耿蓓　鄔文正　汪世君　彭瑾瑾　汪全海

【摘要】 目的：研究高脂飲食對(duì)小鼠轉(zhuǎn)錄因子CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α（CCAAT/enhancer binding protein-α，C/EBPα）表達(dá)的影響。方法：60只（sprague dawley，SD）雄性小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，之后隨機(jī)均分成兩組：高脂飲食組（30只）和正常飲食組（30只），分別給予高脂飼料及普通飼料喂養(yǎng)，每周記錄各組小鼠的體重，8周后用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）測(cè)定兩組小鼠血清中C/EBPα表達(dá)情況。采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，分析高脂飲食與正常飲食組之間血清C/EBPα表達(dá)的差異。結(jié)果：高脂飲食組小鼠血清C/EBPα濃度明顯低于正常飲食組[（50.03±10.07）pg/mL vs （56.55±10.28）pg/mL，t=2.482，P=0.016）。隨著喂養(yǎng)的進(jìn)行，高脂飲食組小鼠每周體重明顯增加，8周時(shí)高脂飲食組小鼠體質(zhì)量與正常飲食組相比顯著增加[（53.46±7.15）g vs （41.96±5.44）g，t=7.011，P=0.000]，呈明顯肥胖態(tài)。結(jié)論：高脂飲食可能減少C/EBPα的表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】 高脂飲食； 轉(zhuǎn)錄因子； C/EBPα； 體重； 肥胖

Effect of High-fat Diet on Expressions of Transcription Factor C/EBPα in Mouse/GENG Bei，WU Wenzheng，WANG Shijun，et al.//Medical Innovation of China，2018，15（27）：00-004

【Abstract】 Objective：To study the effect of high-fat diet on the expressions of transcription factor CCAAT/ enhancer binding protein α（C/EBPα） in mouse.Method：Sixty male SD mice were fed adaptability for a week.Then these mice were randomly divided into two groups：the high-fat diet group（n=30） and the normal diet group（n=30）.The weight of these mice were recorded weekly.Enzyme liked immunosorbent assay（ELISA） were applied to detect the expression of C/EBPα in serum after eight weeks.SPSS 13.0 statistical software was used to analyze the different expression of C/EBPα in serum between the high-fat diet group and the normal diet group.Result：The concentration of serum C/EBPα significantly decreased in the high-fat diet group compared with the normal diet group[（50.03±10.07）pg/mL vs （56.55±10.28）pg/mL，t=2.482，P=0.016].The weekly weight of mice in the high-fat diet group increased significantly with the feeding at 8 weeks，the high-fat diet group was （53.46±7.15）g，while the normal diet group was （41.96±5.44）g，there was statistical significance （t=7.011，P=0.000）.The high-fat diet mice looked like fatter than that of the normal group obviously.Conclusion：High-fat diet could decrease the expression of C/EBPα in serum.

【Key words】 High-fat diet； Transcription factor； C/EBPα； Weight； Obesity

First-authors address：Wannan Medical College，Wuhu 241002，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.27.001

眾所周知，隨著人們生活水平的提高，高脂、高熱量飲食已越來越多見。大量的動(dòng)物和人體實(shí)驗(yàn)表明，長(zhǎng)期高脂飲食可明顯改變機(jī)體的代謝狀態(tài)[1]，并影響多種轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)[2-5]。轉(zhuǎn)錄因子CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α（C/EBPα）是轉(zhuǎn)錄因子CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白（CCAAT/enhancer binding protein，C/EBP）家族中的一員[6]。作為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，C/EBPα在脂肪細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、肝臟、肺及胎盤等多種細(xì)胞及組織中表達(dá)[7-9]，并且在機(jī)體多種細(xì)胞的增殖、分化、炎癥、能量代謝及腫瘤的發(fā)生等反應(yīng)過程中發(fā)揮重要作用[9-11]。因此，機(jī)體內(nèi)C/EBPα的準(zhǔn)確表達(dá)對(duì)正常的生命進(jìn)程至關(guān)重要，一旦其表達(dá)失調(diào)，就有可能對(duì)機(jī)體造成重大的影響。本研究通過高脂飲食與正常飲食喂養(yǎng)小鼠，并測(cè)定兩種喂養(yǎng)方式下小鼠血清中轉(zhuǎn)錄因子C/EBPα表達(dá)的情況，探究高脂飲食是否對(duì)小鼠轉(zhuǎn)錄因子C/EBPα的表達(dá)產(chǎn)生影響?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)4周齡、精神狀態(tài)基本一致的SD雄性小鼠60只，體重24～28 g。自由飲食、飲水。動(dòng)物房?jī)?nèi)情況：室溫22～25 ℃，相對(duì)濕度50%～70%，12 h/d光照維持，晝夜循環(huán)。

1.1.2 試劑盒 小鼠CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α

（C/EBPα）酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒（Shanghai Lianshuo Biological Technology Co.，Ltd）

1.1.3 器材與試劑 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀、純水儀、

37 ℃恒溫箱、-80 ℃醫(yī)用冰箱、自動(dòng)洗板機(jī)、移液器（不同取液量）及一次性槍頭、EP管、高壓蒸汽滅菌鍋、低溫離心機(jī)、電子秤、彎頭鑷子、組織剪、一次性試管、吸水紙、蒸餾水、水合氯醛。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組 清潔級(jí)4周齡、體重和精神狀態(tài)基本一致的SD雄性小鼠60只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后按隨機(jī)數(shù)字表法均分成2組：高脂飲食組（30只）和正常飲食組（30只），高脂飲食組給予高脂飼料喂養(yǎng)8周，正常飲食組給予普通飼料喂養(yǎng)8周，每周記錄各組小鼠體重。

1.2.2 標(biāo)本采集 所有小鼠按照要求飼養(yǎng)8周后，小鼠采用4%水合氯醛，按0.1 mL/10 g腹腔注射進(jìn)行麻醉，麻醉平穩(wěn)后眼眶采血，3 000 r/min離心

10 min分離血清后EP管分裝置于-80 ℃冰箱，頸椎脫臼法處死小鼠，并取肝臟、腎臟、心臟及肺組織。

1.2.3 C/EBPα測(cè)定 嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書要求進(jìn)行配置標(biāo)本稀釋液、標(biāo)準(zhǔn)品液、洗滌液，加樣、洗板，加入第一抗體工作液；再洗板，加酶標(biāo)抗體工作液，再洗板，加底物工作液，加終止液混勻；用酶標(biāo)儀在450 nm處測(cè)吸光值。同時(shí)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定高脂飲食組與正常飲食組小鼠中血清C/EBPα含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，組間差異采用雙側(cè)t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 高脂飲食飼養(yǎng)8周小鼠的體重變化情況 實(shí)驗(yàn)第1～3周，高脂飲食組與正常飲食組小鼠體重相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。隨著喂養(yǎng)的進(jìn)行，高脂飲食組小鼠每周體重明顯增加，第4周末開始，兩組體重比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），正常飲食組小鼠體重增加相對(duì)于高脂飲食組較為緩慢，高脂飲食組小鼠呈明顯肥胖態(tài)。見表1。

2.2 小鼠血清C/EBPα的表達(dá)情況 高脂飲食組與正常飲食組小鼠分別用高脂飼料和普通飼料喂養(yǎng)8周后，用ELISA法測(cè)得高脂飲食組和正常飲食組血清C/EBPα的表達(dá)情況，高脂飲食組為（50.03±10.07）pg/mL，

正常飲食組為（56.55±10.28）pg/mL，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.482，P=0.016）。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，給予高脂飲食后，高脂飲食組小鼠的體重增長(zhǎng)速度明顯大于正常飲食組小鼠，飼養(yǎng)到第8周時(shí)，高脂飲食組小鼠呈明顯的肥胖狀態(tài)，兩組小鼠體重比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與文獻(xiàn)[12]證實(shí)的高脂飲食可以誘導(dǎo)小鼠肥胖模型形成的結(jié)果一致。另外，國(guó)內(nèi)外已有大量的人體和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)了長(zhǎng)期高脂飲食會(huì)導(dǎo)致肥胖的發(fā)生。肥胖是一種由環(huán)境和遺傳等多種因素共同作用所引起的慢性代謝性疾病，通過分泌炎癥因子參與胰島素抵抗、糖尿病以及心血管疾病的發(fā)生。肥胖是目前世界范圍內(nèi)最受矚目的公共健康問題，已成為影響人類健康的重要疾病之一，肥胖的分型方法各異，診斷標(biāo)準(zhǔn)也不再是單一的體質(zhì)指數(shù)（BMI）法，能客觀反映脂肪分布和含量的腰圍（WC）、體脂量（BF）、內(nèi)臟脂肪面積（VFA）等新標(biāo)準(zhǔn)正逐漸滲入到臨床診斷和治療評(píng)估中，同時(shí)肥胖還作為一種高危因素廣泛應(yīng)用于慢性病的臨床篩查與疾病防治[13-15]。肥胖發(fā)生的機(jī)制較為復(fù)雜，核心機(jī)制至今尚未完全明確，有關(guān)于肥胖發(fā)病機(jī)制的研究目前仍是學(xué)術(shù)界探討的熱點(diǎn)問題之一，文獻(xiàn)[16-17]結(jié)果均表明與遺傳有關(guān)的相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的改變?cè)诜逝值陌l(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了重要的作用。

肥胖直接病理學(xué)表現(xiàn)為脂肪細(xì)胞體積增大和數(shù)量增多，前脂肪細(xì)胞是一種能夠增殖并專一地向脂肪細(xì)胞分化的前體細(xì)胞，C/EBPα可激活和分化相關(guān)的基因表達(dá)進(jìn)而起到促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的分化作用，C/EBPα對(duì)前脂肪細(xì)胞分化有直接影響并起到關(guān)鍵作用的轉(zhuǎn)錄因子。轉(zhuǎn)錄因子C/EBPα是

C/EBP轉(zhuǎn)錄因子家族中第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的成員[18]，其基因位于人類染色體19q13.1，無內(nèi)含子，通過同一個(gè)mRNA翻譯成兩種蛋白異構(gòu)體：p42和p30[19]。C/EBPα作為體內(nèi)重要的調(diào)控因子，在多種細(xì)胞、組織中表達(dá)，尤其是脂肪組織、小腸、肝、腎上腺、肺、胎盤、外周血單核細(xì)胞等，C/EBPα參與調(diào)控脂肪細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞和卵巢顆粒細(xì)胞分化，抑制細(xì)胞增殖，C/EBPα在能量代謝的調(diào)控中也起著一定的作用，也有研究表明C/EBPα可通過多種機(jī)制影響系膜細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞等細(xì)胞，最終參與各種腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展。C/EBPα多種生物學(xué)功能之中，調(diào)控脂肪細(xì)胞是其主要功能之一[20-22]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：給予小鼠高脂飲食8周后，高脂飲食組小血清C/EBPα的濃度明顯低于正常飲食組的，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。肥胖發(fā)生的核心是脂肪細(xì)胞的過度增殖與分化，按照此推斷，高脂飲食應(yīng)該使C/EBPα表達(dá)增多，與本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果相反。造成此差異的原因可能是：（1）兩組小鼠在飼養(yǎng)到第8周時(shí)，高脂飲組小鼠死亡14只，存活16只，正常飲食組死亡7只，存活23只，故而所采集到的血清樣品的數(shù)量存在著明顯不均衡。由于樣本數(shù)量的差異，可能造成了最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和預(yù)期的結(jié)果不同。（2）高脂飲食導(dǎo)致肥胖的發(fā)生過程中導(dǎo)致脂肪細(xì)胞增殖與分化的其他調(diào)控因子如過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator-activatedreceptorγ，PPARγ）、脂肪細(xì)胞定向和分化因子1可能起到了主導(dǎo)作用[21-22]，而C/EBPα因?yàn)楸桓咧嬍秤绊懛炊磉_(dá)減少。因此，要證實(shí)高脂飲食與C/EBPα表達(dá)的關(guān)系還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證。

現(xiàn)階段中小城市超重和肥胖率以驚人的速度快速增長(zhǎng)，肥胖是目前世界范圍內(nèi)最受矚目的公共健康問題。由肥胖引起的疾病、心理、經(jīng)濟(jì)和社會(huì)等問題正像流行病一樣在全世界蔓延，必須在全社會(huì)普及有關(guān)肥胖的科學(xué)知識(shí)，通過多種渠道幫助人們健康飲食，保持健康體重，享受高質(zhì)量的生活，關(guān)于肥胖各項(xiàng)研究仍在進(jìn)行，隨著研究方法和實(shí)驗(yàn)技術(shù)的改進(jìn)，期望能有突破性進(jìn)展，為控制肥胖的發(fā)生發(fā)展，提供根本的解決方法。

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（收稿日期：2018-03-06） （本文編輯：程旭然）