徐曉津，李秀華，馬一帆，何 俊，李慧耀，祁 欣，張蕉南，王云才，趙玲敏，鄢慶枇

(1.集美大學(xué) 水產(chǎn)學(xué)院，福建 廈門 361021；2.福建天馬科技股份集團有限公司，福州 350308；3.廈門醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院 中醫(yī)科，福建 廈門 361021；4.廈門大學(xué) 海洋與地球?qū)W院，福建 廈門 361005)

河流弧菌(Vibrofluvialis)是引起石斑魚產(chǎn)生細菌性疾病的重要病原菌[1]，其廣泛分布于沿岸海域， 可致魚類、蝦蟹類和貝類產(chǎn)生細菌性疾病，引起敗血癥、腐皮病和膿皰病等癥狀，死亡嚴重[1-3]，能引起大黃魚[3]、文蛤、石斑魚等產(chǎn)生疾病[1]，造成巨大經(jīng)濟損失。河流弧菌還能引起人類感染，產(chǎn)生腹泄等病癥，表現(xiàn)為急性胃腸炎。目前，河流弧菌的防治已成為國內(nèi)外研究的熱點問題之一。隨著抗生素在治療細菌性疾病中的廣泛應(yīng)用，產(chǎn)生了細菌耐藥性、導(dǎo)致藥物殘留等問題[4]，而中藥可增強水產(chǎn)養(yǎng)殖動物免疫力，中藥復(fù)方對細菌體外抑制效果較好[5-6]。采用現(xiàn)代化制藥技術(shù)制成的中藥顆粒劑，既保持中藥藥性，使用安全性也較高。目前已有200多種中草藥作為飼料添加劑，學(xué)者們已開展中草藥對羅非魚、虹鱒、鰻魚等病害防治的研究[7-9]。因此，中藥與抗生素在防治魚病方面各有優(yōu)勢，研究中西藥聯(lián)合治療魚病具有重要意義。目前尚未見石斑魚等魚類中藥防治配方篩選的研究，也未見中藥抑制河流弧菌、中藥抑制菌篩選及復(fù)方中藥與西藥聯(lián)用治療魚病系統(tǒng)的研究。筆者以石斑魚致病菌河流弧菌為研究對象，用50種中藥，進行中藥體外抑菌試驗，篩選出能有效抑制該菌的單方中藥，并在此基礎(chǔ)上篩選出藥效較強的 二聯(lián)與三聯(lián)復(fù)方中藥配方，同時進行抗生素對河流弧菌的藥敏實驗，篩選出藥效強的抗生素，減少抗生素的用量及藥物殘留問題，旨在為石斑魚河流弧菌病的中西藥聯(lián)合治療提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌種河流弧菌與實驗菌種標準金黃色葡萄球菌菌液由集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院實驗室保存[3]。河流弧菌為石斑魚常見的致病弧菌，分離自患病石斑魚，將保存的金黃色葡萄球菌與河流弧菌分別用LB 液體培養(yǎng)基，28 ℃下恒溫培養(yǎng)8～12 h，取對數(shù)生長期的菌液。PBS 緩沖液調(diào)整菌液OD值0.5 (含菌量約為108mL-1)，置于4 ℃冰箱內(nèi)保存，備用。

1.2 中藥對河流弧菌體外抑制實驗

1.2.1 單方中藥的選取與藥液制備選擇水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)上有報道的50種中藥進行石斑魚常見細菌病河流弧菌體外抑菌實驗，篩選藥效強的中藥。中藥配方顆粒包括：艾葉、魚腥草、大黃、黃柏、黃連、黃芩、連翹、板藍根、白茅根、苦參、金銀花、梔子、蒲公英、地錦草、千里光、烏梅、檳榔、榧子、使君子、柴胡、青蒿、槐花、木香、貫眾、炒川楝子、大蒜、螺旋藻、刺五加、黃芪、杜仲葉、穿心連、白芍、醋五味子、黨參、苦楝皮、枸杞子、石榴皮、甘草、馬齒莧、白頭翁、五倍子、地榆、訶子、茯苓、鉤藤、虎杖、冬凌草、郁金、木賊草、野菊花均購自江陰天江藥業(yè)有限公司。實驗者將中藥配方顆粒溶解于無菌蒸餾水中，置于玻璃小管中，再置于盛有沸水的燒杯，并隔水加熱0.5 h，讓中藥充分溶解。中藥顆粒劑溶液相當于生藥的質(zhì)量濃度為240 mg·mL-1。

1.2.2 復(fù)方二聯(lián)中藥的選取與藥液制備選擇單方中藥體外抑制圈較大的22種中藥(訶子、黃連、烏梅、大黃、黃柏、白芍、醋五味子、檳榔、梔子、青蒿、黃芩、連翹、炒槐花、甘草、板藍根、黃芪、木香、艾葉、炒川楝子、蒲公英、貫眾、野菊花；下同)中藥配方顆粒，根據(jù)藥物的特性及養(yǎng)殖生產(chǎn)實踐中復(fù)方中藥治療細菌病的研究結(jié)果[6-8,11-17]，制定復(fù)方二聯(lián)中藥。按1.2.1溶解中藥配方顆粒方法配制成中藥顆粒劑溶液，復(fù)方中藥二聯(lián)按1∶1比例，中藥最終濃度相當于生藥的質(zhì)量濃度為240，60 mg·mL-1。

1.2.3 復(fù)方三聯(lián)中藥的選取與藥液制備選擇單方中藥體外抑制圈較大的22種中藥配方顆粒，根據(jù)藥物的特性及養(yǎng)殖生產(chǎn)實踐中復(fù)方中藥治療細菌病的研究結(jié)果[6-8,11-17]，制定復(fù)方三聯(lián)中藥。按1.2.1溶解中藥配方顆粒方法配制成中藥顆粒劑溶液，復(fù)方中藥三聯(lián)按1∶1∶1比例，中藥最終濃度相當于生藥的質(zhì)量濃度為240，60 mg·mL-1。

1.2.4 體外抑菌活性的測定分別進行河流弧菌與金黃色葡萄球菌體外抑制實驗，包括50種單方中藥、復(fù)方二聯(lián)中藥、復(fù)方三聯(lián)中藥。采用牛津杯法，在平板中倒入10 mL滅菌后的LB固體培養(yǎng)基，待凝固后，用鑷子輕輕在每個培養(yǎng)皿中等距離放入4 個牛津杯浸入培養(yǎng)基中，取15 mL的LB培養(yǎng)基混勻倒入平板上，待凝固后，用鑷子輕輕取下牛津杯，將河流弧菌和金黃色葡萄球菌稀釋至1.0×108mL-1，用移液槍吸取0.1 mL菌懸液，滴入平板，用涂布器涂勻，用移液槍在1個孔中加入200 μL的無菌水為對照，在另3個孔中用移液槍加入含生藥240 mg·mL-13種不同藥液的200 μL中，置于28 ℃條件下，恒溫培養(yǎng)18～24 h，觀察抑菌圈，并用SupcreG1菌落計數(shù)/篩選/抑菌圈測量聯(lián)用儀(杭州迅數(shù)科技有限公司)測量抑菌圈大小，每個實驗3次重復(fù)。計算平均值，進行對比研究， 根據(jù)抑菌圈直徑大小判定其抑菌能力的強弱。結(jié)果判定標準:抑菌直徑≥ 20 mm為極敏感，表示為“+ + +”；15 mm≤抑菌直徑< 20 mm為高敏，表示為“+ +”；10 mm≤抑菌直徑< 15 mm為中敏，表示為“+”；抑菌直徑< 10 mm低敏或無效，表示為“-”。

1.3 抗生素對河流弧菌的藥敏試驗用牛津杯法，參照WHO推薦的K-B紙片瓊脂擴散法[10]中恩諾沙星(興化市恒威生物技術(shù)有限公司)、鹽酸多西環(huán)素(河南海天生物科技有限公司)、土霉素(河南佰吉特生物科技有限公司)、磺胺嘧啶(山東亞康藥業(yè)股份有限公司)、氟苯尼考(上海瑞博丘)生物工程有限公司、硫酸新霉素(宜興市蘇亞達生物有限公司)、硫酸慶大霉素(青島富坤獸藥原料有限公司)、磺胺甲噁唑(廣州駿杰生物技術(shù)有限公司)藥敏紙片的藥物濃度，在每孔中加入K-B紙片瓊脂擴散法推薦的抗生素濃度藥物。將河流弧菌與金黃色葡萄球菌分別用0.85%生理鹽水稀釋至1.0×108mL-1，分別取200 μL 菌懸液均勻涂布于LB培養(yǎng)基平板上，每個平板放4個牛津杯，每個孔分別加入抗生素藥液。28 ℃恒溫培養(yǎng)24 h 后，并用SupcreG1菌落計數(shù)/篩選/抑菌圈測量聯(lián)用儀(杭州迅數(shù)科技有限公司)測量抑菌圈大小， 每個平板做3 個重復(fù)。根據(jù)CLSI M100 的最新標準(郭世富，2019)判定結(jié)果。測量抑菌圈直徑，判定河流弧菌與金黃色葡萄球菌的敏感性。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同中藥對河流弧菌的體外抑制效果

2.1.1 不同中藥單方對河流弧菌的體外抑制效果黃連、訶子對河流弧菌抑菌作用明顯， 為極敏感。烏梅、黃柏、板藍根、黃芪、梔子對河流弧菌抑菌作用較明顯，為高敏。青蒿、醋五味子、大黃抑菌效果為中敏。滅菌作用以黃連最強(表1)。參照實驗菌種標準金黃色葡萄球菌對河流弧菌抑菌直徑數(shù)據(jù)，說明本實驗結(jié)果可信度強。由于中藥濃度為240 mg·mL-1，在這較低的中藥濃度下，包括白芍、檳榔、梔子、黃芩、連翹、炒槐花、甘草、木香、艾葉、炒川楝子、蒲公英、貫眾、野菊花、魚腥草、白茅根、苦參、金銀花、地錦草、千里光、榧子、使君子、柴胡、五倍子、槐花、大蒜、螺旋藻、刺五加、杜仲葉、穿心連、黨參、枸杞子、大蒜、白頭翁、茯苓、鉤藤、虎杖、郁金、炒槐花等共40種中藥無抑菌效果。

表1 240 mg·mL-1質(zhì)量濃度下有效10味單方中藥對河流弧菌的抑菌作用

注：結(jié)果判定標準:抑菌直徑≥ 20 mm為極敏感“+ + +”；15 mm≤抑菌直徑< 20 mm為高敏“+ +”；10 mm≤抑菌直徑< 15 mm為中敏“+”；抑菌直徑< 10 mm低敏或無效“-”。下同

Note: Sensibility of bacteriostatic activity according to the diameter of inhibition zone: Diameter of inhibition zone larger or equal to 20 mm means extreme sensitivity“+ + +”; diameter of inhibition zone from 15 mm to 20 mm means high sensitivity “+ +”; diameter of inhibition zone from 10 mm to 15 mm means moderate sensitivity “+”; diameter of inhibition zone less than 10 mm means low or no sensitivity“-”. Similarly hereinafter

2.1.2 不同復(fù)方二聯(lián)中藥對河流弧菌的體外抑制效果在60 mg·mL-1低藥物質(zhì)量濃度時，黃柏、黃連組成復(fù)方對河流弧菌抑菌作用為極敏感，大黃、黃連復(fù)方對菌抑菌作用為高敏(表2)。訶子+白芍、訶子+烏梅、黃連+醋五味子、訶子+醋五味子、黃連+訶子、黃柏+板藍根、黃芩+黃連、黃柏+白芍、黃柏+醋五味子、黃芩+訶子、黃柏+訶子、板藍根+訶子、大黃+黃柏、大黃+黃芩、黃柏+黃芩、黃柏+烏梅、板藍根+烏梅、訶子+烏梅、黃芩+板藍根、黃芩+烏梅、白芍+醋五味子、烏梅+白芍22種復(fù)方中藥無藥效。在240 mg·mL-1藥物濃度時，黃柏、黃連等組成9個復(fù)方中藥對河流弧菌抑菌作用屬極敏感，抑菌直徑大于20 mm(表3)，烏梅、醋五味子等組成9個復(fù)方中藥對河流弧菌抑菌作用屬高敏，槐花、大黃組成復(fù)方中藥、 蒲公英組成復(fù)方中藥、五味子組成復(fù)方中藥五味子、苦參組成復(fù)方中藥抑菌效果為中敏，訶子+烏梅、黃柏+板藍根、黃柏+醋五味子、黃柏+白芍、黃芩+訶子、黃芩+黃連、板藍根+訶子、黃柏+訶子、貫眾+白芍、黃芩+板藍根、黃芪+白芍、黃芪+大黃、槐花+黃柏、大黃+黃柏、大黃+黃芩、黃柏+黃芩、白芍+醋五味子、梔子+大黃、梔子+黃芩、連翹+黃芩、梔子+連翹、連翹+黃柏、槐花+大黃、黃連+木香、艾葉+黃連、蒲公英+野菊花、蒲公英+黃連、蒲公英+五味子、蒲公英+苦參、蒲公英+板藍根、貫眾+黃芪、貫眾+連翹、野菊花+板藍根、苦參+五味子組成復(fù)方中藥等34個復(fù)方中藥無藥效(表3)。參照實驗菌種標準金黃色葡萄球菌對河流弧菌抑菌的直徑數(shù)據(jù)，說明本實驗結(jié)果可信度高(表2，3)。相對于一聯(lián)中藥，二聯(lián)中藥的藥效更強，選擇性能功效相類似的藥物配合應(yīng)用，能增強療效。

表2 60 mg·mL-1質(zhì)量濃度下有效二聯(lián)中藥對河流弧菌的抑菌作用

表3 240 mg·mL-1質(zhì)量濃度下有效二聯(lián)中藥對河流弧菌的抑菌作用

2.1.3 不同復(fù)方三聯(lián)中藥對河流弧菌的體外抑制效果在60 mg·mL-1低濃度藥物時，黃連、訶子、黃柏組成復(fù)方中藥、黃連、烏梅、黃柏組成復(fù)方中藥抑菌效果為中敏(表4)。蒲公英+五味子+訶子、訶子+白芍+蒲公英、訶子+醋五味子+板藍根、訶子+醋五味子+蒲公英、蒲公英+野菊花+訶子、訶子+烏梅+板藍根、烏梅+黃柏+訶子、烏梅+黃芩+訶子、黃連+板藍根+黃柏、黃連+醋五味子+黃芪、黃連+白芍+黃柏、訶子+醋五味子+甘草、烏梅+白芍+訶子、訶子+白芍+板藍根、烏梅+醋五味子+訶子、黃連+醋五味子+黃柏、黃連+黃芪+黃柏、黃連+白芍+黃芪、黃連+板藍根+黃芪、黃連+大黃+黃芪、黃連+連翹+黃芪、訶子+烏梅+甘草、訶子+烏梅+蒲公英、黃連+連翹+黃柏、板藍根+訶子+甘草、蒲公英+苦參+訶子、大黃+梔子+白芍、訶子+白芍+甘草、黃連+大黃+黃柏、黃連+烏梅+黃芪、烏梅+醋五味子+黃連、烏梅+黃柏+黃連、烏梅+白芍+黃連、烏梅+板藍根+黃連、烏梅+黃芩+黃連、烏梅+板藍根+訶子、白芍+醋五味子+大黃、大黃+槐花+白芍、大黃+黃芪+白芍、白芍+貫眾+大黃、黃柏+訶子+黃芪、黃連+訶子+黃芪、苦參+五味子+白芍、黃芩+訶子+黃芪、蒲公英+木香+訶子、黃芩+連翹+黃芪、黃芩+板藍根+黃芪、黃柏+醋五味子+黃芪48種復(fù)方中藥均無抑菌效果。在240 mg·mL-1藥物濃度時，黃連、板藍根、黃柏組成復(fù)方中藥、黃連、烏梅、黃柏組成復(fù)方中藥、黃連、白芍、黃柏組成復(fù)方中藥、黃連、黃芪、黃柏組成復(fù)方中藥、黃連、烏梅、黃芪組成復(fù)方中藥對河流弧菌的抑菌作用明顯，抑菌直徑大于20 mm，為高敏。黃連、醋五味子、黃柏組成復(fù)方中藥，黃連、大黃、黃芪組成復(fù)方中藥，黃連、醋五味子、黃芪組成復(fù)方中藥，黃連、連翹、黃柏組成復(fù)方中藥，黃連、白芍、黃芪組成復(fù)方中藥，黃連、連翹、黃芪組成復(fù)方中藥，黃連、訶子、黃柏組成復(fù)方中藥，黃連、板藍根、黃芪組成復(fù)方中藥，烏梅、醋五味子、黃連組成復(fù)方中藥，烏梅、黃柏、黃連組成復(fù)方中藥，烏梅、白芍、黃連組成復(fù)方中藥，烏梅、板藍根、黃連組成復(fù)方中藥，對河流弧菌的抑菌作用較明顯，為高敏。黃連、大黃、黃柏組成復(fù)方中藥，烏梅、黃芩、訶子組成復(fù)方中藥，烏梅、黃芩、黃連組成復(fù)方中藥，對河流弧菌的抑菌效果為中敏(表5)。蒲公英+五味子+訶子、訶子+白芍+蒲公英、訶子+醋五味子+板藍根、訶子+醋五味子+蒲公英、蒲公英+野菊花+訶子、訶子+烏梅+板藍根、烏梅+黃柏+訶子、訶子+醋五味子+甘草、烏梅+白芍+訶子、訶子+白芍+板藍根、烏梅+醋五味子+訶子、訶子+烏梅+甘草、訶子+烏梅+蒲公英、板藍根+訶子+甘草、蒲公英+苦參+訶子、訶子+白芍+甘草、大黃+梔子+白芍、烏梅+板藍根+訶子、白芍+醋五味子+大黃、大黃+槐花+白芍、大黃+黃芪+白芍、白芍+貫眾+大黃、黃柏+訶子+黃芪、黃連+訶子+黃芪、苦參+五味子+白芍、黃芩+訶子+黃芪、蒲公英+木香+訶子、黃芩+連翹+黃芪、黃芩+板藍根+黃芪、黃柏+醋五味子+黃芪30種復(fù)方無抑菌效果。參照實驗菌種標準金黃色葡萄球菌對河流弧菌抑菌直徑數(shù)據(jù)，說明本實驗結(jié)果可信度強(表4，5)。相對于一聯(lián)中藥，二聯(lián)中藥的藥效，三聯(lián)的中藥抑菌作用強的中藥復(fù)方總數(shù)增加較多，說明選擇性能功效相類似的藥物配合應(yīng)用，中藥數(shù)增加能較大增強療效。

表460mg·mL-1濃度下有效三聯(lián)中藥對河流弧菌的抑菌作用

Tab.4 Results ofinvitrobacteriostatic experiment of combined prescriptions with 3 species of traditional

Chinese medicinal plants (60 mg·mL-1) on Vibro fluvialis

2.2 8種抗生素藥物敏感試驗河流弧菌對恩諾沙星、鹽酸多西環(huán)素、氟苯尼考、土霉素及磺胺嘧啶5種藥物高度敏感，對硫酸新霉素中度敏感，對硫酸慶大霉素及甲氧芐啶/磺胺甲噁唑2種藥物耐藥，具體見表6。

表5 240 mg·mL-1質(zhì)量濃度下有效三聯(lián)中藥對河流弧菌的抑菌作用

表6 河流弧菌藥物敏感性實驗

注：S，高度敏感；I，中度敏感；R，耐藥

Note: S, Highly sensitive; I, Moderately sensitive; R, Resistant

3 討 論

河流弧菌是一種可常見于海水養(yǎng)殖動物(如青石斑Epinephelusawoara)中的嗜鹽性致病菌，具有較強的致病性，能引起多種養(yǎng)殖動物包括石斑魚的疾病[3]，發(fā)病，病理變化主要表現(xiàn)為腹部膨大，死亡率高等，易造成較大損失。

3.1 單方中藥的抗菌作用中藥具有顯著的抗菌作用，具有顯著而廣譜的抗菌活性。中藥抑制細菌主要通過破壞其酶活性與繁殖，使菌蛋白質(zhì)變性、失活。中藥已廣泛用于多種魚類疾病治療，為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展做出重要貢獻[11]， 多位學(xué)者進行中藥細菌體外抑制研究，黃連、黃柏、黃芩等清熱燥濕藥抑菌效果最好[12]，雞源多殺性巴氏桿菌(PasteurellaMultocida)對五味子、黃連、烏梅、黃柏、艾葉4 種藥物極敏[13]。在32 味中藥中， 五倍子、梔子、五味子、烏梅、黃芩、黃連、對嗜水氣單胞菌具有較強抑菌活性[14]。黃芩、連翹、黃連、金銀花對鮑曼不動桿菌 (Acinetobacterbaumannii)有不同程度的體外抑菌作用，黃連的抑菌作用最強[15]。五倍子、大黃、虎杖和黃芩單用對養(yǎng)殖病鰻中的嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)均有較好的抑菌作用[16]。采用平板牛津杯法研究中藥對溫和氣單胞菌(Aeromonassobria)的抑菌結(jié)果，在30 種中藥中，五倍子、白芍、對溫和氣單胞菌具有較強抑菌活性[8]，黃芩優(yōu)于金銀花，雞源多殺性巴氏桿菌對五味子、黃連、烏梅藥物極敏感。黃連、黃柏、艾葉對禽多殺性巴氏桿菌(Pasteurellamultocida)敏感[17]。鰻鱺致病性氣單胞菌抑菌強弱依次為五倍子>石榴皮>大黃>黃芩>虎杖>黃連[7]。由此表明，因不同致病菌對不同中藥所含有效抗菌成分的敏感度不同。以上學(xué)者研究得出較強抑菌活性的中藥與本研究結(jié)果相似。本研究50種中藥對河流弧菌抑菌結(jié)果表明，單味中藥質(zhì)量濃度為240 mg·mL-1時，黃連、訶子、烏梅、黃柏、板藍根、黃芪、梔子對河流弧菌抑菌效果較強。與彭金菊研究結(jié)果相似，訶子、黃連也對嗜水氣單胞菌具有較強抑菌活性[14]。實驗菌種標準金黃色葡萄球菌及河流弧菌抑菌直徑數(shù)據(jù)與本實驗結(jié)果相近，說明本實驗結(jié)果可信度高。目前，國內(nèi)學(xué)者僅對少數(shù)幾種單藥的細菌體外抑制進行研究，而本研究首次進行50種藥物對細菌體外抑制比較研究，并篩選出抑菌有效藥物。

3.2 復(fù)方中藥的抗菌作用中藥復(fù)方是按君臣佐使的原則配伍而成。單味藥組成復(fù)方后可呈現(xiàn)協(xié)同抑菌作用，通過合理配制組方篩選，協(xié)同增效，取得更好的抑制細菌效果。復(fù)方藥物體外抑菌效果主要取決于藥物配比及各成分的濃度。本研究不同復(fù)方二聯(lián)中藥對河流弧菌的體外抑制效果，在240 mg·mL-1藥物濃度時，黃柏與黃連、黃連與烏梅等組成復(fù)方中藥對河流弧菌的抑菌作用明顯，為極敏感；訶子、白芍等3個復(fù)方中藥對河流弧菌抑菌作用為高敏；槐花與大黃組、五味子與苦參組成復(fù)方中藥抑菌效果為中敏，板藍根、訶子等30個復(fù)方中藥無藥效。參照實驗菌種標準金黃色葡萄球菌對河流弧菌抑菌直徑數(shù)據(jù)，說明本實驗結(jié)果可信度高。相對于一聯(lián)中藥，二聯(lián)中藥的藥效更強，選擇性能功效相類似的藥物配合應(yīng)用，能增強療效。

三聯(lián)復(fù)方中藥比雙聯(lián)復(fù)方中起更顯著協(xié)同增效的體外抑菌效果[22-24]，較大增強復(fù)方中單味中藥的抑菌作用。彭金菊等測得五倍子分別與黃連、訶子，大黃、同時五倍訶子與其他多種中藥組成的復(fù)方抗菌作用增強[14]，與本研究結(jié)果相似。按一定比例組成的復(fù)方的抑菌及殺菌活性都強過組成復(fù)方的各單味藥，并且抑菌及殺菌活性都強過大黃、芩藍散、黃連解毒散和青蓮散[14]。國內(nèi)學(xué)者進行少數(shù)藥物的復(fù)方研究，尚未見將22種有效單味藥進行不同組合的抑菌研究，本研究不同復(fù)方三聯(lián)中藥對河流弧菌的體外抑制效果，在藥物60 mg·mL-1低質(zhì)量濃度時，黃連、訶子、黃柏組成復(fù)方中藥，黃蓮、烏梅、黃柏組成復(fù)方中藥，抑菌效果為中敏，其他如蒲公英、五味子、訶子組成的復(fù)方中藥等48種復(fù)方中藥均無抑菌效果；在藥物240 mg·mL-1質(zhì)量濃度時，黃連、板藍根、黃柏三聯(lián)中藥及黃連、醋五味子、黃柏組成復(fù)方中藥對河流弧菌的抑菌作用較明顯，為高敏。另黃柏、訶子、黃芪組成的復(fù)方中藥，黃連、訶子、黃芪組成的復(fù)方中藥等30種復(fù)方無抑菌效果。參照實驗菌種標準金黃色葡萄球菌對河流弧菌抑菌直徑數(shù)據(jù)，說明本實驗結(jié)果可信度強。相對于一聯(lián)中藥，二聯(lián)中藥的藥效，三聯(lián)的中藥抑菌作用強的中藥復(fù)方增加較多。本研究結(jié)果對于河流弧菌感染性石斑魚疾病的中藥治療有一定的意義。

3.3 抗生素藥物的抑菌作用抗生素在養(yǎng)殖業(yè)中廣泛且不合理應(yīng)用，使細菌的耐藥性日趨嚴重，給治療帶來了困難[18]。病原菌對抗生素的藥敏試驗具有重要意義，秦蕾等[19]研究發(fā)現(xiàn)腐敗希瓦氏菌(Shewanellaputrefaciens)對恩諾沙星較敏感，長吻鮠(Leiocassislongirostris) 鮰愛德華氏菌(Edwardsvilleictaluri)對恩諾沙星、鹽酸多西環(huán)素、敏感[20]，虹鱒魚源氣單胞菌(Aeromonasspp.)對鹽酸多西環(huán)素和氟喹諾酮類藥物較為敏感，耐藥率均低于10%。其中鹽酸多西環(huán)素為最敏感的藥物，敏感率為100%[9]?；前粪奏こＷ鳛橐环N飼料添加劑用于預(yù)防動物疾病，單增李斯特菌(Listeriamonocytogenes)對其的耐藥率非常高，達到了46. 15%[21]，氟苯尼考容易使病原菌短時間產(chǎn)生較高的耐藥性，并且耐藥性消失較慢[20]。以上學(xué)者研究結(jié)果與本研究結(jié)果相似，河流弧菌對恩諾沙星、鹽酸多西環(huán)素、氟苯尼考、土霉素及磺胺嘧啶5種藥物高度敏感。國內(nèi)尚無學(xué)者進行多種養(yǎng)殖生產(chǎn)常用抗生素的細菌藥敏比較研究，本研究中河流弧菌對硫酸慶大霉素及甲氧芐啶/磺胺甲噁唑產(chǎn)生了耐藥。為減少耐藥性產(chǎn)生，在防治河流弧菌引起的疾病過程中，應(yīng)注意輪換使用不同抗生素。

河流弧菌耐藥機制多樣，尤其是抗生素被廣泛應(yīng)用以來，細菌耐藥性迅速增加，耐藥機制也變得越來越復(fù)雜,養(yǎng)殖戶和生產(chǎn)人員在養(yǎng)殖過程中，要在國家允許的藥物使用范圍內(nèi)，選取敏感藥物用于病害防治。合理使用抗生素類藥物，對防治日益嚴重的感染、減少耐藥菌的產(chǎn)生以及控制耐藥菌的傳播均具有十分重要的意義。中藥療效好，同時能增強魚體的免疫力，對于抗生素有抗藥性的細菌，中藥有良好抑菌作用。而抗生素具有治療效果快，用藥量少，是養(yǎng)殖中病害防治常用藥。使用中藥復(fù)方藥物，或中西藥聯(lián)用藥物，可降低抗生素用量，可減少魚類抗生素殘留，有利于出口創(chuàng)匯，同時可治療多種生產(chǎn)上長期使用抗生素已無法治愈的魚病，達到較好的治療魚病效果，促進我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展。