞轉(zhuǎn)化的巨噬細(xì)胞分泌大量前炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-1β，且這些細(xì)胞因子的分泌水平與Tp0971濃度呈一定劑量依賴關(guān)系。McKevitt等[7]研究顯示，被Tp感染后第7、14、28、56、84 d的新西蘭兔血清能識(shí)別重組GST-Tp0971融合蛋白,提示Tp0971在梅毒感染的診斷中有潛在價(jià)值。Brinkman等[8]研究發(fā)現(xiàn)，重組GST-Tp0971融合蛋白也與早期、二期和潛伏早期梅毒患者血清有較強(qiáng)的免疫反應(yīng)性。曾鐵兵等[9]以重組蛋白Tp0971為已知抗原建立間接ELISA法，并與TPPA法進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示rTp0971-ELISA的特異性為100%、敏感性為89.1%、總符合率為92.7%，但其檢出率低于TPPA法 。

Tp0768又名TmpA抗原，可編碼345個(gè)氨基酸，相對(duì)分子質(zhì)量約37 kDa，是Tp的一種質(zhì)膜蛋白。Liu等[3]利用基因工程技術(shù)在原核表達(dá)系統(tǒng)中成功地表達(dá)和純化獲得了高純度的Tp0768重組蛋白，經(jīng)免疫印跡鑒定，重組蛋白Tp0768能被梅毒患者陽性血清所識(shí)別,具有良好的抗原性,可以作為一種梅毒診斷抗原。同時(shí)，他們?cè)诤Y選梅毒診斷抗原的過程中發(fā)現(xiàn)，Tp0768也具有感染依賴性抗原的特點(diǎn)，并與新西蘭兔血清和臨床患者的血清標(biāo)本具有較好的免疫反應(yīng)性。

Tp0462可編碼392個(gè)氨基酸，相對(duì)分子質(zhì)量約40 kDa，屬于Tp013X家族，是一種目前功能未知的假定蛋白。經(jīng)生物信息學(xué)分析，推測(cè)Tp0462具有信號(hào)肽，有可能是一種具有多個(gè)抗原表位區(qū)的分泌蛋白。劉文等[10]通過基因工程技術(shù)成功構(gòu)建了pET43.1a/Tp0462重組質(zhì)粒，并將其表達(dá)于大腸桿菌中，經(jīng)免疫印跡鑒定，Tp0462與梅毒陽性血清發(fā)生免疫反應(yīng)，而與梅毒陰性血清不反應(yīng)。在后續(xù)的相關(guān)實(shí)驗(yàn)中，他們以重組蛋白Tp0462為基礎(chǔ)建立間接ELISA法；結(jié)果顯示，基于Tp0462蛋白建立的ELISA檢測(cè)結(jié)果的靈敏度為97.0%、特異性為98.8%、ROC曲線下面積(AUC)為0.997，提示該蛋白具有較高的臨床診斷價(jià)值。通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)篩選Tp感染依賴性抗原時(shí)發(fā)現(xiàn)，活Tp接種組新西蘭兔誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體總水平與滅活Tp接種組并無顯著差異，但前者血清中檢測(cè)到有較高滴度的抗Tp0462特異性抗體，是一種非菌體膜蛋白，而后者血清中并無相關(guān)抗體,從而認(rèn)為Tp0462是符合感染依賴性抗原特點(diǎn)的候選抗原蛋白之一。

在進(jìn)一步的研究中[3]，分別以單一的Tp0971、Tp0768及Tp0462蛋白為包被抗原建立間接Tp-ELISA法，檢測(cè)了2 138份梅毒血清標(biāo)本，評(píng)價(jià)其在梅毒血清診斷學(xué)中的價(jià)值。研究結(jié)果顯示，與TPPA法相比較，基于Tp0971、Tp0768、Tp0462建立的ELISA檢測(cè)結(jié)果的敏感性和特異性分別為97.6%、96.6%和97.0%、95.2%和91.7%、98.8%，前者顯示出較高的靈敏度和良好的特異性；經(jīng)ROC曲線分析，AUC分別為0.983、0.990和0.997，亦說明這3個(gè)蛋白均可以作為梅毒的診斷抗原使用；同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，Tp0971、Tp0768在一期梅毒和隱性梅毒檢測(cè)中的陽性檢出率分別為97%、95%和94%、96%，提示Tp0971、Tp0768在早期感染和潛伏感染診斷中有重要的意義。

1.2 Tp0134、Tp0470 Tp0134是一種編碼376個(gè)氨基酸，相對(duì)分子質(zhì)量約40 kDa，與Tp0136、Tp0462等屬于同一家族的Tp假定蛋白。黃作良等[11]分析發(fā)現(xiàn)，Tp0134具有信號(hào)肽，可能是一種分泌蛋白，且具有多個(gè)抗原表位區(qū)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，Tp0134具有感染依賴性抗原的特點(diǎn)，由于這類抗原和以往發(fā)現(xiàn)的梅毒診斷抗原存在一定的差異，故兩者的診斷性能也可能有著各自不同的特點(diǎn)。在后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)中，他們以Tp0134抗原包被液建立rTp0134-ELISA，檢測(cè)了468份臨床各期梅毒血清，其靈敏度為97.19%、特異性為96.85%；ROC曲線分析，AUC為0.911，提示Tp0134具有良好的抗原性，且具有較高的診斷價(jià)值，可以作為梅毒血清檢測(cè)的候選診斷抗原。

Tp0470全長(zhǎng)1 110 bp，蛋白相對(duì)相對(duì)分子質(zhì)量約40.7 kDa，是一種目前功能尚未知的TP假定蛋白。黃作良等[11]通過生物信息學(xué)及蛋白結(jié)構(gòu)分析推測(cè)，Tp0470可能有信號(hào)肽，具有分泌蛋白的一些基本特性。由于Tp0470與活Tp感染后和滅活Tp接種后新西蘭兔血清反應(yīng)性存在顯著差異，從而初步證實(shí)Tp0470是一種感染依賴性抗原。他們以Tp0470蛋白為包被抗原建立間接ELISA法，檢測(cè)了468份臨床各類血清，結(jié)果顯示，基于Tp0470蛋白建立的ELISA檢測(cè)結(jié)果的靈敏度為95.32%、特異性為95.66%，ROC曲線分析進(jìn)一步提示Tp0470作為梅毒診斷靶標(biāo)抗原的潛質(zhì)。

1.3 Tp0693 Tp0693是一種可能存在于在Tp的外膜，結(jié)構(gòu)及功能尚不明確的假定蛋白，相對(duì)分子質(zhì)量約為50 kDa。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，TP0693具有信號(hào)肽和多個(gè)抗原表位，可能屬于外分泌蛋白。研究發(fā)現(xiàn)，Tp0693蛋白在各Tp致病菌株中均能穩(wěn)定表達(dá)，與其他病原菌蛋白和人體自身蛋白同源性低。Zhang等[12]通過基因工程技術(shù)成功構(gòu)建了pET30a/Tp0693 重組質(zhì)粒，經(jīng)免疫印跡鑒定，重組蛋白Tp0693與梅毒陽性血清有特異性免疫反應(yīng)，具有良好的抗原性。在后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)中，以重組蛋白Tp0693為包被抗原建立間接ELISA法，檢測(cè)了201份各期梅毒血清標(biāo)本、66份交叉血清標(biāo)本和100份陰性血清標(biāo)本。研究結(jié)果顯示，Tp0693與正常人血清和交叉血清不反應(yīng)，而與各期梅毒患者血清可發(fā)生較強(qiáng)的免疫反應(yīng)，提示該抗原有良好的特異性?；谥亟MTp0693建立的間接ELISA方法特異性為100%、敏感性為91%,與金標(biāo)準(zhǔn)TPPA結(jié)果符合率高,但陽性結(jié)果的S/CO值與RPR滴度無相關(guān)性。經(jīng)ROC曲線分析，AUC為0.990，提示Tp0693具有潛在的臨床診斷價(jià)值。

2 Tp黏附蛋白

黏附介導(dǎo)的微生物定植在病原微生物感染的起始階段發(fā)揮重要作用。Tp具有黏附到細(xì)胞外基質(zhì)纖連蛋白的能力，能黏附到宿主多個(gè)組織器官，導(dǎo)致全身性播散。

2.1 Tp0155和Tp0483 Tp0155基因全長(zhǎng)1 116 bp，編碼371個(gè)氨基酸。Bamford等[13]研究認(rèn)為，Tp0155是一種包含前導(dǎo)肽、2個(gè)N端LysM結(jié)構(gòu)域和M23肽酶序列的蛋白質(zhì)，其中兩個(gè)N端LysM結(jié)構(gòu)域可識(shí)別碳水化合物的聚合體，M23肽酶序列則能降解肽聚糖并顯示出酶活性。Tp0155和Tp0483是細(xì)胞外基質(zhì)纖連蛋白的結(jié)合蛋白，兩者都能與纖連蛋白特異性結(jié)合。Tp0155優(yōu)先與纖連蛋白的基質(zhì)形式結(jié)合，而Tp0483則能同時(shí)與纖連蛋白的可溶性和基質(zhì)形式結(jié)合，它們以不同的構(gòu)象形式存在，在纖連蛋白基質(zhì)組裝過程中，可暴露出隱藏表位。通過對(duì)Tp0483外膜蛋白的分析，Dickerson等[14]發(fā)現(xiàn)了在274～289和316～333氨基酸殘基之間有2個(gè)纖連蛋白結(jié)合區(qū)域。然而，Van Voorhis等[15]研究發(fā)現(xiàn)，基于rTp0155和rTp0483建立的ELISA方法檢測(cè)梅毒患者血清的總靈敏度均較低，分別為28%、42%。他們同時(shí)發(fā)現(xiàn)，這兩種蛋白僅在9%的梅毒患者血清出現(xiàn)陽性結(jié)果，而且這些陽性反應(yīng)性血清均來自早期原發(fā)性感染的個(gè)體。

2.2 Tp0136 Tp0136全長(zhǎng)1 488 bp，編碼495個(gè)氨基酸，相對(duì)分子質(zhì)量為50 kDa，位于Tp外膜上。Brinkman等[16]發(fā)現(xiàn)，附著在宿主細(xì)胞外基質(zhì)上的Tp0136具有結(jié)合纖連蛋白和層粘連蛋白的能力。最近的研究表明[17]，Tp0136通過其N端保守區(qū)能有效地黏附于細(xì)胞，甚至比血漿纖維連接蛋白的作用更為有效。在模擬感染試驗(yàn)中，宿主對(duì)病原體的免疫應(yīng)答的同時(shí)，Tp0136被高度轉(zhuǎn)錄，表明該蛋白可能在Tp的持久性免疫中發(fā)揮作用。同時(shí)，Brinkman等[16]發(fā)現(xiàn)，在Tp各亞種及菌株之間，Tp0136基因的開放閱讀框均存在不同程度的變異；依據(jù)基因的異質(zhì)性，Tp0136可分SS14 和非SS14兩種亞型。這種分子生物學(xué)的分型方法既能提高基因分型的效率，又能用于Tp菌株的鑒別，對(duì)于區(qū)分梅毒的臨床分期、了解病情進(jìn)展、判斷預(yù)后和治療方案的選擇均具有重要意義。因此，Tp0136的蛋白異質(zhì)性對(duì)于梅毒的血清學(xué)診斷和預(yù)后判斷具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

3 Tp鞭毛蛋白

鞭毛蛋白是細(xì)菌鞭毛的主要成分，是Tp菌體蛋白質(zhì)的重要組成部分，對(duì)Tp在宿主體內(nèi)的入侵和傳播具有重要意義。此外，Tp鞭毛蛋白作為一種經(jīng)典的病原相關(guān)分子模式，能觸發(fā)固有免疫應(yīng)答和適應(yīng)性免疫應(yīng)答。因此，這些蛋白被認(rèn)為是疫苗以及免疫治療的有效佐劑。

3.1 Tp0463 Tp0463是新近發(fā)現(xiàn)的一種含110個(gè)氨基酸的Tp鞭毛蛋白。生物學(xué)信息分析表明，Tp0463含有數(shù)個(gè)較強(qiáng)的B細(xì)胞表位，因而推測(cè)其可能具有較強(qiáng)的抗原性和免疫原性。McKevitt等[7]研究表明，Tp0463重組蛋白能與各期Tp感染兔混合血清發(fā)生很強(qiáng)的免疫反應(yīng)，而與正常兔血清不發(fā)生免疫反應(yīng)，提示該抗原具有較高的特異性和敏感性。劉小軍[18]通過基因工程技術(shù)成功構(gòu)建了pET28a+/Tp0463重組質(zhì)粒，經(jīng)免疫印跡鑒定，重組蛋白Tp0463與梅毒陽性血清有特異性免疫反應(yīng)，具有良好的抗原性，而與梅毒陰性血清則不發(fā)生免疫反應(yīng)。在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中，他們以Tp0463重組蛋白為診斷抗原建立的間接ELISA檢測(cè)各期梅毒患者以及健康對(duì)照人群共340份臨床血清標(biāo)本；結(jié)果顯示，基于Tp0463蛋白建立的ELISA檢測(cè)結(jié)果的總靈敏度為87.7%、特異性為100%，其靈敏度低于TPPA法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩種方法總符合率為 95.0%。Jiang等[19]研究結(jié)果表明，鞭毛蛋白Tp0463對(duì)原發(fā)性和先天性梅毒IgM抗體的檢測(cè)表現(xiàn)出良好的檢測(cè)性能，其敏感性為92.6%、特異性97.9%、陽性預(yù)測(cè)值為99.4%、陰性預(yù)測(cè)值為77.5%。由此認(rèn)為，Tp0463可作為一種新的梅毒篩查診斷標(biāo)記物且對(duì)疫苗的研制具有極其重要的意義。

3.2 Tp0868、Tp0792、Tp0870 Tp0868(FlaB1，34.5 kDa)、Tp0792(FlaB2，33 kDa)和 Tp0870(FlaB3，31 kDa)以及包裹在核心蛋白外的鞘蛋白 Tp0249(FlaA)是具有代表性的鞭毛蛋白，這些蛋白促成了Tp獨(dú)特的螺旋狀運(yùn)動(dòng)方式。McGill等[20]發(fā)現(xiàn)，Tp0868、Tp0792和Tp0870和鞭毛動(dòng)力蛋白Tp0400在梅毒的各個(gè)階段均具有強(qiáng)烈的血清反應(yīng)性。對(duì)重組鞭毛蛋白的篩選顯示，F(xiàn)laB1、FlaB2、FlaB3對(duì)IgG抗體的整體敏感性和特異性較高，分別為95.4%、98.9%和92.6%、95.8%和95.1%和95.8%。此外，F(xiàn)laB1、FlaB2、FlaB3蛋白在原發(fā)性和先天性梅毒IgM抗體檢測(cè)中均表現(xiàn)出較好的靈敏度和特異性，其敏感性和特異性分別為76.8%、83.1%和72.0%、87.7%和74.4%、89.2%[19]。因此，F(xiàn)laB1、FlaB2和FlaB3蛋白被納入梅毒血清診斷的候選新抗原組。

4 Tp膜脂蛋白

Tp膜脂蛋白多位于細(xì)胞內(nèi)膜層，在Tp致病過程中與宿主黏附、定植、播散以及激發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)密切相關(guān)，可能為Tp的主要致病因子；同時(shí)，Tp膜脂蛋白也是梅毒血清學(xué)診斷的敏感特異性指標(biāo)。

4.1 Tp0821 Tp0821是近年來發(fā)現(xiàn)的一種基因全長(zhǎng)807 bp，編碼268個(gè)氨基酸的位于細(xì)胞外膜的TP膜脂蛋白。Tp0821的晶體結(jié)構(gòu)與胞質(zhì)配體結(jié)合蛋白類似，與蛋氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族具有同源性，可能參與Tp蛋氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)。以Tp0821為診斷抗原建立的ELISA試驗(yàn)結(jié)果顯示，IgM和IgG的相對(duì)陽性率分別為91.0%、98.3%。對(duì)30例萊姆病患者、5例鉤端螺旋體病患者和52例未感染者對(duì)照血清樣本進(jìn)行交叉試驗(yàn)時(shí)，其特異性分別為94.3%、100%，基于Tp0821的ELISA試驗(yàn)與臨床常用的TPPA和化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)(CIA)的結(jié)果具有良好的相關(guān)性[21]。這些實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，Tp0821可作為梅毒血清學(xué)診斷的一種新的候選抗原，但是否能應(yīng)用于臨床診斷需要進(jìn)一步的驗(yàn)證和確認(rèn)。

4.2 Tp15、Tp17、Tp47 Tp15在內(nèi)膜中含量相對(duì)較少，其基因全長(zhǎng)426 bp,相對(duì)分子質(zhì)量為15 kDa。米希婷[22]采用重組抗原Tp15、Tp17、Tp47對(duì)各期梅毒患者進(jìn)行體液免疫反應(yīng)的檢測(cè)，Tp15在各期梅毒中陽性檢出率相對(duì)較低(僅為64.7%)，表明其引起的早期體液免疫反應(yīng)是有限的。但Tp15在血清固定型梅毒患者中表達(dá)明顯增強(qiáng)，其有可能是造成梅毒患者血清固定的因素之一。Tp17蛋白抗原在內(nèi)膜中含量豐富，其基因全長(zhǎng)468 bp,相對(duì)分子質(zhì)量為17 kDa。米希婷[22]研究發(fā)現(xiàn)，與正常對(duì)照組相比較，各期梅毒對(duì)Tp17的免疫反應(yīng)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，Tp17的陽性檢出率為100%，是陽性反應(yīng)最高的抗原,提示Tp17是Tp中免疫原性較強(qiáng)的一種膜脂蛋白。Tp47膜脂蛋白在Tp膜蛋白中含量較高，其基因全長(zhǎng)1 302 bp，相對(duì)分子質(zhì)量為47 kDa。它可刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞合成細(xì)胞間黏附分子，并誘導(dǎo)病原體與細(xì)胞間的黏附。Lee等[23]的研究發(fā)現(xiàn)，Tp47能促進(jìn)細(xì)胞黏附分子如血管細(xì)胞黏附分子1、細(xì)胞間黏附分子1和E選擇素等在皮膚微血管內(nèi)皮細(xì)胞上的表達(dá)，從而調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞結(jié)合人皮膚微血管內(nèi)皮細(xì)胞，繼而黏附侵入宿主，并刺激免疫細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答。

Tp15、Tp17、Tp47是重要的Tp膜脂蛋白，這些抗原已經(jīng)成功地應(yīng)用于梅毒血清學(xué)診斷試驗(yàn)的建立，并在臨床上廣泛使用。早期梅毒的血清學(xué)診斷是基于單個(gè)重組抗原。Tp15、Tp17、Tp47獨(dú)立診斷的敏感性和特異性分別為100%、96%和100%、100%和100%、20%，2種或3種抗原的聯(lián)合檢測(cè)則可提高診斷的準(zhǔn)確性[24]。目前，以TpN15-TpN17-TpN47重組蛋白嵌合抗原建立的 Tp-ELISA能有效降低假陽性率和假陰性率，有著更高的靈敏度、特異度和符合率。

5 Tp表面蛋白

Tp表面蛋白位于菌體外膜，與其他革蘭陰性細(xì)菌相比，Tp外膜上表面蛋白種類稀少。因最先暴露于免疫系統(tǒng)，表面蛋白是完整的Tp菌體中最重要的免疫靶點(diǎn)，同時(shí)在Tp的毒力中也發(fā)揮重要作用[25]。

5.1 Tp0326(Tp92) Tp0326基因全長(zhǎng)2 562 bp，編碼853個(gè)氨基酸，相對(duì)分子質(zhì)量為96 kDa，是目前已知的Tp外膜蛋白中惟一與革蘭陰性菌外膜蛋白具有序列同源性的蛋白。Tp0326 N端有5個(gè)多肽轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)結(jié)構(gòu)域，C端有1個(gè)由18個(gè)β-折疊形成的具有雙親性的β-桶樣結(jié)構(gòu)。Luthra等[26]研究顯示，在Tp細(xì)胞膜表面，含有大量桶形結(jié)構(gòu)的外膜蛋白形成親水性的化學(xué)通道，便于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞，同時(shí)排出代謝產(chǎn)物，從而滿足其自身新陳代謝及繁殖的物質(zhì)需求。在完整的Tp中僅有Tp0326的桶形結(jié)構(gòu)區(qū)域包含暴露的抗原表位。Brinkman等[8]研究發(fā)現(xiàn)，Tp0326具有血清反應(yīng)性。然而，McGill等[20]的研究結(jié)果顯示，Tp0326與早期潛伏梅毒血清無反應(yīng)性，也無免疫原性。這個(gè)現(xiàn)象可以解釋為，多肽轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)結(jié)構(gòu)域和C端β-桶形結(jié)構(gòu)位點(diǎn)的抗原變異，從而引起Tp蛋白組中Tp0326極低水平的表達(dá)。基于這些研究成果，許多以Tp0326、Tp0453和Tp0326-Tp0453嵌合抗原為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法和試劑盒不斷被研發(fā)，進(jìn)而推進(jìn)其臨床應(yīng)用。

5.2 Tp0453 Tp0453基因全長(zhǎng) 864 bp，編碼 287個(gè)氨基酸 ，相對(duì)分子質(zhì)量為 31 kDa。Tp0453是一種新型的整合外膜蛋白，定位于Tp外膜的內(nèi)表面，這種蛋白質(zhì)擁有大量的折疊結(jié)構(gòu)和兩性螺旋, 當(dāng)人工加入雙層膜時(shí)，此蛋白進(jìn)入膜中，膜的滲透性增強(qiáng)，表明其可能是一種孔蛋白[27]。Hazlett等[27]研究發(fā)現(xiàn), Tp0453可能使Tp的外膜對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)具有通透性，而抗體則無法進(jìn)入。Luthra等[28]研究發(fā)現(xiàn)，Tp0453包括5個(gè)穩(wěn)定折疊兩性螺旋，這對(duì)于Tp0453與膜結(jié)合是至關(guān)重要的?；诮Y(jié)構(gòu)動(dòng)力學(xué)和結(jié)核分枝桿菌脂蛋白的比較數(shù)據(jù)，Tp0453被認(rèn)為是外膜生物轉(zhuǎn)化過程中脂質(zhì)和糖脂的載體。從而可推測(cè)，Tp0453 在Tp攝取營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、維持生命的過程中起了一定的作用。在McGill等[20]的研究中，Tp0453表現(xiàn)出中等強(qiáng)度的血清反應(yīng)性，可與早期梅毒患者的血清反應(yīng)。Van Voorhis等[15]研究發(fā)現(xiàn)，基于Tp0453蛋白建立的ELISA對(duì)梅毒患者血清有較好的血清反應(yīng)性，其特異性和敏感性高，而且對(duì)復(fù)發(fā)性發(fā)熱、萊姆病或鉤端螺旋體病患者血清均呈陰性反應(yīng)。莫小輝等[29]成功制備抗Tp0453重組蛋白的單克隆抗體，經(jīng)間接免疫熒光分析，表明抗Tp0453抗體能識(shí)別Tp的天然蛋白結(jié)構(gòu)，且與鉤端螺旋體無交叉反應(yīng)。近年來，以Tp0453重組產(chǎn)物和嵌合的Tp0453-tp0326蛋白為診斷抗原的ELISA檢測(cè)方法不斷發(fā)展，Tp0453和Tp0453-tp0326嵌合體的敏感性可達(dá)98%、98%，特異性可達(dá)100%、99%[30]，因此，Tp0453有望作為Tp特異性血清學(xué)診斷的新候選抗原用于TP的大規(guī)模血清篩選。

重組蛋白技術(shù)為梅毒血清學(xué)診斷提供大量的高純度的重組蛋白，推動(dòng)了血清學(xué)檢測(cè)的快速發(fā)展。但是，梅毒血清學(xué)篩查依然有許多問題亟待解決，如縮短梅毒檢測(cè)的窗口期，避免晚期梅毒患者由于免疫應(yīng)答水平降低而出現(xiàn)的假陰性結(jié)果。因此，我們有必要尋找新型的Tp重組抗原應(yīng)用于梅毒血清學(xué)診斷。以重組蛋白技術(shù)為基礎(chǔ)建立的Tp特異性血清學(xué)實(shí)驗(yàn)顯著提高了梅毒的診斷水平，血清學(xué)試驗(yàn)的敏感性和特異性均達(dá)到95%以上。但這些Tp抗原實(shí)驗(yàn)無法區(qū)分既往感染與現(xiàn)癥感染，也不能用于療效判定、有無復(fù)發(fā)及再感染。目前，我們只能通過非Tp特異性血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)反應(yīng)素的滴度變化，來判定疾病的進(jìn)程變化。然而，反應(yīng)素并非Tp感染后特有，其在病毒性肝炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者和老年人血清中皆可出現(xiàn)，從而引起假陽性結(jié)果。因此，拓展Tp重組抗原組合，提高各期梅毒的檢測(cè)的靈敏度和特異性，仍是多個(gè)學(xué)科包括分子生物學(xué)、微生物學(xué)和免疫學(xué)研究的共同目標(biāo)。近年來，感染依賴性抗原篩選技術(shù)的興起，促進(jìn)了病原體的診斷相關(guān)應(yīng)用研究。雖然，目前關(guān)于Tp感染依賴性抗原的研究大多停留在實(shí)驗(yàn)室階段，但對(duì)其深入研究可以為梅毒早期診斷及治療提供新的靶標(biāo)，且為研發(fā)梅毒新型疫苗提供新的理論基礎(chǔ)和研究方向。