■何凌云 周銘文 孫云章 宋 凱 葉繼丹

（集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院廈門市飼料檢測(cè)與安全評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建廈門361021）

牛磺酸是一種含磺酸基的氨基酸，是動(dòng)物機(jī)體內(nèi)含量最多的氨基酸，但它并不參與蛋白質(zhì)的合成[1]。?；撬嵊泻芏嘀匾纳飳W(xué)作用[2-3]，如與膽酸合成膽汁酸，使其限速酶膽固醇7α-羧化酶的活性升高，加強(qiáng)膽固醇向膽汁酸轉(zhuǎn)化的能力[4]，促進(jìn)脂肪的合成與代謝。牛磺酸是多數(shù)動(dòng)物機(jī)體的一種條件性必需氨基酸，其自身（貓科和狐貍除外）有一定合成?；撬岬哪芰5]，但其合成能力又與動(dòng)物種類、個(gè)體營(yíng)養(yǎng)狀況、蛋白質(zhì)進(jìn)食量和胱氨酸有效性有關(guān)[6]。與陸生恒溫動(dòng)物相比，魚類合成牛磺酸的能力均較低，并且這一能力在肉食性魚類及幼齡魚上表現(xiàn)得尤為明顯，其體內(nèi)?；撬岷铣闪看蠖嗖荒軡M足正常生長(zhǎng)所需，需要從外源（食物）供給[5]。飼料中添加?；撬崮茱@著提高斜帶石斑魚（Epinepheluscoioides）[7]、黃尾鰤（Seriola quinqueradiata）[8]和大菱鲆（Scophthalmusmaximus L.）[9]的生長(zhǎng)性能，當(dāng)飼料中牛磺酸不足時(shí)，會(huì)降低真鯛（Pagrus major）[10]和牙鲆（Paralichthys olivaceus）[11]的生長(zhǎng)性能。由于陸生植物?；撬岷亢艿突虿缓；撬?，而魚粉（包括其他動(dòng)物產(chǎn)品）中?；撬岷枯^高，這在配制生產(chǎn)以植物蛋白源為主要蛋白源的水產(chǎn)飼料時(shí)如何合理使用牛磺酸，有針對(duì)性地為養(yǎng)殖魚類提供個(gè)性化的飼料配制方案，實(shí)現(xiàn)養(yǎng)殖魚類的最佳生長(zhǎng)等方面有積極意義。近年來，國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究了草魚（Ctenopharyngodon idellus）[12]、斜帶石斑魚[13]、虹鱒（Oncorhynchus mykiss）[14]、牙鲆[15]、鱸魚（Lateolabrax japonicus）[16]等多種養(yǎng)殖魚類對(duì)?；撬岬男枰俊Ｄ壳瓣P(guān)于尼羅羅非魚對(duì)飼料中?；撬岬倪m當(dāng)需求量已有研究[17]，但尼羅羅非魚在關(guān)鍵生長(zhǎng)期中的不同階段對(duì)?；撬嵝枰挠绊戇€未見報(bào)道，因而，該試驗(yàn)?zāi)康氖菫檠芯匡暳吓；撬岷亢筒煌L(zhǎng)階段對(duì)尼羅羅非魚生長(zhǎng)性能的影響，為尼羅羅非魚飼料中牛磺酸的使用提供依據(jù)。

1 材料與方料

1.1 試驗(yàn)飼料

試驗(yàn)用酪蛋白、明膠和?；撬幔兌葹?9%）均購(gòu)自鄭州明瑞化工產(chǎn)品有限公司，維生素預(yù)混料和礦物質(zhì)預(yù)混料均購(gòu)自廈門嘉康飼料有限公司。該試驗(yàn)是以酪蛋白和明膠（無牛磺酸）作為蛋白源，魚油、大豆油和大豆卵磷脂作為脂肪源，玉米淀粉作為糖源制備成尼羅羅非魚的基礎(chǔ)飼料。然后在飼料中添加比例為0、400、800、1 200 mg/kg的?；撬幔苽涑?種不同?；撬岷康哪崃_羅非魚幼魚試驗(yàn)飼料。當(dāng)飼料中?；撬岜壤黾訒r(shí)，就相應(yīng)的減少結(jié)晶纖維素比例。試驗(yàn)基礎(chǔ)飼料配方及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。酪蛋白和明膠粉碎過篩（80目）。按飼料配方將各種飼料原料充分混勻，再加一定水?dāng)嚢瑁秒p螺桿制粒機(jī)制成直徑2.5 mm、3.5 mm的顆粒料，65℃烘箱烘干，裝自封袋密封，備用。

表1 基礎(chǔ)飼料配方及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)，g/kg）

1.2 養(yǎng)殖管理

羅非魚幼魚暫養(yǎng)2周后，從中挑選健康魚400尾（體質(zhì)量約為4.25 g），隨機(jī)分放到16個(gè)的150 L容量的水族箱中，每個(gè)水族箱25尾魚。試驗(yàn)分為4個(gè)飼料處理組，每個(gè)飼料組設(shè)4個(gè)水族箱(重復(fù)組)。

養(yǎng)殖試驗(yàn)期為84 d。養(yǎng)殖過程中，每日投喂兩次（08:30和18:30），每次投喂至表觀飽食。在投喂后0.5 h吸去糞便和殘餌，每次換水量約1/4。將試驗(yàn)期分為3個(gè)生長(zhǎng)階段（1～28、29～56、57～84 d），每個(gè)階段為28 d。養(yǎng)殖期間水溫為25～31℃，溶解氧含量為5.7～6.6 mg/l，硝酸鹽氮含量0.10～0.32 mg/l。

1.3 樣品采集

試驗(yàn)在第28、第56 d和第84 d分別對(duì)每個(gè)水族箱的魚稱總重。再放回到原來的水族箱，24 h后，從每個(gè)水族箱中隨機(jī)抽取6尾魚，丁香酚麻醉，逐尾魚稱重并測(cè)量體長(zhǎng)，解剖并取肝臟、腸等內(nèi)臟，分別稱重。在第84 d時(shí)，從每個(gè)水族箱中隨機(jī)抽取3尾魚用于全體體成分分析。

1.4 樣品測(cè)定

測(cè)定飼料原料、試驗(yàn)飼料和魚體樣品中的常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分。水分測(cè)定采用105℃烘箱常壓干燥法烘至恒重；粗蛋白質(zhì)測(cè)定采用半微量凱氏定氮法；粗脂肪測(cè)定采用索氏抽提法；粗灰分測(cè)定采用馬弗爐（550℃）灼燒法。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

式中：W0——初始均質(zhì)量（g）；

Wt——終末均質(zhì)量（g）；

Wf——攝食的飼料總量（g）；

Wb——樣品魚的體質(zhì)量（g）；

Wh——樣品魚肝臟質(zhì)量（g）；

Wv——樣品魚內(nèi)臟質(zhì)量（g）；

L——樣品魚體長(zhǎng)（cm）；

t——試驗(yàn)天數(shù)（d）。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均使用SPSS17.0進(jìn)行單因素（One-way ANOVA）和雙因素方差（Two-way ANOVA）分析；若結(jié)果差異顯著時(shí)（P＜0.05），則采用Student-Newmnan-Keuls法進(jìn)行多重比較。檢驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（Mean±SE）”表示。

2 結(jié)果

2.1 飼料中?；撬岷繉?duì)不同生長(zhǎng)階段尼羅羅非魚幼魚生長(zhǎng)性能的影響(見表2、表3)

表2 飼料中?；撬岷繉?duì)不同生長(zhǎng)階段尼羅羅非魚幼魚生長(zhǎng)性能的影響

表3 飼料中?；撬岷亢筒煌L(zhǎng)階段對(duì)尼羅羅非魚幼魚生長(zhǎng)性能的影響

表4 飼料中?；撬岷浚╔）與尼羅羅非魚幼魚不同生長(zhǎng)階段增重率（Y）的關(guān)系

由表2可知，在每一個(gè)生長(zhǎng)階段中，飼料中添加?；撬釋?duì)試驗(yàn)魚的增重率和攝食率有明顯的影響。?；撬崽砑咏M的增重率均明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），且隨著?；撬岷康脑黾颖憩F(xiàn)出先升高后降低的趨勢(shì)。?；撬崽砑咏M的攝食率明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），且牛磺酸添加組之間無明顯差異（P＞0.05）。飼料效率不受飼料中?；撬岷康挠绊懀≒＞0.05）。表3中，每個(gè)飼料中?；撬岷肯?，試驗(yàn)魚的第1個(gè)生長(zhǎng)階段的增重率、飼料效率和攝食率明顯高于第2個(gè)和第3個(gè)生長(zhǎng)階段（P＜0.05），飼料中?；撬岷亢筒煌L(zhǎng)階段對(duì)增重率和攝食率有明顯的影響（P＜0.05），并存在明顯交互作用。飼料效率不受?；撬岷康挠绊懀≒＞0.05）。

為確定3個(gè)生長(zhǎng)階段中尼羅羅非魚幼魚對(duì)飼料?；撬岬男枰?，我們建立了羅非魚增重率與飼料?；撬岷恐g的回歸方程（見表4），擬合得到3個(gè)生長(zhǎng)階段下尼羅羅非魚幼魚對(duì)?；撬岬男枰糠謩e為0.72%、0.68%和0.64%。由此可見，尼羅羅非魚魚齡越大，?；撬岬男枨罅烤驮降?。

2.2 飼料中?；撬岷繉?duì)不同飼喂天數(shù)尼羅羅非魚幼魚形態(tài)學(xué)指標(biāo)的影響（見表5、表6）

由表5可知，無論在哪個(gè)飼喂階段，試驗(yàn)魚的肝體比和臟體比都受到飼料?；撬岷康娘@著影響，添加了牛磺酸組的肝體比和臟體比明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），但各?；撬峤M的肝體比、臟體比沒有明顯差異（P＞0.05）；飼料中牛磺酸含量不影響肥滿度（P＞0.05）。從表6可以看出，在每個(gè)飼料中?；撬岷肯拢囼?yàn)魚的肝體比和臟體比，在飼喂到第28 d時(shí)明顯高于飼喂到第56 d和第84 d時(shí)（P＜0.05）。飼料中牛磺酸含量不影響肥滿度，但飼喂天數(shù)對(duì)其有顯著的影響（P＜0.05），飼喂到第28 d的肥滿度明顯高于飼喂到第56 d和第84 d（P＜0.05）。

2.3 飼料牛磺酸含量對(duì)飼喂84 d尼羅羅非魚幼魚體成分的影響(見表7)

該試驗(yàn)測(cè)定了養(yǎng)殖結(jié)束時(shí)各?；撬崽幚斫M尼羅羅非魚的體成分。由表7可知，?；撬崽砑咏M魚體水分含量明顯低于對(duì)照組（P＜0.05），但各?；撬崽砑咏M之間差異不明顯（P＞0.05）。對(duì)照組魚體粗脂肪和粗蛋白質(zhì)含量明顯低于?；撬崽砑咏M（P＜0.05），且800 mg/kg?；撬峤M的魚體粗脂肪含量明顯高于其它組（P＜0.05）。魚體粗灰分含量不受飼料中牛磺酸含量的影響（P＞0.05）。

表5 飼料中?；撬岷繉?duì)不同飼喂天數(shù)尼羅羅非魚幼魚形態(tài)指標(biāo)的影響

表6 飼料中?；撬岷亢筒煌曃固鞌?shù)對(duì)尼羅羅非魚幼魚形態(tài)學(xué)指標(biāo)的影響

表7 飼料中?；撬岷繉?duì)飼喂84 d尼羅羅非魚體成分的影響

3 討論

已有研究顯示，飼料中添加?；撬崮軌蛎黠@促進(jìn)魚類的生長(zhǎng)[18-19]。該試驗(yàn)結(jié)果表明，在飼料中添加一定含量的?；撬崮軌蚴鼓崃_羅非魚幼魚的生長(zhǎng)性能明顯提高，而當(dāng)飼料中不添加?；撬釙r(shí)，其生長(zhǎng)速度變緩，這與在真鯛[20]、牙鲆[11]和草魚[12]的試驗(yàn)結(jié)果一致，表明飼料牛磺酸含量不足時(shí)會(huì)抑制魚類生長(zhǎng)。在該試驗(yàn)的3個(gè)生長(zhǎng)階段中，隨著飼料中?；撬岷康脑黾樱鲋芈示尸F(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)（見表2），這與在虹鱒[21]、斜帶石斑魚[7]、花鰻鱺（Anguillamarmorata）[22]、青魚（Mylopharyngodonpiceu）[23]的試驗(yàn)結(jié)果類似。

在不考慮飼料中?；撬岷康那闆r下，3個(gè)生長(zhǎng)階段中，尼羅羅非魚幼魚的生長(zhǎng)速度以第1個(gè)生長(zhǎng)階段為最大，第2個(gè)生長(zhǎng)階段次之，以第3個(gè)生長(zhǎng)階段為最慢（見表3），表明其生長(zhǎng)速度隨飼喂天數(shù)的增加而降低，其生長(zhǎng)趨勢(shì)符合魚類生長(zhǎng)的規(guī)律?；貧w分析擬合得出試驗(yàn)魚3個(gè)生長(zhǎng)階段的適宜牛磺酸含量分別為0.72%（第1個(gè)生長(zhǎng)階段初始體質(zhì)量為4.24 g）、0.68%（第2個(gè)生長(zhǎng)階段初始體質(zhì)量為30.14 g）和0.64%（第3個(gè)生長(zhǎng)階段初始體質(zhì)量為83.27 g）。由此可見，隨年齡增加，尼羅羅非魚幼魚對(duì)?；撬岬男枰恐饾u減少。雖然本試驗(yàn)中尼羅羅非魚幼魚的生長(zhǎng)速度從第1個(gè)生長(zhǎng)階段到第3個(gè)生長(zhǎng)階段是逐漸降低的，但它們?nèi)允橇_非魚養(yǎng)殖過程中生長(zhǎng)速度較快的3個(gè)階段。

無論在試驗(yàn)的哪個(gè)飼喂階段，飼料中添加?；撬崦黠@提高了尼羅羅非魚幼魚的攝食率，表明牛磺酸對(duì)尼羅羅非魚幼魚有一定的誘食作用（見表2），該結(jié)果支持了前期的發(fā)現(xiàn)[24]。但該試驗(yàn)中各?；撬崽砑咏M的攝食率沒有明顯差異，說明在滿足?；撬嵝枰那疤嵯?，繼續(xù)增加?；撬岷繘]有進(jìn)一步促進(jìn)尼羅羅非魚幼魚攝食。同時(shí)，每個(gè)生長(zhǎng)階段的飼料效率均不受飼料中?；撬岷康挠绊?。由此可以看出，?；撬岵⒎鞘峭ㄟ^提高飼料效率而是通過增加攝食量來提高羅非魚的生長(zhǎng)，該研究結(jié)果與在牙鲆[15]中的研究結(jié)果一致。然而，該試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，在飼料中?；撬岷窟^高（1 200 mg/kg牛磺酸），試驗(yàn)魚的增重率有所下降，原因不明。有人認(rèn)為飼料中添加過量的牛磺酸會(huì)引起其適口性下降[25]，攝食量隨之降低，從而導(dǎo)致魚體生長(zhǎng)速度下降。

?；撬岬囊粋€(gè)重要作用是可以與游離膽汁酸結(jié)合形成牛磺膽酸，促進(jìn)脂類的消化吸收[26]。由試驗(yàn)結(jié)果可知，?；撬崽砑咏M魚體粗脂肪含量明顯高于對(duì)照組（見表7），這與在草魚[12]、羅非魚[27]中的研究結(jié)果一致，但與虹鱒[14]、大菱鲆[28]、石斑魚[7]的結(jié)果相反。魚體粗脂肪增加的原因可能是飼料中添加的?；撬岽龠M(jìn)了甲狀腺激素T3分泌，而T3是戊糖磷酸循環(huán)中的重要調(diào)節(jié)因子，主要調(diào)節(jié)其關(guān)鍵酶1,6-磷酸脫氫酶，它的分泌促進(jìn)了脂肪酸合成及其關(guān)鍵酶的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)脂肪合成并在魚體沉積，最終表現(xiàn)為魚體粗脂肪增加[29]。在不考慮飼喂天數(shù)的情況下，試驗(yàn)魚肝體比和臟體比是隨牛磺酸添加比例的增加而升高的，這與魚體粗脂肪的變化趨勢(shì)相似，這可能是?；撬崤c膽固醇結(jié)合形成膽鹽，進(jìn)而激活了肝脂肪酶[30]。另外，在肝臟中，?；撬崮芎湍懰峤Y(jié)合形成膽汁酸，促進(jìn)肝臟脂肪的合成，最終導(dǎo)致肝臟脂肪沉積。該試驗(yàn)中，添加?；撬峤M的魚體粗蛋白質(zhì)含量都高于對(duì)照組，說明飼料中添加?；撬峥梢源龠M(jìn)尼羅羅非魚幼魚體蛋白質(zhì)的合成，該研究結(jié)果同大菱鲆[9]、細(xì)點(diǎn)牙鯛（Dentex dentex）[30]和塞內(nèi)加爾鰨（Solea senegalensis Kaup）[31]一致，這可能是因?yàn)榕；撬嵩鰪?qiáng)了蛋白質(zhì)合成有關(guān)激素的分泌[32]。在3個(gè)生長(zhǎng)階段中，第1個(gè)生長(zhǎng)階段（1～28 d）的肝體比和臟體比均明顯高于第2個(gè)生長(zhǎng)階段（29～56 d）和第3個(gè)生長(zhǎng)階段（57～84 d），且后兩者之間差異不明顯。因此認(rèn)為，尼羅羅非魚幼魚在第1個(gè)生長(zhǎng)階段時(shí)身體各器官處于快速發(fā)展的階段，但從第2個(gè)生長(zhǎng)階段起，魚體各器官的生理功能都趨向于成體，其生長(zhǎng)發(fā)育也呈現(xiàn)出相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)。

4 結(jié)論

飼料中添加適量的?；撬崮軌虼龠M(jìn)尼羅羅非魚幼魚的生長(zhǎng)。尼羅羅非魚幼魚在3個(gè)生長(zhǎng)階段所需的?；撬岷糠謩e是0.72%（第1個(gè)生長(zhǎng)階段初始體質(zhì)量為4.24 g）、0.68%（第2個(gè)生長(zhǎng)階段初始體質(zhì)量為30.14 g）和0.64%（第3個(gè)生長(zhǎng)階段初始體質(zhì)量為83.27 g），說明隨著年齡增加，尼羅羅非魚幼魚對(duì)?；撬岬男枨罅恐饾u降低。