高言國 陳金林 張?jiān)虑? 鄧兆濱

【摘要】 目的：研究芝麻油（SO）灌腸對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎（UC）的治療作用。方法：25只健康SD雄大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對照組（NC組）、空白對照+SO組（NC+SO組）、模型組（M組）、模型+低劑量SO組（M+SO1組）及模型+高劑量SO組（M+SO2組），每組5只。M組、M+SO1組、M+SO2組建造UC模型。M+SO1組結(jié)腸灌注SO 0.5 mL/100 g;NC+SO組與M+SO2組結(jié)腸灌注SO 1 mL/100 g;NC組與M組予以食用植物油灌腸0.5 mL/100 g。觀察并比較腸黏膜損傷評分及病理表現(xiàn)，比較超氧化物歧化酶（SOD）以及丙二醛（MDA）。結(jié)果：M組病理表現(xiàn)為出現(xiàn)明顯的炎癥反應(yīng)，隱窩出現(xiàn)破壞現(xiàn)象，說明建模成功。M組結(jié)腸損傷評分高于NC組（P<0.01）;M+SO1組與M+SO2組結(jié)腸損傷評分均低于M組（P<0.01）;NC+SO組結(jié)腸損傷評分高于NC組（P<0.05）。M組中MDA含量高于NC組，而SOD含量低于NC（P<0.01）;M+SO1組與M+SO2組的MDA含量均低于M組（P<0.01）;M+SO1組與M+SO2組的SOD含量均高于M組（P<0.01）。結(jié)論：SO可通過提高UC大鼠結(jié)腸組織抗氧化能力抑制炎癥反應(yīng)，發(fā)揮治療作用。

【關(guān)鍵詞】 芝麻油 潰瘍性結(jié)腸炎 超氧化物歧化酶 丙二醛

[Abstract] Objective： To explore the effect of sesame oil （SO） on ulcerative colitis （UC） in rats. Method： A total of 25 healthy SD male rats were divided into blank control group （NC group）， blank control+SO group （NC+SO group）， model group （M group）， model+low dose SO group （M+SO1 group） and model+high dose SO group （M+SO2 group） according to the random number table method， 5 rats in each group. M group， M+SO1 group， M+SO2 group were used to construct the UC model. M+SO1 group was given SO enema 0.5 mL/100 g. NC+SO group and M+SO2? group were given SO enema 1 mL/100 g. NC group and M group were given vegetable oil enema 0.5 mL/100 g. The intestinal mucosa injury score and pathological manifestations were observed and compared. Superoxide dismutase （SOD） and malondialdehyde （MDA） were compared. Result： M group showed obvious inflammatory reaction and destruction of crypt， indicating successful modeling. The intestinal mucosa injury score in M group was higher than that in NC group （P<0.01）. The intestinal mucosa injury score of M+SO1 group and M+SO2 group were lower than that of M group （P<0.01）. The intestinal mucosa injury score of NC+SO group was higher than that in NC group （P<0.05）. MDA content in M group was higher than that in NC group， while SOD content in M group was lower than that in NC group （P<0.01）. The MDA content of M+SO1 group and M+SO2 group were lower than that of M group （P<0.01）. The SOD content of M+SO1 group and M+SO2 group were higher than that of M group （P<0.01）. Conclusion： SO can play a therapeutic role by improving the antioxidant capacity of UC rats colonic tissues and inhibiting inflammatory response.

[Key words] Sesame oil Ulcerative colitis SOD MDA

First-authors address： The Affiliated Xinhua Hospital of Dalian University， Dalian 116021， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.35.003

潰瘍性結(jié)腸炎（UC）又稱非特異性潰瘍性結(jié)腸炎，臨床主要表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、黏液膿血便和里急后重等。該病無特效治療，導(dǎo)致病情遷延反復(fù)，甚至癌變，嚴(yán)重影響患者的身心健康，隨著其發(fā)病率的逐漸增高，受到國內(nèi)外學(xué)者的更多關(guān)注[1]。目前，臨床上5-氨基水楊酸、糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑等藥物的療效不能完全達(dá)到預(yù)期的效果[2]。芝麻油（SO）主要藥效成分是芝麻素，研究發(fā)現(xiàn)芝麻素具有調(diào)節(jié)血脂、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫功能及消除對機(jī)體免疫細(xì)胞有害因素等諸多作用[3]。國外研究表明服用SO能通過抑制腸道炎癥反應(yīng)、酸性粘蛋白分泌和纖維化而加快炎癥腸病的愈合，SO中的芝麻酚具有抗氧化、抑制炎癥反應(yīng)、清除自由基活性等，對UC的腸黏膜起著重要的作用[4-6]。對于肢體外傷的患者局部外用涂抹芝麻油可以減輕疼痛程度和減少NSAIDs藥物應(yīng)用次數(shù)[7-8]。芝麻油外用可以減輕化療和胺碘酮導(dǎo)致的靜脈炎以及應(yīng)用口腔護(hù)理方面，但SO未見對外用治療灌腸UC的研究[9-11]。本文將探究SO灌腸對潰瘍性結(jié)腸炎的治療效果及可能的作用機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器與試劑 健康SD雄大鼠25只，體重220～260 g，由大連大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物室保持12 h晝夜循環(huán)，室溫控制在19～29 ℃，濕度40%～70%，大鼠自由攝取水和標(biāo)準(zhǔn)顆粒食物。BDY-2型恒壓恒流電泳儀：上海博通醫(yī)用儀器廠產(chǎn)品;雷弗BT100S恒流泵：保定雷弗流體科技有限公司產(chǎn)品;GF-1型時(shí)調(diào)速式高速分散器：江蘇海門麒麟醫(yī)用儀器廠產(chǎn)品;電泳儀及玻璃板：大連競邁生物科技有限公司（中國遼寧）Thermo 354酶標(biāo)儀：Thermo Scientific（美國）;試劑：芝麻油，來自中糧集團(tuán)有限公司;2，4，6-三硝基苯磺酸（2，4，6-trinitrobenzene sulfonic acid，TNBS），來自美國Sigma公司，含量≥99%;丙二醛（maleic dialdehyde，MDA）測定試劑盒、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）試劑盒（均購自南京建成生物工程研究所）。

1.2 方法 動物模型建立：25只健康SD雄大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對照組（NC）、空白對照+SO組（NC+SO組）、模型組（M組）、模型+低劑量SO組（M+SO1組）及模型+高劑量SO組（M+SO2組），每組5只。M組、M+SO1組、M+SO2組在乙醚麻醉狀態(tài)下，單次結(jié)腸灌注120 mg/kg?TNBS乙醇溶液。治療方法：入組后第2天予以灌腸處置，NC+SO組、M+SO1組及M+SO2組于第2～14天芝麻油灌腸 2次/d，M+SO1組結(jié)腸灌注SO 0.5 mL/100 g;NC+SO組與M+SO2組結(jié)腸灌注SO 1 mL/100 g，NC組、M組于第2～14天予以食用植物油灌腸0.5 mL/100 g，2次/d。第15天處死大鼠，獲取結(jié)腸組織。取距肛門6～8 cm處損傷最嚴(yán)重的結(jié)腸組織，其中0.5 cm病變腸組織以4%甲醛固定，常規(guī)石蠟切片，HE染色和光鏡檢查;另取濕重約200 mg組織，剪碎制成10%的組織勻漿，離心10 min，取上清液，按照ELISA試劑盒測定MDA和SOD。

1.3 觀察指標(biāo)與評價(jià)標(biāo)準(zhǔn) （1）比較腸黏膜損傷指數(shù)評分及病理表現(xiàn)。根據(jù)肉眼觀察及臨床癥狀綜合評定，用損傷指數(shù)表示，具體方法參見Wallce的報(bào)道。潰瘍情況：正常為0分;充血無潰瘍?yōu)?分;一處潰瘍?yōu)?分;兩處潰瘍?yōu)?分;潰瘍長度經(jīng)累計(jì)>1 cm的為4分;累計(jì)>2 cm為5分。腹瀉情況：無腹瀉為0分;有腹瀉為1分。（2）比較M組、M+SO1組與M+SO2組中MDA與SOD含量。MDA與SOD含量采用ELISA測定，按試劑盒說明書操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 11.5軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用配對t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)腸損傷評分及表現(xiàn)比較 M組表現(xiàn)為出現(xiàn)明顯的炎癥反應(yīng)，隱窩出現(xiàn)破壞現(xiàn)象。NC組結(jié)腸損傷評分為0分，M組結(jié)腸損傷評分為（4.41±0.81）分，M組結(jié)腸損傷評分高于NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。M+SO1組結(jié)腸損傷評分為（2.34±0.75）分，M+SO2組結(jié)腸損傷評分為（1.98±0.99）分，M+SO1組與M+SO2組結(jié)腸損傷評分均低于M組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。NC+SO組結(jié)腸損傷評分為（0.83±0.41）分。NC+SO組結(jié)腸損傷評分高于NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見圖1。

2.2 不同劑量SO對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠腸組織的MDA、SOD的影響 NC組中MDA含量為（0.84±0.14）U/mg，SOD組的含量為（57.61±10.22）nmol/mg。M組中MDA含量為（2.92±0.56）U/mg，SOD的含量（31.00±5.63）nmol/mg。M組中MDA含量高于NC組，而SOD含量低于NC組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。M+SO1組中MDA含量為（1.79±0.26）U/mg，M+SO2組中MDA含量為（0.99±0.18）U/mg。M+SO1組與M+SO2組的MDA含量均低于M組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。M+SO1組中SOD含量為（44.97±4.98）nmol/mg，M+SO2組中SOD含量為（54.64±9.88）nmol/mg。M+SO1組與M組+SO2的SOD含量均高于M組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見圖2。

3 討論

芝麻油與其他食用油相比具有獨(dú)特的強(qiáng)大的抗氧化能力和抑制炎癥反應(yīng)性質(zhì)，強(qiáng)大的抗氧化活性主要因?yàn)橹ヂ橹心局仡愇镔|(zhì)（含量0.5%～1.0%），包括芝麻素、芝麻林素、芝麻酚所發(fā)揮的作用，芝麻中的木酚脂素類和生育酚類等抗氧化性物質(zhì)能有效地清除細(xì)胞內(nèi)的自由基，阻止其引發(fā)的細(xì)胞膜內(nèi)不飽和脂質(zhì)的過氧化反應(yīng)[12-14]。UC是一種慢性復(fù)發(fā)性的非特異性腸道炎癥，其確切病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確，一般認(rèn)為與遺傳、免疫、感染和精神心理因素等有關(guān)，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，多種因素、多種成分參與了UC的發(fā)病過程[15]。近年研究發(fā)現(xiàn)氧自由基在UC的發(fā)病機(jī)制中起重要作用，體內(nèi)氧自由基還參與脂質(zhì)過氧化反應(yīng)并產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化物，通過檢測MDA來反映脂質(zhì)過氧化物程度，間接評價(jià)細(xì)胞、組織受損程度，并且SOD能有效地清除氧自由基從而抑制腸組織中的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)并能穩(wěn)定細(xì)胞膜，SOD活性是反映細(xì)胞膜功能和機(jī)體抗炎癥反應(yīng)的主要指標(biāo)[16-18]。

本研究表明，芝麻油灌腸后，大鼠出現(xiàn)一定腹瀉現(xiàn)象，相對于NC組，具有一定的副作用出現(xiàn)，但是芝麻素可以顯著降低UC大鼠腸組織的SOD，增加MDA水平，從而抑制大鼠腸黏膜氧化應(yīng)激和炎性反應(yīng)，且這種促進(jìn)作用與芝麻素呈劑量依賴關(guān)系。而隨著芝麻素用量加大，組織髓過氧化物酶活力降低，說明芝麻素具有抗炎作用，并且有研究證實(shí)芝麻素可以提高SOD活性等作用達(dá)到抗氧化作用。M組中MDA含量高于NC組，而SOD含量低于NC組（P<0.01），說明UC模型大鼠結(jié)腸組織自由基清除能力下降，而給予不同劑量芝麻油后大鼠結(jié)腸組織中MDA水平均降低，SOD活力升高，機(jī)體的抗氧化能力提高，減少機(jī)體的過氧化損傷，從而減輕結(jié)腸損傷及炎癥反應(yīng)。有研究表明芝麻素具有抗菌作用，而且芝麻中尿囊素還具有保護(hù)修復(fù)消化道黏膜以及止痛作用，這些因素也可能在治療上起一定作用，但是需要進(jìn)一步研究[19-20]。

綜上所述，芝麻油具有較強(qiáng)的抗氧化活性，可以降低組織中MDA水平，提高SOD活性，減輕自由基和脂質(zhì)過氧化作用對腸組織的損傷，從而對TNBS所造成的結(jié)腸炎發(fā)揮治療作用，為芝麻油用于UC的防治提供理論依據(jù)。

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（收稿日期：2019-07-16）（本文編輯：田婧）