姜坤妤，余 蘭

遵義醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，遵義 563000

黨參為桔?？浦参稂h參Codonopsispilosula(Franch.) Nannf.、素花黨參CodonopsispilosulaNannf.var.modesta(Nannf.) L.T.Shen或川黨參CodonopsistangshenOliv.的根[1]，是我國(guó)常用的一種傳統(tǒng)補(bǔ)益類(lèi)中藥，其性味甘平，主歸脾、肺二經(jīng)，具有補(bǔ)中益氣、健脾益肺、養(yǎng)血生津之功效，臨床上常用于脾肺氣虛、食少倦怠、中氣不足、面色萎黃、心悸氣短、熱病傷津等癥，主產(chǎn)于山西、甘肅、陜西、四川、湖北等地[2-7]。黨參中主要含有糖類(lèi)、苷類(lèi)、生物堿類(lèi)、甾醇類(lèi)、揮發(fā)油、三萜類(lèi)、倍半萜內(nèi)酯類(lèi)等成分；具有調(diào)節(jié)血糖、促進(jìn)造血機(jī)能、保肝、抗?jié)儭⒖馆椛?、抗缺氧、增?qiáng)機(jī)體免疫功能、降壓、延緩衰老及調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)等多種藥理作用[8-11]。隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)和科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，黨參的應(yīng)用更加的廣泛，從藥品到食品，乃至于化妝品。

道真洛龍黨參產(chǎn)于貴州省遵義市道真縣洛龍鎮(zhèn)，是川黨參的生態(tài)型變種，是貴州省著名的特有藥材，質(zhì)量?jī)?yōu)良。目前關(guān)于道真洛龍黨參揮發(fā)油的研究未見(jiàn)報(bào)道，筆者采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)首次對(duì)道真洛龍黨參揮發(fā)油的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，以期為道真洛龍黨參資源的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。

1 儀器與材料

GC6890/MS5973型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(Agilent公司，美國(guó))，AL204電子天平(上海梅特勒-托利多有限公司)，電子調(diào)溫電熱套(天津市泰斯特儀器有限公司)，正己烷(成都市科龍化工試劑廠，色譜純)，無(wú)水硫酸鈉(重慶川江化學(xué)試劑廠，分析純)，實(shí)驗(yàn)用水為雙蒸水。

不同采摘時(shí)間道真洛龍黨參來(lái)源見(jiàn)表1，經(jīng)遵義醫(yī)學(xué)院楊建文教授鑒定為桔?？浦参飳冱h參Codonopsispilosula的干燥的和新鮮的根。

表1 不同采摘時(shí)間道真洛龍黨參樣品來(lái)源信息Table 1 Information of Daozhen Luolong Codonopsis from different picking times

2 方法

2.1 揮發(fā)油的提取

取干燥的道真洛龍黨參粉碎，過(guò)60目篩，按照《中國(guó)藥典》2015年版方法提取揮發(fā)油[12]，精密稱(chēng)取粉末160 g置于圓底燒瓶中，加入10倍體積蒸餾水，浸泡1 h,按照《中國(guó)藥典》2015年版方法提取揮發(fā)油[12]，每次提取8 h，(提取器中揮發(fā)油量不再增加)。用適量正己烷洗脫揮發(fā)油，充分搖勻靜止后，取油層。然后，無(wú)水硫酸鈉干燥，用正己烷定容至3 mL,過(guò)0.45 μm微孔濾膜后，得供試品。取新鮮的道真洛龍黨參，洗凈切成薄片，按照《中國(guó)藥典》2015年版方法提取揮發(fā)油[12]，精密稱(chēng)取250 g置于圓底燒瓶中，提取出的揮發(fā)油的量相當(dāng)于160 g干道真洛龍黨參提取出揮發(fā)油量的1/6，用正己烷定容至0.5 mL,剩余提取步驟與干道真洛龍黨參相同。

2.2 色譜條件

Phenomenex ZB-5MSi石英毛細(xì)管色譜柱(250 μm×30 m,0.25 μm)；載氣為高純度氦氣；載氣流量為1.0 mL/min；進(jìn)樣量1.0 μL；分流比30∶1；進(jìn)樣口溫度250 ℃；程序升溫：初始溫度80 ℃，以6.5 ℃/min升至180 ℃，接著以1 ℃/min升溫至195 ℃，最后以20 ℃/min升溫至280 ℃，保持6 min。

2.3 質(zhì)譜條件

離子源為EI源；電子能量70 eV；離子源溫度230 ℃；四級(jí)桿溫度150 ℃；溶劑延遲4 min，掃描范圍m/z30～500。

2.4 數(shù)據(jù)處理

樣品中各揮發(fā)油成分用計(jì)算機(jī)與Wiley7，NIST05標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)檢索匹配，統(tǒng)計(jì)匹配度大于90%的化學(xué)成分。采用峰面積歸一化法定量分析各組分相對(duì)百分含量。

3 結(jié)果與分析

3.1 色譜柱優(yōu)化

實(shí)驗(yàn)共考察了DB-5石英毛細(xì)管色譜柱(250 μm×60 m,0.25 μm)、hp-5MS石英毛細(xì)管色譜柱(250 μm×30 m,0.25 μm)和ZB-5MSi石英毛細(xì)管色譜柱(250 μm×30 m,0.25 μm)對(duì)干、鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分分離效果的影響；結(jié)果表明，干、鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分在ZB-5MSi石英毛細(xì)管色譜柱有著良好的分離效果。

3.2 不同采摘時(shí)間干、鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分分析

按2.1，2.2和2.3所述方法，分別獲得干、鮮道真洛龍黨參的揮發(fā)油成分總離子流色譜圖，如圖1所示。結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)選定的條件能夠?qū)Ω?、鮮道真洛龍黨參的揮發(fā)油成分進(jìn)行分離鑒定。樣品S1～S5中鑒定出的揮發(fā)油成分?jǐn)?shù)依次為32、52、22、26、40個(gè)。樣品S6～S8中鑒定出的揮發(fā)油成分?jǐn)?shù)依次為28、14、15個(gè)。

3.3 不同采摘時(shí)間干道真洛龍黨參揮發(fā)油成分分析

對(duì)不同采摘時(shí)間干道真洛龍黨參揮發(fā)油成分匹配度>90%的成分進(jìn)行分析鑒定(見(jiàn)表2)。結(jié)果表明，樣品S1～S5中共有揮發(fā)油成分7個(gè)，分別為肉豆蔻酸，亞油酸，棕櫚酸，棕櫚酸甲酯，二十烷，亞油酸甲酯，角鯊烯。這7個(gè)共有揮發(fā)油成分占樣品S1～S5的總比率分別為75.78%、84.88%、72.11%、72.28%、73.61%。由此可以看出，5個(gè)不同采摘時(shí)間干道真洛龍黨參共有揮發(fā)油成分含量大致相同，其余含量較低成分有所差異。棕櫚酸和亞油酸是含量最高的兩種成分，兩者在樣品S1～S5中占揮發(fā)油成分總量依次為56.14%、72.35%、52.92%、45.02%、55.09%。其中，樣品S2中這兩種成分總含量最高。亞油酸甲酯和亞油酸具有抗炎作用[13]。棕櫚酸和亞油酸有較強(qiáng)的抗氧化作用[14-16]。亞油酸還具有降低人體血液中膽固醇和血脂的作用。由此推測(cè)，不同采摘時(shí)間干道真洛龍黨參的抗氧化、抗炎、降血脂及降膽固醇能力有所不同。

圖1 不同采摘時(shí)間道真洛龍黨參揮發(fā)油的總離子流圖Fig.1 Total ion current chromatogram of volatile oils in Daozhen Luolong Codonopsis from different picking times注：1.肉豆蔻酸；2.棕櫚酸甲酯；3.棕櫚酸；4.亞油酸甲酯；5.亞油酸；6.二十烷；7.角鯊烯。Note:1.myristic acid;2.methyl hexadecanoate;3.palmitic acid;4.octadecadienoic acid,methyl ester;5.linoleic acid;6.eicosane;7.squalene.

3.4 不同采摘時(shí)間干道真洛龍黨參揮發(fā)油成分種類(lèi)的分析比較

對(duì)樣品S1～S5中的揮發(fā)油成分進(jìn)行分類(lèi)，見(jiàn)表3。結(jié)果表明樣品S1～S5揮發(fā)油中均含有脂肪酸、脂肪酸酯、烷烴、烯烴、烯醇類(lèi)，其中脂肪酸是樣品S1～S5中相對(duì)峰面積最大的成分(樣品S1～S5中脂肪酸的相對(duì)峰面積依次是59.77%、76.75%、55.96%、53.00%、57.01%)，脂肪酸酯次之(樣品S1～S5中脂肪酸酯的相對(duì)峰面積依次是19.69%、11.57%、17.53%、23.57%、21.30%)，再者是烷烴(樣品S1～S5中烷烴的相對(duì)峰面積依次是6.05%、2.95%、17.71%、8.19%、9.13%)。3類(lèi)主要揮發(fā)油成分占樣品S1～S5的相對(duì)峰面積依次為85.26%、91.27%、91.20%、84.76%、87.44%。對(duì)不同采摘時(shí)間干道真洛龍黨參中的揮發(fā)油成分進(jìn)行分類(lèi)可見(jiàn)3類(lèi)主要揮發(fā)油成分脂肪酸、脂肪酸酯和烷烴占樣品S1～S5的相對(duì)峰面積均在80%以上。其中，樣品S2中這3類(lèi)主要揮發(fā)油成分總含量最高。

表2 不同采摘時(shí)間干道真洛龍黨參的揮發(fā)油成分和相對(duì)峰面積Table 2 Volatile oil components and relative peak area of dried Daozhen Luolong Codonopsis from different picking times

續(xù)表2(Continued Tab.2)

續(xù)表2(Continued Tab.2)

序號(hào)No.保留時(shí)間tR(min)化合物Compound相對(duì)峰面積Relative peak area(%)S1S2S3S4S57633.277(11Z,13Z)-11,13-十六烷基乙酸酯(11Z,13Z)-11,13-Hexadecadienylacetate-0.25---7733.344N-(2-三氟甲基苯)-3-吡啶甲酰胺肟 Pyridine-3-carbox-amide,oxime,N-(2-trifluoromethylphenyl)-----0.327833.441十六烷 Hexadecane-0.326.71-0.467933.44610-甲基-二十烷 10-methyl-Eicosane0.98----8033.452三十六烷 Hexatriacontane----0.688133.976油醇 (Z)-9-Octadecen-1-ol--1.60--8234.057(3E,12Z)-1,3,12-非鄰二烯-5,14-二醇(3E,12Z)-1,3,12-Nonadecatriene-5,14-diol----0.928334.0635-(3-十一烷基-2-環(huán)氧乙烷基)戊酸甲酯Methyl 5-(3-un-decyl-2-oxiranyl)pentanoate---0.83-8434.359二十四烷 Tetracosane----1.968534.365二十七烷 Heptacosane-0.25---8634.5492,2′-亞甲基雙-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)2,2′-Methyle-nebis(6-tert-butyl-4-methylphenol)----1.328734.7162-甲基-z,z-3,13-十八二烯醇 2-Methyl-Z,Z-3,13-octadec-adienol--2.38--8834.759二乙基甲基硼烷 Diethylmethylborane0.630.03---8934.7702-辛基環(huán)丙烷辛醛 2-Octylcyclopropaneoctanal----0.909034.9542-(十四氧基)-乙醇 Ethanol,2-(tetradecyloxy)--0.07---9135.083二十八烷 Octacosane1.600.253.13-0.559235.083三十烷 Triacontane--5.36-3.589335.0897-己基-十二烷 Tridecane,7-hexyl--0.36---9435.699(8Z)-14-甲基-8-十六烯-1-醇 (8Z)-14-Methyl-8-hexade-cen-1-ol-0.11---9535.785草酸異丁酯 Oxalic acid,isobutyl hexadecyl ester3.62----9635.818二十三烷 Tricosane---1.58-9735.823二十一烷 Heneicosane-0.54---9836.001(1-辛基十二烷基)-環(huán)己烷 (1-octyldodecyl)-Cyclohexane0.47----9936.1047-環(huán)己基-二十烷 7-Cyclohexylicosane--1.17--10036.617二十烷 Eicosane0.810.240.950.371.7110136.6189-辛基-十七烷 9-Octylheptadecan---1.30-10236.623二十二烷 Docosane-0.25-1.84-10337.26614β-孕烷 14-.BETA.-PREGNA0.640.22---10437.3301-(5-三氟甲基-2-吡啶基)-4-(1h-吡咯-1-基)-哌啶1-(5-trifluoromethyl-2-pyridyl)-4-(1H-pyrrol-1-yl)-Piperidine1.06----10537.471芥酸酰胺 Erucylamide3.87----10637.671蒽-9,10-醌,1-(3-羥基-3-苯基-1-三嗪基)-Anthra-9,10-quinone,1-(3-hydrohy-3-phenyl-1-triazenyl)-----0.1610737.909角鯊烯 Squalene4.491.821.604.452.4410838.2985-甲基-3-正丙基-2-[Z-(1,2,3,3-四氘)-1-丁烯基]吡嗪 5-methyl-3-n-propyl-2-[Z-(1,2,3,3-tetradeuterio)but-1-enyl]pyrazine---0.56-10939.8697-己基-十二烷 Tridecane,7-hexyl---0.39--

注：“-”未檢測(cè)到該化合物。
Note:“-”stands for not detected.

表3 不同采摘時(shí)間干道真洛龍黨參揮發(fā)油成分種類(lèi)和相對(duì)峰面積Table 3 Types and relative peak area of volatile oil components of dried Daozhen Luolong Codonopsis from different picking times

注：“-”未檢測(cè)到該化合物。
Note:“-”stands for not detected.

3.5 不同采摘時(shí)間鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分分析

對(duì)不同采摘時(shí)間鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分匹配度>90%的成分進(jìn)行分析鑒定，見(jiàn)表4。結(jié)果表明，鮮道真洛龍黨參含量最高的揮發(fā)油成分為角鯊烯，角鯊烯具有抗腫瘤、抗氧化的作用[17-19]，占樣品S6～S8的比率分別為29.05%、41.93%、28.09%。由此可以看出，3個(gè)不同采摘時(shí)間鮮道真洛龍黨參共有揮發(fā)油成分含量具有一定差異，樣品S7中共有成分含量最高，其余成分的含量具有較大差異。例如，棕櫚酸在占樣品S6～S8的比率分別為5.52%、0%、38.24%。說(shuō)明鮮道真洛龍黨參受采摘時(shí)間影響較明顯。由于實(shí)驗(yàn)采用的是新鮮道真洛龍黨參，因此樣品中的水分含量將直接影響含量對(duì)比結(jié)果，采摘時(shí)間不同,光照、溫度、濕度等因素都會(huì)有明顯變化,從而影響樣品中的水分含量，進(jìn)一步影響棕櫚酸等其余揮發(fā)油成分在樣品S6～S8的比率。樣品S6中主要特有成分為雙環(huán)己烷(4.28%)和14-甲基十五烷酸甲酯(11.08%)；S7中主要特有成分為正癸烯(3.69%)，十七烷(3.12%)，十九烷(6.21%)，二十三烷(7.72%)，17-十六烷基四三烏頭烷(4.83%)；S8中主要特有成分為三十四烷(3.31%)和二十六烷(2.57%)。

表4 不同采摘時(shí)間鮮道真洛龍黨參的揮發(fā)油成分和相對(duì)峰面積Table 4 Volatile oil components and relative peak area of fresh Daozhen Luolong Codonopsis from different picking times

續(xù)表4(Continued Tab.4)

序號(hào)NO.保留時(shí)間tR(min)化合物Compound相對(duì)峰面積Relative peak area(%)S6S7S83634.360十八烷 Octadecane-9.012.103735.083二十三烷 Tricosane-7.72-3835.085二十六烷 Hexacosane--2.573935.370二十四烷 Tetracosane0.31--4035.60211-[(三甲基硅基)氧]-,雙(0-甲基肟),(5-β,11-β.)-孕烷-3,20-二酮 11-[(trimethylsilyl)oxy]-,bis(O-methyloxime),(5.beta.,11.be-ta.)-Pregnane-3,20-dione1.83--4135.818三十四烷 Tetratriacontane--3.314235.92517-十六烷基四三烏頭烷17-hexadecyl-Tetratriacontane-4.83-4336.61211-丁基-二十二烷 11-butyl-Docosane1.53--4436.617二十烷 Eicosane2.73-1.724537.909角鯊烯 Squalene29.0541.9328.094638.5892-溴代十二烷 2-Bromododecane0.71--

注：“-”未檢測(cè)到該化合物。
Note:“-”stands for not detected.

3.6 不同采摘時(shí)間鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分種類(lèi)的分析比較

對(duì)樣品S6～S8中的揮發(fā)油成分進(jìn)行分類(lèi)，見(jiàn)表5。結(jié)果表明，樣品S6～S8揮發(fā)油中均含有脂肪酸酯、烷烴、烯烴類(lèi)。樣品S6中揮發(fā)油成分共有11類(lèi)物質(zhì)，主要含有1種脂肪酸類(lèi)(5.52%),3種脂肪酸酯類(lèi)(22.85%)，11種烷烴類(lèi)(18.84%),4種烯烴類(lèi)(40.89%)；樣品S7中揮發(fā)油成分共有3類(lèi)物質(zhì)，主要含有7種烷烴類(lèi)(41.53%)，6種烯烴類(lèi)(56.05%)；樣品S8中揮發(fā)油成分共有6類(lèi)物質(zhì)，主要含有1種脂肪酸類(lèi)(38.24%),3種脂肪酸酯類(lèi)(18.05%)，6種烷烴類(lèi)(13.04%),3種烯烴類(lèi)(30.04%)。這幾類(lèi)主要揮發(fā)油成分占樣品S6～S8的相對(duì)峰面積依次為88.10%、97.58%、99.37%。

表5 不同采摘時(shí)間鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分種類(lèi)和相對(duì)峰面積Table 5 Types and relative peak area of volatile oil components of fresh Daozhen Luolong Codonopsis from different picking times

注：“-”未檢測(cè)到該化合物。
Note:“-”stands for not detected.

對(duì)不同采摘時(shí)間鮮道真洛龍黨參中的揮發(fā)油成分進(jìn)行分類(lèi)可見(jiàn)樣品中主要揮發(fā)油成分占樣品S6～S8的相對(duì)峰面積均在80%以上。

4 討論

綜上，干道真洛龍黨參中主要揮發(fā)油成分為棕櫚酸、亞油酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸甲酯、亞油酸甲酯和角鯊烯等。鮮道真洛龍黨參中主要揮發(fā)油成分為角鯊烯、亞油酸甲酯、棕櫚酸、14-甲基十五烷酸甲酯和1-檸檬烯等。11月中旬采摘的干、鮮道真洛龍黨參(樣品S2與樣品S7)共有揮發(fā)油成分含量最高，可為干、鮮道真洛龍黨參的采摘提供一定理論基礎(chǔ)。采摘時(shí)間對(duì)干、鮮道真洛龍黨參主要揮發(fā)油成分的影響均不大，但對(duì)其余揮發(fā)油成分有一定的影響。其原因在于采摘時(shí)間不同,光照、溫度、濕度都會(huì)有變化,從而影響干、鮮道真洛龍黨參一部分揮發(fā)油成分的含量。

干道真洛龍黨參揮發(fā)油成分以脂肪酸、脂肪酸酯、烷烴、烯烴類(lèi)為主。揮發(fā)油中含量較高成分有棕櫚酸、亞油酸、亞油酸甲酯、棕櫚酸甲酯和肉豆蔻酸。鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分以脂肪酸、脂肪酸酯、烷烴、烯烴類(lèi)為主。揮發(fā)油中含量較高成分有角鯊烯、1-檸檬烯、花柏烯、棕櫚酸和亞油酸甲酯等。干道真洛龍黨參與鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分的種類(lèi)差別不大但含量有明顯差異。說(shuō)明道真洛龍黨參在干燥過(guò)程中部分揮發(fā)油成分由于受熱而發(fā)生了轉(zhuǎn)化。可能是烯烴、烷烴類(lèi)成分轉(zhuǎn)化成了脂肪酸及脂肪酸酯類(lèi)成分。

干、鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油成分的存在對(duì)于評(píng)價(jià)干、鮮道真洛龍黨參揮發(fā)油整體功效及驗(yàn)證其抗氧化、抗腫瘤和抗炎作用等可能具有重要的研究意義，也存在一定的藥用價(jià)值，故應(yīng)予適當(dāng)保留或開(kāi)發(fā)。不同采摘時(shí)間干、鮮道真洛龍黨參所含化學(xué)成分的闡明也能為道真洛龍黨參藥材藥用多元化、藥材炮制及采摘時(shí)間等多方面的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)研究提供一定實(shí)驗(yàn)依據(jù)和參考。