鄧夢玲

（宜賓學(xué)院，四川 宜賓 644000）

雞新城疫是世界動物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定的必須報告的疾病，同時也是我國一類疫病。就引起禽類死亡的數(shù)量而言，新城疫是除高致病性禽流感、傳染性支氣管炎和低致病性禽流感外最嚴(yán)重的一種傳染病。本文對新城疫的檢疫和防疫進(jìn)行綜述，以期對該病的診斷和防治提供參考。

1 病原特征

從生物學(xué)分類上看，雞新城疫病毒（NDV）屬于副粘病毒亞科，禽副粘病毒屬，只有一個血清型，即禽副粘病毒I型。根據(jù)毒力強(qiáng)弱，病毒分為強(qiáng)毒株和弱毒株兩類。

2 流行特點(diǎn)

根據(jù)丁壯等[1]的研究，我國流行的優(yōu)勢基因型為Ⅶ型，偶見其他基因型，基因Ⅶ型所占的比重呈逐年上升的趨勢。除家禽外，在鴿子和雙冠鸕鶿中也常分離到強(qiáng)毒NDV，野生鳥類偶見分離。世界范圍內(nèi)雞新城疫經(jīng)過了4次大流行，之后NDV宿主范圍明顯擴(kuò)大，已報道超過250種禽類可自然感染或?qū)嶒灨腥綨DV[2]。

3 雞新城疫的檢疫

3.1 臨床診斷 雞感染NDV后觀察到的臨床癥狀是非特異性的，可能會出現(xiàn)精神沉郁、羽毛雜亂、張口呼吸、體溫過高、厭食、無精打采和體溫降低等癥狀。如果存在淋巴組織的出血和壞死，尤其是腸、脾和胸腺，則具有內(nèi)臟變性，應(yīng)該高度懷疑NDV感染[3]。

雞感染NDV后，大致表現(xiàn)為3種致病型：緩發(fā)型、中發(fā)型和速發(fā)型。緩發(fā)型僅表現(xiàn)輕微的呼吸道癥狀，中發(fā)型僅引起幼齡雞的死亡，速發(fā)型能引起各種日齡的雞發(fā)生致死性感染。其中，速發(fā)型包括速發(fā)嗜內(nèi)臟型，簡稱嗜內(nèi)臟型；速發(fā)嗜神經(jīng)型，簡稱嗜神經(jīng)型。由于蛋雞在生產(chǎn)周期內(nèi)接受多次NDV疫苗接種，因此具有持續(xù)免疫力，除了產(chǎn)蛋量下降外，可能不顯示感染的跡象。感染嗜神經(jīng)性NDV毒株的雞，常出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，如斜頸、共濟(jì)失調(diào)，翅膀或腿麻痹，內(nèi)臟一般不表現(xiàn)明顯的病變。

3.2 實驗室診斷

3.2.1 病毒分離 采集活雞的咽喉拭子或泄殖腔拭子或雛雞的新鮮糞便，也可無菌采集死雞的肺、腎、腸（包括內(nèi)容物）、脾、腦、肝、心組織和骨髓，用含有抗生素的pH值為7.0～7.4的等滲磷酸鹽緩沖液（PBS）滅菌，處理好后于4℃下3000r/min離心10min，取上清液經(jīng)0.22μm濾膜過濾除菌。吸取除菌液經(jīng)尿囊腔接種至少5枚9～11日齡的SPF雞胚（0.2mL/枚），35～37℃下孵育4～7d，接種后每天檢查雞胚生長情況。收集死胚、瀕死雞胚和培養(yǎng)結(jié)束時存活的雞胚，置4℃冰箱中冷卻4～24h，無菌采集尿囊液。

3.2.2 血清學(xué)鑒定

3.2.2.1 血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗 新城疫病毒能吸附于雞、火雞、鴨、鵝及某些哺乳動物（人、豚鼠）的紅細(xì)胞表面，引起紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，且能夠被特異性抗體抑制。雞感染NDV后，其組織中的含毒量較低，不足以產(chǎn)生血凝現(xiàn)象，故需先進(jìn)行雞胚接種，再用含毒量較高的3.2.1中的尿囊液作血凝及血凝抑制試驗。用HA法檢測尿囊液的血凝活性，呈陰性反應(yīng)的尿囊液需用另一批9～11日齡的SPF雞胚至少再傳代一次，若結(jié)果仍為陰性，則判定新城疫病毒陰性。HA檢測結(jié)果呈陽性的尿囊液，需再用新城疫病毒標(biāo)準(zhǔn)陽性血清進(jìn)行HI試驗，以確認(rèn)是否有新城疫病毒的存在。

HA和HI既可以在雞發(fā)病后診斷，也可以對未發(fā)病雞群進(jìn)行診斷。如果檢測到未免疫過新城疫疫苗的雞群有血清抗體存在，則表明雞群中有野毒感染；如果免疫過新城疫疫苗的雞群有抗體存在，則應(yīng)根據(jù)抗體滴度判定免疫是否成功，如雞群整體抗體水平低，則需要重新免疫。

3.2.2.2 瓊脂擴(kuò)散試驗 采集被新城疫病毒強(qiáng)毒攻擊致死的雞的組織或器官樣品，進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散試驗。該法操作簡單，特異性好，檢出率高，目前被廣泛應(yīng)用于臨床。

3.2.2.3 免疫組化技術(shù) 免疫組化是利用抗原和抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)存在抗原，一般用異硫氰鹽熒光素或辣根過氧化物酶及堿性磷酸來標(biāo)記高免血清的IgG抗體，進(jìn)行抗原診斷。張爽[4]證實該方法具有較高的特異性和穩(wěn)定性，且重復(fù)性較好。

3.2.2.4 免疫熒光（IFA）試驗 彭明義等[5]將NDV抗體標(biāo)記后，檢測免疫接種機(jī)體和強(qiáng)毒感染毒株的抗原，得出該法具有特異性強(qiáng)、敏感性高的特點(diǎn)，可用于雞新城疫病毒的檢測。

3.2.2.5 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA） 酶聯(lián)免疫吸附試驗是利用物理方法將抗原或抗體吸附在固相載體上進(jìn)行免疫酶的測定，需要利用酶標(biāo)儀或經(jīng)顯色劑顯色后再肉眼觀察。Kumanan等[6]使用Dot-ELISA對ND疑似病例進(jìn)行檢測，顯示出良好的敏感性。

3.2.3 分子學(xué)方法

3.2.3.1 反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR） RTPCR法具有快速、靈敏、特異、直觀等特點(diǎn)，避免了常規(guī)血清學(xué)診斷方法中非特異性因素的干擾及敏感性低等問題，可以直觀地從分子水平檢測到病毒核酸，目前已成為臨床上檢測和診斷疾病的一個重要發(fā)展方向。我國多位學(xué)者均根據(jù)F基因設(shè)計引物，建立了RT-PCR方法，這種方法不僅能夠檢測尿囊液中的病毒，也能對病雞組織中的NDV進(jìn)行檢測。

3.2.3.2 實時熒光反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（熒光RT-PCR） 實時熒光定量檢測技術(shù)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，收集熒光信號實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析。屈素潔等[7]研究表明，該方法對新城疫病毒的檢出量比普通RT-PCR高出100倍，且準(zhǔn)確性高，重復(fù)性好。Farkas等[8]根據(jù)F基因設(shè)計一對通用引物，再分別根據(jù)強(qiáng)弱毒株設(shè)計一條探針，建立了多重?zé)晒舛縋CR方法，結(jié)果表明該法能夠區(qū)分NDV的強(qiáng)弱毒株。

4 新城疫的防疫

4.1 監(jiān)測雞流行病學(xué) 對雞群的帶毒情況進(jìn)行監(jiān)測，特別是對強(qiáng)毒株的流行情況進(jìn)行調(diào)查，分析我國新城疫流行規(guī)律和特點(diǎn)，制定出針對性的防控措施。

4.2 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理 雞新城疫危害范圍廣，傳染性高，必須采取綜合性的生物安全防控措施。加強(qiáng)圈舍內(nèi)外環(huán)境的消毒，將生活區(qū)和養(yǎng)殖區(qū)隔離，避免引入外界病毒；加強(qiáng)引種檢疫，避免外來感染雞只引起場內(nèi)感染；養(yǎng)殖場周圍搭建圍欄，防止野禽進(jìn)入，與鴨、鵝分群飼養(yǎng)，因為野禽、水禽和雞之間的病毒株存在雙向傳播的風(fēng)險；保持飼料營養(yǎng)均衡，增強(qiáng)雞群對病毒的抵抗力；減少雞群的應(yīng)激反應(yīng)，防范氣溫驟變、高氨環(huán)境等對雞呼吸道的損傷。

4.3 疫苗免疫 疫苗免疫是目前預(yù)防雞新城疫的最有效方法。臨床常用的疫苗主要有傳統(tǒng)的弱毒疫苗、滅活疫苗以及DNA疫苗、基因缺失疫苗、亞單位疫苗、轉(zhuǎn)基因植物疫苗和基因工程苗等。

傳統(tǒng)的新城疫疫苗是養(yǎng)雞場最常用的疫苗種類，具有產(chǎn)生免疫力快的優(yōu)點(diǎn)，可通過點(diǎn)眼、滴鼻、氣霧等方式免疫，取得較好的免疫效果。試驗證明，雞ND基因工程亞單位疫苗具有良好的免疫效果。丁壯等[1]用HN基因工程亞單位疫苗免疫試驗雞，結(jié)果產(chǎn)生了高于65%的強(qiáng)毒保護(hù)率。孟凡臣[9]將F基因介導(dǎo)轉(zhuǎn)化入馬鈴薯，獲得了12株轉(zhuǎn)基因植物疫苗。轉(zhuǎn)基因疫苗可能是未來疫苗發(fā)展的方向之一。

盡管供選擇的疫苗種類繁多，但臨床上應(yīng)注意選擇使用與流行株基因型匹配的疫苗株，以保證較高的免疫保護(hù)力。另外，必須加強(qiáng)雞群抗體水平的監(jiān)測，確保免疫雞群抗體水平維持在有效范圍內(nèi)，以免引起大范圍暴發(fā)。

5 小結(jié)

新城疫的廣泛流行給我國養(yǎng)雞業(yè)帶來了極大的損失，雖然免疫防控取得了一定的成效，但該病又出現(xiàn)了新的流行特點(diǎn)，如多種病原的混合或繼發(fā)感染，雞群的免疫抑制、毒株的變異和進(jìn)化等。因此，我們應(yīng)當(dāng)始終保持警惕，加強(qiáng)ND檢疫，特別要重點(diǎn)關(guān)注新毒株和野毒感染，同時樹立“防重于治”的正確觀念，重視和做好生物安全措施。