邢紅宇 盧瑞麗 梁寧 周君霞

老年癡呆癥是一種以記憶力衰退、認(rèn)知功能障礙、人格改變等為主要癥狀的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，常見類型包括阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease，AD）、血管性癡呆等［1-2］。輕度認(rèn)知功能障礙（mild cognitive impairment，MCI）是介于正常老化和癡呆之間的過渡階段，其向AD的轉(zhuǎn)化率明顯高于正常人群［3］，而以情景記憶受損為核心癥狀的遺忘型MCI（amnestic MCI，aMCI）又是向AD轉(zhuǎn)化率最高的MCI類型［4］。近年研究發(fā)現(xiàn)，血漿同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）水平升高與aMCI的發(fā)生密切相關(guān)［5］，而 Hcy代謝關(guān)鍵酶 N5，N10-亞甲基四氫葉酸還原酶（methylene tetrahydrofolate reductase，MTHFR）基因突變會對MTHFR活性和熱穩(wěn)定性產(chǎn)生不同程度的影響，進(jìn)而影響體內(nèi)Hcy濃度［6］。在此背景下，本研究探討了MTHFRC677T基因多態(tài)性及血漿Hcy水平的相關(guān)性以及二者與aMCI患者認(rèn)知功能水平的關(guān)系，以期為該病的早期診斷和干預(yù)提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選擇2017年6月至2018年6月期間海南省中醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科及門診收治的50例aMCI患者作為研究對象，納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合aMCI診斷標(biāo)準(zhǔn)；②臨床資料完整；③對本研究知情同意且簽字或摁手印確認(rèn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①排除由抑郁、癲癇、腦炎、頭顱外傷、腦腫瘤等疾病導(dǎo)致的認(rèn)知障礙；②存在明確精神疾病史；③嚴(yán)重視聽力障礙、語言功能障礙或肢體殘疾無法配合檢查者。并選擇60例同期在我院接受健康體檢的健康者作為對照組。本研究通過本院倫理委員會的批準(zhǔn)。

aMCI診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照 Petersen 診斷標(biāo)準(zhǔn)［7］及MCI國際工作組修訂的診斷程序［8］，①存在主觀記憶力減退癥狀，且病程持續(xù)3個月以上；②存在記憶力減退的客觀檢查證據(jù)（低于年齡和受教育程度相對應(yīng)的對照的1.5個標(biāo)準(zhǔn)差以上）；③一般認(rèn)知功能和日常生活能力正常；④臨床癡呆評定量表測量顯示無癡呆。

1.2 方法

1.2.1 一般資料搜集

記錄2組研究對象年齡、性別、高血壓、糖尿病、卒中、高血脂疾病史、吸煙、嗜酒、受教育年限等一般資料。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測

1.2.2.1 生化指標(biāo)檢測

抽取患者晨起空腹外周靜脈血5 mL，測定膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、尿酸（uric acid，UA）、血漿Hcy濃度。同型半胱氨酸測定試劑盒（循環(huán)酶法）和ZS-320型全自動生化分析儀購自中生北控生物科技股份有限公司；膽固醇檢測試劑盒（酶比色法）、甘油三酯檢測試劑盒（比色法）、低密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒（酶比色法）、高密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒（酶比色法）、尿酸檢測試劑盒比色法（比色法）以及P800全自動生化分析儀均購置德國Roche公司。嚴(yán)格按照試劑盒說明書及儀器操作指南進(jìn)行檢測。以上測量均進(jìn)行3次，以3次重復(fù)測定的平均值作為最后結(jié)果。

1.2.2.2 MTHFRC677T基因多態(tài)性檢測

抽取患者肘靜脈血2 mL，置于EDTA抗凝采血管中，于-20℃保存。亞甲基四氫葉酸還原酶基因677C/T檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）購自深圳奧薩制藥有限公司。檢測研究對象MTHFRC677T基因型，檢測設(shè)備為美國ABI公司7500型熒光定量PCR儀。嚴(yán)格按照試劑盒說明書及儀器操作指南進(jìn)行檢測。

1.2.3 認(rèn)知功能水平測定

采用蒙特利爾認(rèn)知評估量表（montreal cognitive assessment，MoCA）［9］評價(jià) aMCI組患者認(rèn)知功能水平，該量表包括8個認(rèn)知領(lǐng)域：①視空間/執(zhí)行能力（5分）：包括交替連線（1分）、三維立方體圖形復(fù)制（1分），畫鐘測驗(yàn)（3分）；②命名（3分）；③記憶功能（不評分）：對5個詞語的2遍學(xué)習(xí)記憶和5 min后延遲記憶測驗(yàn)，詞語流暢性測驗(yàn)（1分），延遲記憶（5分）；④注意力（6分）：包括數(shù)字廣度測試（2分）、警覺性（1分）、連續(xù)減7（3分）；⑤語言（3分）：包括復(fù)述（2分）、語言流暢性（1分）；⑥抽象思維能力（2分）；⑦延遲回憶（5分）；⑧定向能力（6分）：包括時間定向和地點(diǎn)定向。總分設(shè)為30分，若教育年限≤12年加1分，MoCA評分在27～30分為正常，＜27分為認(rèn)知功能障礙，MoCA評分≤13分（文盲）、≤19分（小學(xué)畢業(yè)）、≤24分（初中畢業(yè)及以上）為癡呆。以上評分均由經(jīng)專業(yè)培訓(xùn)合格的護(hù)士進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 21.0軟件，其中多組計(jì)量資料的比較采用F檢驗(yàn)，2組計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Logistic回歸分析aMCI發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組一般資料比較

2組研究對象在年齡、性別構(gòu)成、受教育年限、高血壓、糖尿病、高血脂、吸煙和飲酒等一般資料方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 2組一般資料比較Table 1 Comparison of general information of the 2 groups

2.2 2組實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)比較

2組研究對象TG、HDL-C水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；2組在 TC、LDL-C、UA、Hcy水平及MTHFRC677T基因型分布和等位基因頻率比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。aMCI組 TC、Hcy水平顯著高于對照組（P＜0.05）。與對照組比較，aMCI組TT基因型比例增加，CC基因型比例降低，T等位基因頻率增高，C等位基因降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 2組實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)比較Table 2 Comparison of laboratory indexes of the 2 groups

2.3 2組MTHFRC677T基因型血漿Hcy水平的比較

aMCI組中不同MTHFRC677T基因型患者的Hcy水平均顯著高于對照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。組內(nèi)兩兩比較后發(fā)現(xiàn)，2組TT基因型的血漿Hcy水平均顯著高于CC基因型的血漿Hcy水平（P＜0.05），2組 CT與 TT基因型，CT與CC基因型的血漿Hcy水平比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

表3 2組MTHFR C677T基因型血漿Hcy水平的比較（±s，μmol/L）Table 3 Comparison of plasma Hcy levels in 2 groups of MTHFR C677T genotypes（±s，μmol/L）

表3 2組MTHFR C677T基因型血漿Hcy水平的比較（±s，μmol/L）Table 3 Comparison of plasma Hcy levels in 2 groups of MTHFR C677T genotypes（±s，μmol/L）

與對照組比較，*P＜0.05；與同組CC型比較，#P＜0.05。

組別aMCI組對照組t值P值血漿Hcy水平CC 15.40±2.26*10.15±2.91 6.158 0.000 TT 18.97±2.02*#12.42±1.01#12.432 0.000 CT 17.51±4.28*11.81±3.04 3.575 0.000

2.4 不同MTHFRC677T基因型aMCI患者M(jìn)o-CA評分比較

CC、CT和TT基因型aMCI患者對應(yīng)的平均MoCA 評分分別為（24.37±1.21）分、（23.26±1.02）分和（22.14±0.96）分，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=18.681，P=0.000），兩兩比較差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.5 Logistic回歸分析aMCI發(fā)生的危險(xiǎn)因素

單變量Logistic回歸分析顯示TC、UA、Hcy水平和MTHFRC677T基因型與aMCI相關(guān)。進(jìn)一步采用多元Logistic回歸分析顯示，UA與aMCI存在負(fù)相關(guān)關(guān)系，可能是aMCI的保護(hù)因素；TC、Hcy和MTHFRC677T基因型與aMCI存在正相關(guān)關(guān)系，可能是aMCI的危險(xiǎn)因素，見表4。

表4 aMCI發(fā)生危險(xiǎn)因素Logistic回歸分析Table 4 Logistic regression analysis of risk factors for aMCI

3 討論

隨著人口老齡化進(jìn)程加速以及醫(yī)療衛(wèi)生水平的提高，人類壽命明顯延長，老年癡呆發(fā)病率逐年升高，業(yè)已成為全球性的公共衛(wèi)生問題之一。其中AD是最常見的類型，具有病程長且不可逆、醫(yī)療護(hù)理負(fù)擔(dān)重等特點(diǎn)，不僅嚴(yán)重危害患者的健康，同時也給家庭及社會造成巨大而沉重的負(fù)擔(dān)。MCI是老年癡呆的過渡階段，根據(jù)記憶功能是否受損，可進(jìn)一步分為遺忘型MCI和非遺忘型MCI。aMCI以記憶損害為主，是MCI最常見的類型，也是AD型癡呆的高危人群。但aMCI的轉(zhuǎn)歸具有高度異質(zhì)性，其中40%以上的患者可逆轉(zhuǎn)為正常人，10%～15%可進(jìn)展為AD，部分維持MCI狀態(tài)或發(fā)展為其他疾病［10］。因此，明確AD及aMCI患者的相關(guān)生物學(xué)指標(biāo)，盡早準(zhǔn)確診斷aMCI并予以積極干預(yù)，對疾病的轉(zhuǎn)歸及降低AD發(fā)生率具有重要意義。

本研究比較了aMCI患者和健康者一般資料、血清生化指標(biāo)和MTHFRC677T基因型分布情況，結(jié)果顯示2組研究對象的年齡、性別構(gòu)成、受教育年限、高血壓、糖尿病、高血脂、吸煙和飲酒等一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示高血壓、糖尿病等是認(rèn)知功能障礙發(fā)生的危險(xiǎn)因素［11］，但本研究結(jié)果顯示2組研究對象高血壓、糖尿病發(fā)生率無顯著差異，這可能與本研究納入人群年齡較大有關(guān)，該人群中高血壓和糖尿病發(fā)生率較高。血清生化指標(biāo)檢測結(jié)果則顯示，2組在TC、LDL-C、UA、Hcy水平及MTHFRC677T基因型分布和等位基因頻率比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），aMCI組 UA 水平顯著低于對照組（P＜0.05）。有報(bào)道顯示，Hcy水平與認(rèn)知功能呈負(fù)相關(guān)，Hcy水平越高，認(rèn)知功能下降越嚴(yán)重［12］。李揚(yáng)娜等［13］研究結(jié)果也顯示aMCI血漿Hcy水平顯著高于健康對照組（P＜0.05），另外 aMCI患者M(jìn)THFR C677T基因T等位基因分布頻率顯著高于對照組，與本研究結(jié)果一致。Hcy是甲硫氨酸脫甲基后形成的一種含硫氨基酸，參與體內(nèi)多種能量代謝過程和甲基化反應(yīng)［14］，是目前公認(rèn)的心腦血管性疾病的危險(xiǎn)因素，與動脈粥樣硬化、高血壓、糖尿病、中風(fēng)、心肌梗死等的發(fā)生密切相關(guān)。近年研究發(fā)現(xiàn)，血漿Hcy水平升高也是認(rèn)知功能損傷、癡呆的危險(xiǎn)因素［15］。高Hcy可產(chǎn)生神經(jīng)毒性而致神經(jīng)元損傷，同時產(chǎn)生大量氧自由基，介導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)，造成血管內(nèi)皮損傷，導(dǎo)致動脈粥樣硬化，從而進(jìn)一步降低認(rèn)知功能，最終發(fā)生癡呆［16］。

目前尚未見到有關(guān)MTHFRC677T基因型與aMCI患者認(rèn)知功能水平關(guān)系的報(bào)道。本研究采用蒙特利爾認(rèn)知評估量表評價(jià)aMCI患者認(rèn)知功能水平，并分析了不同MTHFRC677T基因型與aMCI患者認(rèn)知功能水平的關(guān)系，結(jié)果表明，MTHFR C677T基因CC、CT和TT 3種基因型認(rèn)知功能水平兩兩比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中TT型患者認(rèn)知功能水平最低，其次為CT型患者。這可能與TT型患者血漿Hcy水平最高，心腦血管損害最為嚴(yán)重有關(guān)。MTHFR是血漿Hcy代謝的限速酶，其活性降低則可引起Hcy水平的升高。編碼MTHFR的基因具有多態(tài)性，其中以C677T多態(tài)性最為常見，是指編碼該酶的基因在第677位的核苷酸堿基發(fā)生錯義突變，由堿基T替換了堿基C，繼而產(chǎn)生了HinfⅠ限制性酶切位點(diǎn)，導(dǎo)致MTHFR活性及穩(wěn)定性下降［17］，已知突變TT純合子的酶活性僅有正常的30%，CT雜合子的酶活性是正常的65%，從而使Hcy代謝通路受阻而導(dǎo)致其在血液中蓄積，誘發(fā)多種疾?。?8］。

本研究結(jié)果還顯示aMCI發(fā)生與TC水平呈正相關(guān)關(guān)系，這可能與TC水平升高能夠損害腦血管內(nèi)皮細(xì)胞，引起腦動脈粥樣硬化，減少腦部血流有關(guān)。本研究采用Logistic回歸分析aMCI發(fā)生的危險(xiǎn)因素，結(jié)果表明UA可能是aMCI的保護(hù)因素，TC、Hcy和MTHFRC677T基因型可能是aMCI的危險(xiǎn)因素。以往有研究表明高水平UA能夠減緩MCI患者認(rèn)知功能下降速度［19］，降低癡呆發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)［20］。UA對認(rèn)知功能的保護(hù)作用主要原因是UA是體內(nèi)天然的抗氧化劑，對超氧化物、羥自由基、活性氧具有良好的清除能力。病理狀態(tài)下，中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)活性氧和抗氧化系統(tǒng)之間的平衡被打破，活性氧對中樞神經(jīng)系統(tǒng)造成損傷，影響認(rèn)知功能，而UA通過清除活性氧，起到保護(hù)海馬神經(jīng)元的作用，進(jìn)而保護(hù)人體認(rèn)知功能［21］。

由此可見，MTHFRC677T基因突變致血漿Hcy濃度升高可能是aMCI發(fā)病及不斷進(jìn)展的重要危險(xiǎn)因素，盡早采取有效措施降低Hcy水平可能是逆轉(zhuǎn)aMCI、減少AD發(fā)生的有效手段。