王 迪，王德軍，魏慶雙，王瑞琪，王瑜萌欣

(1．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

流行病學(xué)調(diào)查顯示，全世界在已經(jīng)采取預(yù)防措施的前提下每年脊髓損傷的發(fā)病率仍為10.4‰～83‰[1]。在發(fā)達(dá)國(guó)家，北美的發(fā)病率為20.7‰～83‰，歐洲的發(fā)病率為8‰～130.6‰，而在中國(guó)脊髓損傷的發(fā)病率也不容樂(lè)觀。加拿大自2000年至2010年治療脊髓損傷的年度成本是26.7億美元，而澳大利亞治療脊髓損傷的年度總成本約為20億澳元[1]。面對(duì)如此高的發(fā)病率及高額的醫(yī)療費(fèi)用，電針療法作為一種安全有效且醫(yī)療費(fèi)用較低的治療手段已經(jīng)被廣泛認(rèn)可和應(yīng)用，但其作用機(jī)理尚未清晰。李曉寧等[2]研究發(fā)現(xiàn)，夾脊電針能夠改善神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況，亦有許多研究者在其實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)電針具有抗凋亡的作用。本研究將近幾年電針治療脊髓損傷與抗凋亡機(jī)制相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行歸納整理，旨在明確電針治療脊髓損傷的抗凋亡機(jī)制，指出現(xiàn)階段動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的盲點(diǎn)，為日后研究提供新的方向及思路。

1 對(duì)含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)的影響

Caspase家族是引起細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵酶，可分為兩類(lèi)：一類(lèi)是凋亡的啟動(dòng)者，包括Caspase-2、8及9，它們接受到信號(hào)后通過(guò)自剪接而激活，然后引起系列反應(yīng)，激活凋亡的執(zhí)行者；另一類(lèi)即為凋亡的執(zhí)行者，包括 Caspase-3、6和7，最終引起導(dǎo)致凋亡的連鎖反應(yīng)[3]。

楊揚(yáng)等[4]應(yīng)用督脈電針治療SCI結(jié)果顯示，電針能夠下調(diào)脊髓組織中Caspase-3的表達(dá)，且選取脊髓損傷區(qū)域遠(yuǎn)近端督脈4個(gè)穴位進(jìn)行電針治療較選取近端督脈2個(gè)穴位更能有效地起到抗凋亡的作用；裴俐鋒等[5]研究結(jié)果表明在治療1～5周的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，電針能夠下調(diào)Caspase-3的表達(dá)，且與SCI組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；許明等[6]研究顯示,電針治療能夠提高膀胱容量及順應(yīng)性，并且使脊髓組織中Caspase-3蛋白的含量下降，提示電針改善膀胱功能障礙的機(jī)制可能與Caspase-3蛋白表達(dá)下調(diào)有關(guān)；李曉寧等[7]電針“心俞”“脾俞”治療SCI大鼠，研究結(jié)果顯示治療14天后電針組Caspase-9表達(dá)量明顯低于模型組，提示電針能夠通過(guò)抑制其表達(dá)起到減少脊髓損傷的作用。

綜上可知，電針能夠通過(guò)調(diào)控Caspase起到抗凋亡的作用，促進(jìn)肢體功能恢復(fù)，改善排尿障礙等問(wèn)題。由于Caspase家族在細(xì)胞凋亡的傳導(dǎo)通路中有著舉足輕重的作用，因此后續(xù)大量實(shí)驗(yàn)基于上述研究結(jié)果，進(jìn)一步探究了電針治療脊髓損傷作用機(jī)制與傳導(dǎo)通路之間的關(guān)系，并證實(shí)了電針能夠調(diào)控傳導(dǎo)通路達(dá)到治療作用。

2 對(duì)X連鎖凋亡抑制蛋白(XIAP)的影響

XIAP作為IAP家族中的主要成員，能以BIR結(jié)構(gòu)域的方式與Caspase相結(jié)合抑制其活性，切斷連鎖反應(yīng)抑制細(xì)胞凋亡，也被稱(chēng)之為凋亡抑制因子。宋萌等[8]研究顯示，電針能夠影響XIAPmRNA的表達(dá)，使其在脊髓損傷后的含量上調(diào)，提示電針可以通過(guò)提高XIAP的含量起到抗凋亡的作用。

3 對(duì)B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及同源相關(guān)蛋白(Bax)的影響

Bcl-2高表達(dá)時(shí)能夠增強(qiáng)細(xì)胞的抗毒素性，抑制因細(xì)胞毒素引起的細(xì)胞死亡。Bcl-2是多種凋亡信號(hào)傳導(dǎo)通路的樞紐，與Bax之間也存在著相互制約的關(guān)系。當(dāng)Bcl-2的含量相對(duì)Bax偏高時(shí)則可抑制細(xì)胞死亡，反之亦然。

衛(wèi)哲等[9]研究顯示夾脊電針能夠促進(jìn)脊髓損傷小鼠運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)，Bax的表達(dá)在治療3天至28天時(shí)較模型組明顯降低，而7天至28天時(shí)Bcl-2表達(dá)明顯升高，提示電針能夠促進(jìn)Bcl-2表達(dá)、抑制Bax的表達(dá)；劉建敏等[10]實(shí)驗(yàn)研究表明，電針治療使SCI大鼠脊髓組織中Bax的含量顯著降低，而B(niǎo)cl-2基因與蛋白含量顯著提升，電針組凋亡細(xì)胞數(shù)量較模型組明顯減少；李長(zhǎng)明等[11]應(yīng)用電針“秩邊”“水道”治療脊髓損傷大鼠，利用TUNEL法檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡情況發(fā)現(xiàn)，電針組的凋亡細(xì)胞數(shù)量減少，且治療7天后Bax的陽(yáng)性表達(dá)率減低，Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)率提升(P<0.01)；鮑秋影等[12]應(yīng)用電針治療骶髓損傷引起的神經(jīng)源性膀胱，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示治療7天后，電針組膀胱組織中Bcl-2表達(dá)較模型組高，Bax的陽(yáng)性表達(dá)率較模型組低，說(shuō)明電針可以通過(guò)抗凋亡作用對(duì)受損的膀胱逼尿肌組織進(jìn)行保護(hù)。

4 對(duì)信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響

4.1 細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)通路

細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)通路主要包括內(nèi)源性及外源性?xún)煞N凋亡途徑。前者激活后可釋放大量促死亡因子，如Cytc、凋亡誘導(dǎo)因子、促死亡蛋白等；后者則可通過(guò)產(chǎn)生死亡受體促使細(xì)胞死亡，其中最為典型的死亡受體是Fas和TNFRs[13]。這兩種途徑最后都會(huì)通過(guò)啟動(dòng)Caspase連鎖反應(yīng)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。

許明等[14]研究發(fā)現(xiàn),電針能使神經(jīng)源性膀胱大鼠脊髓組織中Cytc的含量下降，與模型組相比，電針組大鼠脊髓組織中凋亡蛋白酶活化因子-1及Caspase-9蛋白表達(dá)量均下調(diào)，電針組大鼠的膀胱壓力、容量及順應(yīng)性都有改變。上述結(jié)果提示,電針能夠通過(guò)抑制內(nèi)源性凋亡通路，使脊髓損傷引起的細(xì)胞凋亡數(shù)量減少，從而減輕神經(jīng)細(xì)胞損害，提高膀胱容量、順應(yīng)性，減少壓力，促進(jìn)膀胱功能恢復(fù)，改善排尿功能障礙；王雙等[15]通過(guò)抑制TNFR/RIPK信號(hào)通路，觀察大鼠急性脊髓損傷后的病理變化及BBB行為學(xué)評(píng)分，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該通路被抑制后能夠減輕脊髓損傷，改善行為學(xué)評(píng)分，有助于神經(jīng)功能的恢復(fù)；楊波等[16]實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,電針組與模型組相比較，F(xiàn)as、TNFR-1表達(dá)水平均下降，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；時(shí)素華等[17]研究發(fā)現(xiàn)在損傷早期6 h至1天，F(xiàn)as表達(dá)較高，持續(xù)7天后表達(dá)逐漸減少，TNFR-1則在損傷早期6 h開(kāi)始表達(dá)，7天時(shí)呈表達(dá)高峰。通過(guò)檢測(cè)脊髓組織中上述兩者的mRNA表達(dá)發(fā)現(xiàn)，電針組與模型組比較，mRNA的含量下調(diào)。

4.2 MAPK信號(hào)通路

MAPK信號(hào)傳導(dǎo)的主要特點(diǎn)是由細(xì)胞質(zhì)逐級(jí)磷酸化后進(jìn)入細(xì)胞核。在MAPK的亞家族中，p38MAPK、JNK及ERK信號(hào)通路起主導(dǎo)作用[18]。有研究表明，Raf/Ras/ERK信號(hào)通路能夠與細(xì)胞凋亡相關(guān)[19]；p38MAPK信號(hào)通路能介導(dǎo)凋亡等應(yīng)激反應(yīng)[19]；JNK信號(hào)通路具有促凋亡的作用[13]。

時(shí)素華等[20]探究督脈電針治療脊髓損傷作用機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，電針治療7天后，電針組MEK2、p-ERK1的含量高于模型組，提示電針通過(guò)誘導(dǎo)MEK2、p-ERK1的高表達(dá)促進(jìn)運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)；宋良玉[21]在探究不同電針對(duì)脊髓損傷修復(fù)的影響時(shí)亦發(fā)現(xiàn)，脈沖電針及音樂(lè)電針均能通過(guò)對(duì)Raf/Ras/ERK信號(hào)通路的調(diào)控，促使MEK2、p-ERK1的高表達(dá)；研究表明[19]，電針能夠下調(diào)p38MAPK的磷酸化水平，并且有效地抑制神經(jīng)元的凋亡；呂威等[22]應(yīng)用“大椎”“命門(mén)”治療SCI，研究結(jié)果顯示與正常組織比較，受損脊髓中p-c-Jun蛋白表達(dá)顯著升高，而電針組在術(shù)后3天、7天脊髓組織中p-c-Jun蛋白表達(dá)較模型組下調(diào)，且細(xì)胞凋亡數(shù)較其顯著減少，提示電針的抗凋亡作用可能與p-c-Jun蛋白表達(dá)下調(diào)相關(guān)。

由此可見(jiàn)，電針可以通過(guò)調(diào)控信號(hào)通路，影響通路上相關(guān)因子及蛋白的表達(dá)，起到抗細(xì)胞凋亡的作用，有助于損傷脊髓的功能恢復(fù)。

5 討論

通過(guò)對(duì)近幾年電針治療脊髓損傷與抗凋亡機(jī)制相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行歸納整理發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞凋亡的機(jī)制看似獨(dú)立存在，其實(shí)彼此之間存在樞紐，能夠相互制約影響。在死亡受體通路中，當(dāng)前半胱氨酸天冬酶8被激活后，可將胞漿中的Bid切割，再次作用于線(xiàn)粒體上，引起內(nèi)源性凋亡。另外，在神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子傳導(dǎo)信號(hào)通路中，MEK1/2磷酸化后可形成p90RSK，它能夠促進(jìn)Bcl-2的生成。由此可推斷，電針治療脊髓損傷的抗凋亡機(jī)制同樣也是相互滲透、相互關(guān)聯(lián)的。

目前，電針治療脊髓損傷的抗凋亡機(jī)制只停留在單一物質(zhì)或者單一信號(hào)傳導(dǎo)通路上，但是電針治療SCI應(yīng)該是一種網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的過(guò)程，不同通路之間也都存在著交叉的位置，電針治療SCI應(yīng)該是多靶點(diǎn)、多途徑、多層次的。雖然電針可以在多條通路上起到抗凋亡作用，但其在每條通路上發(fā)揮抗凋亡作用的程度應(yīng)該是有差別的，因此今后可以在選取相同治療方案的前提下，嘗試切斷不同的與細(xì)胞凋亡相關(guān)的通路，觀察電針治療脊髓損傷的相關(guān)指標(biāo)，明確在電針抗凋亡作用中起主導(dǎo)作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。

此外，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)研究所選取的腧穴都大相徑庭，不同的腧穴都有其獨(dú)特的主治作用，而不同的穴位配伍又會(huì)產(chǎn)生不一樣的疊加效應(yīng)，不恰當(dāng)?shù)难ㄎ慌湮榭赡軙?huì)相互抑制導(dǎo)致治療效果降低，而良好的配伍可以達(dá)到事半功倍的治療效果。因此，今后可以在規(guī)范化且治療方案統(tǒng)一的前提下探究電針抗凋亡機(jī)制的異同，或者在選取同一信號(hào)通路的前提下探究不同配伍對(duì)電針抗凋亡機(jī)制的影響。