馬冬梅 陶慶春 齊宏偉

[摘要] 目的 研究雙黃連和米諾環(huán)素、哌拉西林/他唑巴坦和頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合應(yīng)用對廣泛耐藥鮑曼不動桿菌的聯(lián)合抑菌效果。 方法 收集2016年10月～2017年6月從北京中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院（以下簡稱“我院”）臨床標本分離出的30株廣泛耐藥鮑曼不動桿菌，應(yīng)用肉湯稀釋法測定雙黃連與米諾環(huán)素、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢哌酮/舒巴坦的最低抑菌濃度（MIC），計算部分抑菌濃度（FIC）指數(shù)，判定中西藥聯(lián)合抑菌效果。 結(jié)果 雙黃連和米諾環(huán)素聯(lián)用FIC指數(shù)：0.5～1占6.7%、>1～2占63.3%、>2占30.0%；雙黃連和哌拉西林/他唑巴坦聯(lián)用FIC指數(shù)：0.5～1占16.7%、>1～2占83.3%；雙黃連和頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)用FIC指數(shù)：≤ 0.5占23.3%、0.5～1占73.3%、>1～2占3.3%。 結(jié)論 雙黃連聯(lián)合米諾環(huán)素和哌拉西林/他唑巴坦對廣泛耐藥鮑曼不動桿菌多數(shù)表現(xiàn)為無關(guān)作用和拮抗作用，體外聯(lián)合抑菌作用較差；而雙黃連與頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合應(yīng)用體外抑菌作用較好。

[關(guān)鍵詞] 廣泛耐藥鮑曼不動桿菌；部分抑菌濃度；雙黃連粉針劑；抑菌效果

[中圖分類號] R446.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）09（a）-0148-04

[Abstract] Objective To study antibacterial effect of Shuanghuanglian combined with minocycline and Piperacillin /Taz-obactam and Cefoperazone / Sulbactam on extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii in vitro. Methods A total of 30 strains extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii were collected from clinical specimens from October 2016 to June 2017 in Beijing University of Chinese Medicine Third Affiliated Hospital. The minimum inhibitory concentration （MIC） of Shuanghuanglian and minocycline， Piperacillin / Tazobactam， Cefoperazone / Sulbactam （Cefoperazone / Sulbactam） in 30 strains extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii was tested by the broth dilution method， and the partial inhibitory concentration （FIC） index was calculated， and the combined bacteriostasis effect of Chinese and Western medicine was determined. Results The FIC index of Shuanghuanglian combined with minocycline： 0.5-1 accounted for 6.7%， >1-2 accounted for 63.3%， and >2 accounted for 30.0%； the FIC index of Shuanghuanglian combined with Piperacillin / Tazobactam： 0.5-1 accounted for 16.7%， >1-2 accounted for 83.3%； the FIC index of Shuanghuanglian combined with Cefoperazone / Sulbactam： ≤ 0.5 accounted for 23.3%， 0.5-1 accounted for 73.3%， >1-2 accounted for 3.3%. Conclusion Shuanghuanglian combined with minocycline and Piperacillin / Tazobactam has a non-independent and antagonistic effect on the extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii， and the combined antibacterial effect in vitro is poor. The combined antibacterial effect of Shuanghuanglian combined with Cefoperazone / Sulbactam is better.

[Key words] Extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii； Fractional inhibitory concentration； Shuanghuanglian powder injection； Antibacterial effect

鮑曼不動桿菌屬于條件致病菌廣泛存在于自然界、醫(yī)院環(huán)境及人體皮膚等部位。近年來，全國細菌耐藥監(jiān)測結(jié)果顯示，鮑曼不動桿菌耐藥率呈上升趨勢[1-3]。本次體外抑菌試驗選用的雙黃連粉針劑為臨床常用中藥制劑。有研究表明，雙黃連粉針劑具有較好的抗菌效果[4-5]；頭孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦都是臨床常用抗生素，多用于鮑曼不動桿菌及其他革蘭陰性桿菌抗感染治療；目前，米諾環(huán)素在北京中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院（以下簡稱“我院”）及全國細菌耐藥檢測數(shù)據(jù)顯示，鮑曼不動桿菌對其耐藥率較低[1-3]。

本次試驗通過稀釋法測定藥物單獨以及聯(lián)合應(yīng)用對30株試驗菌的MIC，繪制藥物單用和聯(lián)用MIC分布圖，計算聯(lián)合用藥部分抑菌濃度（FIC）指數(shù)，分析并比較雙黃連與抗生素的聯(lián)合抑菌效果，為廣泛耐藥鮑曼不動桿菌抗感染治療提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

1.1.1 標本來源 試驗菌株分離自我院臨床痰液和尿液標本（采集日期2016年10月25日～2017年6月23日，排除同一患者重復(fù)株），試驗菌株均通過BD Phoenix -100微生物自動鑒定藥敏分析儀鑒定，藥敏結(jié)果遵照CLSI M100-S26執(zhí)行，選出鮑曼不動桿菌廣泛耐藥株。大腸埃希菌ATCC25922作為質(zhì)控菌。

1.1.2 培養(yǎng)基 M-H肉湯培養(yǎng)基、血平板、麥康凱平板、M-H瓊脂平板。

1.1.3 試驗用藥 雙黃連粉針劑（哈藥集團中藥二廠，批號：1508110）、鹽酸米諾環(huán)素膠囊（惠氏制藥有限公司，批號：M33252）、哌拉西林鈉/他唑巴坦鈉（石藥集團中諾藥業(yè)有限公司，批號：150902）、頭孢哌酮/舒巴坦（2∶1，美國輝瑞制藥有限公司，批號：1539364）。

1.1.4 儀器設(shè)備 微生物自動鑒定藥敏分析儀、麥氏濁度儀、電熱恒溫培養(yǎng)箱、微量加樣器、玻璃試管。

1.2 方法

1.2.1 菌液配制 將30株試驗菌分別配制成0.5麥氏比濁的菌液，再稀釋10倍作為試驗菌液備用。

1.2.2 MIC測定 采用倍比稀釋法分別將藥物用MH肉湯配制如下：雙黃連由高到低濃度是200.00～3.12 mg/mL，米諾環(huán)素由高到低濃度是64～1 μg/mL、哌拉西林/他唑巴坦和頭孢哌酮/舒巴坦由高到低濃度是512～8 μg/mL，取上述各濃度藥物1 mL分別加入30組試管，每管加入50 μL配制好的試驗菌液，35℃、24 h培養(yǎng)，測定各藥物對30株菌的MIC。

1.2.3 聯(lián)合用藥試驗 根據(jù)30株試驗菌的MIC結(jié)果，分別取2倍MIC為最高稀釋濃度，按倍比稀釋法配制各藥物10個稀釋濃度，將雙黃連與三種不同抗生素兩兩組合，35℃培養(yǎng)24 h，記錄最佳組合效應(yīng)時兩藥聯(lián)用時各自的MIC值，計算FIC指數(shù)。

1.2.4 FIC結(jié)果計算及判讀 FIC指數(shù)=聯(lián)合應(yīng)用時甲藥的MIC/單獨用藥時甲藥的MIC+聯(lián)合應(yīng)用時乙藥的MIC/單獨用藥時乙藥的MIC。FIC指數(shù)判讀標準：FIC≤0.5為兩藥協(xié)同作用；0.52為拮抗作用。

2 結(jié)果

2.1 藥物單獨應(yīng)用以及聯(lián)合應(yīng)用MIC結(jié)果

藥物單獨應(yīng)用以及聯(lián)合應(yīng)用對30株試驗菌的MIC值范圍、MIC50、MIC90見表1～3。從表中可以看出，雙黃連聯(lián)合用藥以后，頭孢哌酮/舒巴坦組MIC值范圍、MIC50、MIC90與單用相比明顯降低，米諾環(huán)素和哌拉西林/他唑巴坦組聯(lián)用后變化不顯著。

2.2 藥物單用以及聯(lián)合應(yīng)用MIC分布圖

雙黃連與米諾環(huán)素、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢哌酮/舒巴坦單用以及聯(lián)合應(yīng)用MIC分布見圖1。結(jié)果顯示，雙黃連與米諾環(huán)素、哌拉西林/他唑巴坦聯(lián)合后，各自的MIC分布均較單用時略有左移，MIC分布峰值與單用比較沒有變化。雙黃連與頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合，MIC分布較單用明顯左移，雙黃連的MIC分布峰值由單用的12.50 mg/mL降至6.25 mg/mL，頭孢哌酮/舒巴坦的MIC分布峰值由單用的256.00 μg/mL降低為64.00 μg/mL。

2.3 FIC指數(shù)分布

雙黃連與米諾環(huán)素、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合應(yīng)用FIC指數(shù)分布。見表4。雙黃連和米諾環(huán)素聯(lián)用FIC指數(shù)：0.5～1占6.7%、>1～2占63.3%、>2占30%；雙黃連和哌拉西林/他唑巴坦聯(lián)用FIC指數(shù)：0.5～1占16.7%、> 1～2占83.3%；雙黃連和頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)用FIC指數(shù)：≤ 0.5占23.3%、0.5～1占73.3%、> 1～2占3.3%。

3 討論

鮑曼不動桿菌耐藥機制極其復(fù)雜[6-7]，其引起的臨床感染越來越受到醫(yī)護人員的重視?！鄂U曼不動桿菌感染診治與防控專家共識》中指出：耐藥鮑曼不動桿菌根據(jù)藥敏結(jié)果可采用聯(lián)合兩種或兩種以上抗生素進行治療[8]。臨床上對耐藥鮑曼不動桿菌感染治療也常采用聯(lián)合用藥[9]。

雙黃連粉針劑為臨床常用中藥制劑，具有清熱解毒等功效。有研究表明，雙黃連制劑具有廣譜的殺菌作用[10-12]。雙黃連聯(lián)合抗生素使用越來越受到關(guān)注，張偉等[13]將雙黃連與氯唑西林鈉聯(lián)合使用，表現(xiàn)出對金黃色葡萄球菌耐藥菌株有較好的抗菌效果。徐海瑛等[14]研究發(fā)現(xiàn)，雙黃連口服液和慶大霉素聯(lián)合應(yīng)用對金黃色葡菌球菌有相加作用。本次試驗藥物單用以及聯(lián)合應(yīng)用MIC分布結(jié)果顯示：雙黃連聯(lián)合米諾環(huán)素、哌拉西林/他唑巴坦，MIC分布均較單用時略有降低，MIC分布峰值與單用比較沒有變化；雙黃連與頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合，MIC分布較單用明顯降低，MIC分布峰值也明顯降低。雙黃連與米諾環(huán)素聯(lián)合應(yīng)用的FIC指數(shù)結(jié)果以無關(guān)和拮抗作用為主，無協(xié)同作用；雙黃連與哌拉西林/他唑巴坦聯(lián)合應(yīng)用的FIC指數(shù)結(jié)果以無關(guān)為主；雙黃連與頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合應(yīng)用的FIC指數(shù)結(jié)果以相加和協(xié)同作用為主，無拮抗作用。哌拉西林/他唑巴坦是臨床常用抗生素，米諾環(huán)素和頭孢哌酮/舒巴坦在我院及全國細菌耐藥檢測數(shù)據(jù)顯示對鮑曼不動桿菌耐藥率較低。本次試驗結(jié)果顯示，雙黃連與哌拉西林/他唑巴坦和米諾環(huán)素聯(lián)合抑菌效果差；而雙黃連與頭孢哌酮/舒巴坦體外聯(lián)合抑菌效果較好。研究表明[15-20]舒巴坦具有較好的抗菌活性，本次試驗結(jié)果也提示雙黃連與頭孢哌酮/舒巴坦聯(lián)合應(yīng)用優(yōu)于其他抗生素的抑菌效果。中西藥聯(lián)合應(yīng)用抑菌機制尚不明確，可能與抑制外排泵等[21-22]因素有關(guān)。本次試驗只選取30株我院臨床分離菌，并且為體外抑菌試驗，而體內(nèi)聯(lián)合用藥的效果有待進一步臨床研究。

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（收稿日期：2017-11-28 本文編輯：任 念）