周會(huì)明 張焱珍 柴紅梅 孔令艦 李新瑩 李映華 余金艷

（1滇西科技師范學(xué)院生物技術(shù)與工程學(xué)院，云南臨滄677000；2云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所，云南昆明650221）

靈芝（Ganoderma lucidum）作為一種著名大型真菌，已成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)[1，2]，具有悠久的藥用、文化歷史[3-4]，一直以來備受廣大消費(fèi)者喜愛，具有治療高血壓、高血脂、肝炎等疾病的功效[5-7]，具有極大的研究?jī)r(jià)值。

近年來，隨著人們生活水平的提高和自我保健意識(shí)的加強(qiáng)，野生靈芝的市場(chǎng)需求越來越大，但面對(duì)消費(fèi)者不良的采摘方式以及生態(tài)環(huán)境被嚴(yán)重破壞，其野生子實(shí)體數(shù)量日益劇減。當(dāng)務(wù)之急，為彌補(bǔ)這一珍貴藥用菌的大量需求，在保護(hù)和合理開發(fā)野生資源的基礎(chǔ)上，重點(diǎn)擴(kuò)大現(xiàn)有人工靈芝栽培范圍，提高其產(chǎn)品的商品價(jià)值。

靈芝作為一種高溫型恒溫結(jié)實(shí)菌類，其對(duì)栽培原料的要求不高，玉米芯、草坪草、豆秸等均可作為其原料[8]，且培養(yǎng)料成分的不同直接影響到靈芝子實(shí)體的部分農(nóng)藝性狀[9]。筆者以引種菌株Ling1為供試材料，根據(jù)云南現(xiàn)有的栽培原料，通過設(shè)計(jì)不同的原種以及栽培種配方，經(jīng)過菌絲體培養(yǎng)與出菇試驗(yàn)，最終篩選出適合該菌株栽培的最適培養(yǎng)基，為其優(yōu)質(zhì)栽培和推廣提供一定的理論參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌株與配方

采用人工靈芝菌株Ling1，由滇西科技師范學(xué)院生物技術(shù)與工程學(xué)院食用菌室提供。

母種培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂15 g，水1 L，pH自然。

原種及栽培種配方分別見表1、表2。

表1 原種配方 %

表2 栽培種配方 %

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 母種擴(kuò)繁

靈芝Ling1菌株經(jīng)室溫活化，接種在母種培養(yǎng)基斜面上，在28℃培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)5～7 d，轉(zhuǎn)接到母種平板上，并用封口膜封口，繼續(xù)在25℃培養(yǎng)箱中靜置遮光培養(yǎng)5～7 d，備用[10]。

1.2.2 最適原種配方篩選

根據(jù)原種培養(yǎng)基配方，稱取新鮮無霉變的培養(yǎng)料，其中澳洲堅(jiān)果殼、小麥?zhǔn)褂们坝瞄_水浸泡10 h，瀝水，風(fēng)干至手抓料后手心潮濕為宜；牛糞與草坪粉粉碎，然后將木屑、牛糞、草坪粉分別預(yù)濕2 h，含水量65%左右即可；紅土風(fēng)干后過200目孔徑的土壤篩，再用小噴壺噴濕而不黏手為宜。將上述各種配料混勻，并拌入石膏粉，pH自然，最后裝入原種瓶，用二層報(bào)紙及透氣膜封口，10瓶重復(fù)。121℃滅菌 99 min，然后室溫（20～25℃）擱置 2 d，再繼續(xù)121℃下滅菌60 min，等料溫降至30℃左右接菌，之后室溫遮光培養(yǎng)，培養(yǎng)期間，及時(shí)檢查污染，并測(cè)定菌絲萌發(fā)時(shí)間（d）、生長(zhǎng)勢(shì)（“+++”表示濃密健壯，“++”表示較濃密，“+”表示生長(zhǎng)，“－”表示不生長(zhǎng)[11]）、生長(zhǎng)速度（mm/d）等。

1.2.3 最適栽培種配方篩選

栽培種制作的方法與原種一樣，其中木屑、玉米芯、發(fā)酵料、草坪粉、麥秸拌料前要預(yù)濕2 h，白砂糖用水溶解后使用，最后將四種不同培養(yǎng)料按配方混勻，調(diào)節(jié)含水量至65%后裝入17 cm×33 cm×0.004 cm的聚丙烯食用菌專用栽培袋（濕料重0.8 kg），30袋重復(fù)，121℃高壓滅菌2 h，冷卻30℃以下接菌，在室溫下遮光培養(yǎng)，測(cè)定與上述相同[12]。

1.2.4 農(nóng)藝性狀測(cè)定

待上述靈芝栽培種菌絲長(zhǎng)滿菌袋，袋內(nèi)培養(yǎng)料表面有白色的原基時(shí)，立即脫袋覆土出菇。覆土前，在大棚內(nèi)建造深15～20 cm，寬80～120 cm，長(zhǎng)度不限的畦床，取長(zhǎng)滿菌絲的栽培袋，撕掉塑料袋，去掉老菌皮，以菌棒間距約5～8 cm豎立于畦內(nèi)，再用田園土填充，覆土高度應(yīng)高于菌棒1～2 cm，立即用1%的石灰水澆灌畦面至水分完全滲透土壤。澆水結(jié)束，搭設(shè)遮陽網(wǎng)，控制棚溫24～28℃，土壤含水量18%～20%，空氣相對(duì)濕度為90%左右，結(jié)合噴水加強(qiáng)通風(fēng)，并給予300～1000 lx的散射光進(jìn)行出芝管理。待菌蓋邊緣顏色逐漸加深并與中間的顏色一致時(shí)進(jìn)行子實(shí)體的采收，測(cè)定菌柄長(zhǎng)度（mm）、菌柄直徑（mm）、菌蓋直徑（mm）等農(nóng)藝性狀[13]。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析

在試驗(yàn)數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析[14]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同原種配方對(duì)靈芝菌絲生長(zhǎng)的影響

由表3可知，靈芝Ling1菌株在4種原種培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)，在配方3上需要的萌發(fā)時(shí)間最短（2 d），配方2與配方4上菌絲長(zhǎng)勢(shì)最好且均為雪白，菌絲生長(zhǎng)速度由大到小的配方依次為：2＞1＞4＞3，以配方2培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)最快，達(dá)到7.53±0.99 mm/d，且在顯著性水平為0.05和0.01上，與其它配方相比均表現(xiàn)出極顯著差異。

表3 不同原種培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長(zhǎng)發(fā)育的影響

2.2 不同栽培種配方對(duì)靈芝菌絲生長(zhǎng)的影響

圖1 菌株Ling1子實(shí)體

由表4可知，靈芝Ling1菌株在4種配方的栽培種培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)，菌絲生長(zhǎng)勢(shì)均表現(xiàn)為濃密且顏色雪白，菌絲生長(zhǎng)速度由大到小的配方依次為：②＞①＞③＞④，其中在配方②上菌絲萌發(fā)、封口以及滿袋時(shí)間最短，分別為1 d、4 d、35 d，此配方上菌絲生長(zhǎng)也最快，達(dá)到5.16±1.27 mm/d，在顯著性水平為0.05和0.01上，與配方①相比無顯著性差異，但與配方③和配方④相比均表現(xiàn)出顯著差異。

表4 不同栽培種培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長(zhǎng)發(fā)育的影響

2.3 靈芝的農(nóng)藝性狀測(cè)定結(jié)果

針對(duì)上述栽培種進(jìn)行了出菇試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果顯示，4種配方只有配方①、②、③出菇，在3種配方上，靈芝Ling1菌株子實(shí)體的性狀上表現(xiàn)出一定的差異（表5），配方①上表現(xiàn)最佳，其中菌蓋為紅褐色，直徑為52.00 mm，菌柄顏色為深紅褐，其長(zhǎng)度與直徑分別為29.83 mm、19.00 mm（圖1）。

表5 不同栽培種培養(yǎng)基對(duì)菌絲生長(zhǎng)發(fā)育的影響

3 小結(jié)

利用云南臨滄市當(dāng)?shù)刎S富的廢棄資源玉米芯、草坪粉、澳洲堅(jiān)果殼等為栽培基質(zhì)，分別設(shè)計(jì)了4種原種和栽培種配方，針對(duì)引進(jìn)的靈芝菌株Ling1的菌絲體生長(zhǎng)發(fā)育特性和子實(shí)體農(nóng)藝性狀進(jìn)行了初步探索，試驗(yàn)結(jié)果表明，適合該菌株的原種配方為：小麥80%，木屑9%，牛糞5%，紅土5%，石膏粉1%。此配方上菌絲體雪白，長(zhǎng)勢(shì)濃密，平均生長(zhǎng)速度最快，達(dá)到7.53±0.99 mm/d。在栽培種配方玉米芯78%，米糠18%，高粱粉2%，石膏粉1%，白砂糖1%上，該菌綜合表現(xiàn)優(yōu)異，子實(shí)體農(nóng)藝性狀良好，適合于靈芝菌株Ling1的初步栽培和推廣。