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上海市嘉定區(qū)兒童感染性腹瀉病原菌檢測結果分析

2019-01-17 20:57:04余瑋孫攀彭謙宣棟樑
中國衛(wèi)生標準管理 2019年7期
關鍵詞:耶爾森平皿沙門

余瑋 孫攀 彭謙 宣棟樑

腹瀉是全球性公共衛(wèi)生問題,是引起發(fā)展中國家兒童死亡的第二大病因,發(fā)生腹瀉的最主要原因是感染性腹瀉,包括感染腸道病原菌、病毒或寄生蟲等病原體,其中由腸道病原菌引起的感染性腹瀉較為嚴重。近年來,兒童腹瀉的預防和防治工作廣泛受到我國醫(yī)學腸道門診部門的重視,病死率顯著下降。為了解嘉定區(qū)兒童感染性腹瀉的病原菌分布種類及流行特征,我們依托上海市兒童腹瀉病監(jiān)測工作,選取某哨點醫(yī)院,開展包括5種腸致瀉性大腸桿菌(diarrheagenic Escherichia coli,DEC)、沙門菌、空腸彎曲菌、副溶血性弧菌、小腸結腸炎耶爾森菌和志賀菌的檢測工作,以期為研究兒童感染性腹瀉提供可靠的臨床依據。

1 材料與方法

1.1 標本的來源

從2015年5月—2018年4月,按30∶1抽樣間隔,采集臨床診斷為感染性腹瀉的兒童糞便標本共333例,患兒年齡分布0~11歲,男175例,女158例。感染性腹瀉定義為每日排便≥3次,且糞便性狀異常,如稀便、水樣便、黏液膿血便等,標本置室溫保存于卡里-布萊爾運送培養(yǎng)基,24 h內送至實驗室檢測。

1.2 主要試劑和儀器

各種培養(yǎng)平皿均購自上海科瑪嘉,運送培養(yǎng)基、副溶增菌液、改良磷酸鹽緩沖液(PBS)、克氏雙糖鐵瓊脂(KIA)、動力-靛基質-尿素半固體培基(MIU)、改良克氏雙糖鐵瓊脂、氧化酶試劑和弧菌屬耐鹽試劑均購自上海疾控,亞硒酸亮綠磺胺增菌肉湯(SBG)購自BD公司,API20E、APICampy、API20NE及配套試劑購自法國生物梅里埃,沙門菌診斷血清購自日本生研,O157∶H7診斷血清購自天津生物芯片,5種腸致瀉性大腸桿菌的熒光PCR檢測商品化試劑盒購自上海之江,PCR檢測使用上海宏石醫(yī)療科技有限公司的SLAN熒光定量PCR檢測系統(tǒng)。5種腸致瀉性大腸桿菌熒光PCR檢測的毒力基因分別:腸致病性大腸桿菌(EPEC)—eaeA、bfpA,腸集聚性大腸桿菌(EAEC)—aggR,產志賀毒素大腸桿菌(STEC)—stx1、stx2,腸產毒性大腸桿菌(ETEC)—lt、st,腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)—ipaH。

1.3 病原菌檢測

依據WS271-2007感染性腹瀉診斷標準、WS287-2008細菌性痢疾和阿米巴痢疾診斷標準。腸致瀉性大腸桿菌:按PCR檢測試劑盒操作說明書,直接從糞便中檢測;同時將標本接種營養(yǎng)肉湯、(mEC+n)增菌液、麥康凱和山梨醇麥康凱平皿,若某種腸致瀉性大腸桿菌的PCR結果陽性,就從平皿上挑取若干可疑菌落做KIA、MIU和API20E鑒定,結果符合的再做該腸致瀉性大腸桿菌的PCR檢測以找到純菌株。沙門菌:接種SBG、木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽(XLD)和沙門顯色平皿,挑取可疑菌落做KIA、MIU試驗,結果符合的做血清凝集試驗??漳c彎曲菌:接種CCDA平皿微需氧培養(yǎng),挑取氧化酶、觸酶、馬尿酸鹽水解試驗陽性的可疑菌落做APICampy鑒定。副溶血性弧菌:接種副溶增菌液、副溶平皿,挑取氧化酶陽性的可疑菌落做弧菌屬耐鹽試驗和API20NE鑒定。小腸結腸炎耶爾森菌:接種PBS、麥康凱和CIN平皿,挑取可疑菌落做改良克氏雙糖鐵、尿素和API20E鑒定。志賀菌:接種麥康凱和XLD平皿,挑取可疑菌落做KIA、MIU試驗,結果符合的做血清凝集試驗。

1.4 統(tǒng)計學處理

應用Excel 2013對數據進行統(tǒng)計分析,計數資料以率(%)表示,組間比較采用χ2檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 病原菌構成

共檢出病原菌79株:腸致瀉性大腸桿菌53株、沙門菌18株、空腸彎曲菌6株、副溶血性弧菌和小腸結腸炎耶爾森菌各1株。53株腸致瀉性大腸桿菌:EPEC32株、EAEC17株、STEC和ETEC各2株。32株EPEC都是非典型EPEC。1株STEC為O157 :H7血清型,產stx2毒素;另1株STEC為O26抗原陽性,產stx1毒素。18株沙門菌:鼠傷寒和腸炎血清型各6株,羅森血清型2株,肯塔基、湯伯遜、阿哥納和加明那拉血清型各1株。未檢出志賀菌。

2.2 流行病學特征

2.2.1 病原菌檢出率 333例患兒中有74例檢出病原菌,病原菌總檢出率22.2%(74/333);腸致瀉性大腸桿菌、沙門菌、空腸彎曲菌、副溶血性弧菌和小腸結腸炎耶爾森菌在患兒中的檢出率分別為15.6%(52/333)、5.4%(18/333)、1.8%(6/333)、0.3%(1/333)和0.3%(1/333);74例中有5例為混合感染:4例同時檢出沙門菌和腸致瀉性大腸桿菌,1例同時檢出EAEC和ETEC。

2.2.2 病原菌檢出時間分布 腸致瀉性大腸桿菌和沙門菌在5~10月(夏秋季)檢出率分別為26.2%(44/168)、7.7%(13/168),11月~次年4月(冬春季)檢出率分別為4.8%(8/165)、3.0%(5/165),腸致瀉性大腸桿菌在夏秋季與冬春季相比差異有統(tǒng)計學意義(χ2=28.774,P<0.05),沙門菌在夏秋季與冬春季相比差異無統(tǒng)計學意義(χ2=3.608,P>0.05)。

2.2.3 年齡分布 腹瀉兒童年齡分布從0~11歲,腸致瀉性大腸桿菌和沙門菌在不同年齡段檢出率分別為:0~<3歲,14.7%(42/286)、5.2%(15/286);3~<7歲,13.3%(4/30)、3.3%(1/30);7~<10歲,35.7%(5/14)、7.1%(1/14);10~11歲,33.3%(1/3)、33.3%(1/3),腸致瀉性大腸桿菌和沙門菌在各年齡段均差異無統(tǒng)計學意義(χ2=5.313、4.925,P>0.05)。

2.2.4 性別分布 DEC在男、女的檢出率分別為18.9%(33/175)和12.0%(19/158),沙門菌在男、女的檢出率分別為5.1%(9/175)和5.7%(9/158),兩者均差異無統(tǒng)計學意義(χ2=2.941、0.050,P>0.05)。

3 討論

本次監(jiān)測結果顯示:嘉定區(qū)兒童感染性腹瀉中,腸致瀉性大腸桿菌、非傷寒沙門菌和空腸彎曲菌是最常見的三種病原菌。腸致瀉性大腸桿菌檢出率最高,EPEC是最常見類型,EAEC其次,夏秋季高發(fā)。通常依據不同的毒力因子、致病機制和流行病學特征將腸致瀉性大腸桿菌分為5類:EPEC、EAEC、ETEC、STEC和EIEC[1],由于腸致瀉性大腸桿菌菌落形態(tài)不能與普通大腸桿菌區(qū)分,所以先用PCR法直接從糞便中初篩,如有陽性,再挑取若干可疑菌落作進一步鑒定。近年來,EAEC在世界發(fā)達、發(fā)展中國家出現(xiàn)了散發(fā)或暴發(fā)流行[2],在我國雖然還未有類似報道,但在本次監(jiān)測中EAEC檢出位于腸致瀉性大腸桿菌第二位,因此我們需要給予足夠重視。

本次監(jiān)測發(fā)現(xiàn)2株STEC。STEC自1983年以來多次在世界范圍內感染流行,對人類健康構成了極大威脅[3],感染STEC 0157∶H7后,有5%~10%的病例可并發(fā)溶血性尿毒綜合征(HUS),嚴重的導致死亡[4]。本次監(jiān)測中,2例STEC患兒均未出現(xiàn)并發(fā)癥且預后良好,有研究顯示,我國人群中STEC散發(fā)病例的臨床癥狀相對和緩[5],提示我們既要重視病例病情的發(fā)展,也要避免不必要的恐慌。

非傷寒沙門菌檢出率位于病原菌第二位,鼠傷寒和腸炎血清型檢出最多。鼠傷寒沙門菌是一種重要的人畜共患病原菌,約占人源沙門菌感染的40%~80%,可導致醫(yī)院感染和暴發(fā)性食物中毒[6],腸炎沙門菌也是引起食物中毒的常見菌型[7]。

空腸彎曲菌檢出率位于病原菌第三位??漳c彎曲菌是彎曲菌屬中引起人類感染最多的一個種,可經糞口途徑傳播引發(fā)胃腸炎,通常該病自限,但有研究表明彎曲菌是臨床癥狀嚴重和預后較差的格林-巴利綜合征最常見的前驅感染[8]。

副溶血性弧菌和小腸結腸炎耶爾森菌各1例分別在7月和12月檢出。副溶血性弧菌是我國大陸沿海地區(qū)食物中毒中最常見的一種病原菌,是引起成人感染性腹瀉的重要病原菌[9-10],但不是兒童腹瀉的主要病原菌,因為兒童大多在家中就餐,海產品烹飪較衛(wèi)生。小腸結腸炎耶爾森菌能在低溫下長期存活[11],近年來該菌某些血清型引起的腸道感染正在逐漸上升,有些患者可發(fā)展為關節(jié)炎、結節(jié)性紅斑等。

本次監(jiān)測未檢出志賀菌。近年來上海地區(qū)志賀菌的檢出率明顯下降,已經不是引起感染性腹瀉的主要病原菌[12-13]。

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