霍 超，曹繼芬，王昌命，趙志堅*

(1.西南林業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，云南昆明 650224;2.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟作物研究所，云南昆明 650205)

由晚疫病菌(Phytophthorainfestans)引起的晚疫病是制約馬鈴薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要因素之一。云南省是我國代表性馬鈴薯周年生產(chǎn)區(qū)，馬鈴薯種植面積約66.7萬hm2[1]。昆明市是云南省傳統(tǒng)的馬鈴薯大春作產(chǎn)區(qū)，近年來通過產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整以及各級政府把馬鈴薯作為脫貧攻堅的主導(dǎo)產(chǎn)業(yè)大力扶持，馬鈴薯已成為昆明市僅次于玉米的第二大作物，周年種植面積超過4萬 hm2。因適宜的氣候環(huán)境條件，晚疫病常年發(fā)生、危害嚴(yán)重，每年均造成巨大的經(jīng)濟損失。防控晚疫病最經(jīng)濟有效的措施是種植抗病品種，盡管當(dāng)?shù)匾M(jìn)了一些馬鈴薯新品種青薯9號、宣薯2號、麗薯6號等，但這些品種抗性較差，晚疫病發(fā)生時主要依賴于化學(xué)殺菌劑進(jìn)行防治。

甲霜靈為苯基酰胺類殺菌劑，在生物活性、內(nèi)吸性和持效期等方面效果均優(yōu)于同類化合物，被廣泛應(yīng)用于晚疫病的防治。自首先在歐洲檢測到馬鈴薯晚疫病菌甲霜靈抗性菌株后，在全球各地馬鈴薯產(chǎn)區(qū)也相繼報道了甲霜靈抗性菌株的出現(xiàn)及其發(fā)生頻率[2]。2000年以后，我國各省馬鈴薯產(chǎn)區(qū)的甲霜靈抗性菌株在晚疫病菌群體中的比例逐年上升[3-5]，表明甲霜靈藥效下降，馬鈴薯晚疫病菌抗藥性已成為晚疫病防控中的一個突出問題。近年來，隨著馬鈴薯晚疫病菌新致病性譜系在馬鈴薯產(chǎn)區(qū)的迅速演替，病原菌群體組成發(fā)生了顯著的變化，增大了晚疫病防控的難度[6-7]。為合理地開展馬鈴薯晚疫病的化學(xué)防控，筆者對昆明市馬鈴薯主要產(chǎn)區(qū)晚疫病菌的甲霜靈抗藥性水平進(jìn)行了測定，以期明確晚疫病菌的抗藥性程度，為馬鈴薯晚疫病合理防控及病原菌抗藥性的科學(xué)治理提供參考。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1供試菌。供試馬鈴薯晚疫病菌共52株，由2015—2016年采自昆明市馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)的晚疫病樣本分離、純化所得。

1.1.2供試藥劑。96%甲霜靈原藥由北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司提供，溶于二甲基亞砜(DMSO)后，配制成50 mg/mL儲液，置于4 ℃冰箱備用。

1.2試驗方法參照Forbes[8]的方法，供試菌株培養(yǎng)14 d后采用含藥平板進(jìn)行甲霜靈敏感性測定。分別配制含甲霜靈0、5、100 μg/mL 3個濃度梯度的黑麥培養(yǎng)基(RSA)平板，用直徑為5 mm的打孔器切取菌落邊緣新鮮菌塊分別置于平板中央，每個處理3次重復(fù)，在18 ℃黑暗培養(yǎng)5 d后，采用十字交叉法測量菌落直徑。每批次測定均用已知的甲霜靈抗性參考菌株作為對照。根據(jù)含藥平板的菌落直徑與空白對照菌落直徑之比計算的相對生長量，確定供試菌株對甲霜靈的敏感性。敏感性判定標(biāo)準(zhǔn)：5、100 μg/mL含藥平板的菌落生長量≥40%的0 μg/mL含藥平板生長量為抗性(R)；兩者均<40%的0 μg/mL含藥平板生長量為敏感(S)；5 μg/mL含藥平板的菌落生長量≥40%的0 μg/mL含藥平板的菌落生長量、100 μg/mL含藥平板的菌落生長量<40%的0 μg/mL含藥平板生長量為中抗(M)。相對生長量=(供試菌株菌落直徑-5)/(對照菌株菌落直徑-5)×100%。

2 結(jié)果與分析

由表1可知，甲霜靈濃度為5 μg/mL時，晚疫病菌相對生長量最低為59.24%，最高達(dá)98.81%；甲霜靈濃度為100 μg/mL時，晚疫病菌相對生長量最低為43.25%，最高達(dá)94.15%。52株菌在5、100 μg/mL含藥平板上的相對生長量均大于40%的0 μg/mL含藥平板的菌落生長量，均為甲霜靈抗性菌株，未檢測到中抗和敏感菌株。由此可知，昆明市馬鈴薯產(chǎn)區(qū)的晚疫病菌對甲霜靈的抗藥性水平很高，用甲霜靈防控晚疫病已經(jīng)完全失效。

注：R代表抗性

Note：R was resistance

3 結(jié)論與討論

甲霜靈自1977年推出后，對植物病原卵菌引起的病害的防治水平得到很大提高。但是甲霜靈對病原菌的作用位點單一，長期單一的使用很容易產(chǎn)生抗藥性。近30年來，全球馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈的抗藥性日益嚴(yán)重[2]，長期使用甲霜靈將導(dǎo)致防治無效、成本增加。趙志堅等[6]報道2001—2003年云南省晚疫病菌對甲霜靈抗性、中抗和敏感菌株比例

分別為13.2%、9.4%和77.4%。2003—2005年云南省馬鈴薯晚疫病菌主要由甲霜靈敏感群體組成，甲霜靈抗性菌株比例為20.4%[9]。2008—2011年四川省馬鈴薯晚疫病菌甲霜靈抗性菌株在群體中的比例為63.0%[10]。2007—2009年，河北、黑龍江、吉林、遼寧和內(nèi)蒙古北方5省(區(qū))馬鈴薯晚疫病菌對甲霜靈的抗性菌株比例為80%[11]。2007—2012年甘肅馬鈴薯晚疫病菌甲霜靈抗性菌株的比例為55.9%[12]。上述研究表明，隨著甲霜靈在晚疫病防控中的廣泛應(yīng)用以及晚疫病菌新群體在各個馬鈴薯產(chǎn)區(qū)的替代，甲霜靈抗性菌株已成為優(yōu)勢群體，防控效率顯著下降。該研究測定的昆明市晚疫病菌對甲霜靈的抗藥性水平顯示：甲霜靈抗性菌株在昆明市馬鈴薯產(chǎn)區(qū)的比例高達(dá)100%，表明甲霜靈對昆明市馬鈴薯晚疫病菌已經(jīng)完全失效，不能再用于馬鈴薯晚疫病的防治。目前，一些新型高效的替代殺菌劑，如銀法利、瑞凡、明贊、烯酰嗎啉、氟嗎啉等對晚疫病有較高的防控效果，可在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用。但需科學(xué)合理地輪換和使用這些殺菌劑，應(yīng)避免長期施用單一殺菌劑，與無交互抗性的殺菌劑輪換使用，降低抗藥性產(chǎn)生的風(fēng)險，延長殺菌劑在生產(chǎn)上的使用年限。

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