林大專 張義英 惠 春 孫全樂

（長(zhǎng)春醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，吉林 長(zhǎng)春 130031）

丹參為唇形科植物丹參（Salvia miltiorrhiza Bge.）的干燥根及根莖，具有活血祛瘀、通經(jīng)止痛、涼血消癰、清心除煩等功效[1]。丹參的主要成分可分為脂溶性成分和水溶性成分兩大類，其中脂溶性成分主要為丹參酮類[2]，丹參酮是丹參中的主要活性成分，包括丹參酮ⅡA、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、二氫丹參酮Ⅰ等，具有較明顯的心腦血管保護(hù)活性、體內(nèi)外抗腫瘤活性等[3]，本文利用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，對(duì)微波法提取丹參酮ⅡA的工藝進(jìn)行系統(tǒng)研究，為丹參中脂溶性成分的開發(fā)利用提供參考幫助。

1 儀器與材料

Agilent 1200高效液相色譜儀（Agilent 1200可變波長(zhǎng)檢測(cè)器（VWD），Agilent 1200數(shù)據(jù)站，P/N-7725i手動(dòng)進(jìn)樣器，G1354A四元梯度泵及G1316A柱溫箱（美國(guó)Agilent公司產(chǎn)品）； XH-200A型祥鵠電腦微波萃取儀（北京祥鵠科技發(fā)展有限公司）；丹參飲片（購(gòu)于安國(guó)市昌達(dá)中藥材飲片有限公司，經(jīng)生藥教研室王月珍鑒定為真品），丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)品（Chengdu PUSH Bio-Technology Co.Ltd.，批號(hào)Q0070291，規(guī)格：50 mg，含量≥99%）；甲醇（美國(guó)Fisher公司，批號(hào)：A452-4，色譜純）；無(wú)水乙醇（北京化工廠，批號(hào)2015130，分析純）。

2 方 法

2.1 丹參樣品液的制備：稱取丹參飲片10 g于250 mL錐形瓶中，根據(jù)單因素和正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)在不同溫度、提前功率、料液比下用不同濃度乙醇用微波萃取儀提取丹參中脂溶性成分，提取液合并后濃縮，定容至100 mL量瓶中，搖勻，待用。

2.2 丹參酮ⅡA的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件：Agilent TC-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（80∶20）；流速1.0 mL/min；柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm；進(jìn)樣量20 μL。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制：精密取丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)品0.0052 g，加甲醇溶解，定容至50 mL，制成104 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液。

2.2.3 線性試驗(yàn)：分別精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。精密量取上述溶液20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積。以峰面積對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為y=164.4x+33.76，r=0.9993，即濃度在5.2～31.2 μg/mL的范圍內(nèi)線性良好。

2.3 單因素實(shí)驗(yàn)：每個(gè)單因素實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，以丹參酮ⅡA含量作為指標(biāo)，分別考察提取功率、提取時(shí)間、提取溶劑、料液比等因素對(duì)丹參中丹參酮ⅡA提取率的影響。

2.4 正交試驗(yàn)：在單因素考察的基礎(chǔ)上，以溶劑濃度、提取時(shí)間、提取功率和料液比為因素，優(yōu)化丹參酮ⅡA的提取工藝，因素-水平設(shè)計(jì)見表1。

表1 因素水平表

3 結(jié) 果

3.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

3.1.1 提取功率的影響：當(dāng)功率在300～600 W時(shí)，丹參酮ⅡA含量隨功率的增加而增加，此后功率增加，丹參酮ⅡA結(jié)構(gòu)遭到破壞，含量下降，因此最佳的提取功率是600 W。

3.1.2 提取時(shí)間的影響：時(shí)間在1.5～5.5 min 區(qū)間內(nèi)丹參酮ⅡA含量呈上升趨勢(shì)，且在5.5 min時(shí)達(dá)到最大，此后提取時(shí)間延長(zhǎng)，丹參酮ⅡA受熱分解，含量開始下降，因此最佳的提取時(shí)間為5.5 min。

3.1.3 提取溶劑的影響：乙醇濃度為70%時(shí)，丹參酮ⅡA的提取率最高。

3.1.4 料液比的影響：采用6倍量的乙醇提取時(shí)，丹參酮ⅡA的提取率最高。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

3.2 正交試驗(yàn)結(jié)果：以丹參酮ⅡA得率為考核指標(biāo)，用L9（34）正交表設(shè)計(jì)使用，分別考察了提取溶劑、提取時(shí)間、提取功率和料液比等因素對(duì)提取效果的影響，結(jié)果見表2、表3。

表3 正交試驗(yàn)方差分析表

4 小結(jié)與討論

4.1 由表2可知，RA＞RD＞RC＞RB，影響因素次序?yàn)锳、D、C、B，即乙醇濃度、料液比、功率、時(shí)間。

4.2 表2中，由K3A＞K2A＞ K1A知，因素A的水平3比其他2個(gè)水平好，同樣由最佳工藝條件是A3B3C2D2，即提取溶劑為95%、提取時(shí)間6.5 min、料液比1∶6、功率為600 W。

4.3 從表3正交實(shí)驗(yàn)方差分析可知，提取溶劑、提取時(shí)間、功率、料液比對(duì)丹參中丹參酮ⅡA提取率影響都顯著，其中提取溶劑的影響最顯著。

4.4 微波輔助提取所需的時(shí)間少、能耗低，能夠有效保留活性成分，是一種提取丹參酮ⅡA較好的方法。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，該工藝合理、簡(jiǎn)單、可行，可作為提取丹參中脂溶性成分的優(yōu)選工藝。