施 璐，柳曉鳳，王 宏，何星品，韋燕鳳，曹曉琴，方振峰

（江漢大學 醫(yī)學院藥學系，湖北 武漢 430056）

雙氯芬酸鈉（diclofenac sodium，DCF）為解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥物，是一種新型非甾體類藥，主要用于鎮(zhèn)痛消炎、解熱與抗風濕等病癥［1-2］。該藥物口服吸收快，血漿半衰期短，達峰時間快，效果十分明顯，但水溶性較差，對胃腸道有很強的刺激性，患者耐受性差，致使藥物療效降低，限制了該藥在治療骨關節(jié)腫痛方面的廣泛使用［3-4］。本研究將該藥制成溫敏凝膠劑進行局部外用給藥，可減少胃腸道不良反應，避免首關消除，促進吸收，提高生物利用度［5-6］。

1 材料

1.1 儀器

ME104E電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司），DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（河南省予華儀器有限公司），UV-1780紫外可見分光光度計（島津（上海）儀器有限公司），RYJ-6B藥物透皮擴散試驗儀（上海黃海藥檢儀器有限公司）。

1.2 藥品與材料

泊洛沙姆188（Poloxamer188，批號：WPYG580B，德國BASF公司），泊洛沙姆407（Poloxamer407，批號：I1613027，阿拉丁試劑有限公司）；氯化鈉（批號：20150615，國藥集團化學試劑有限公司）；聚乙二醇2000（批號：20140423），聚乙二醇4000（批號：20150311），聚乙二醇6000（批號：20161130），均為國藥集團化學試劑有限公司產品；雙氯芬酸鈉（批號：C10029723，上海麥克林生化科技有限公司）。

2 方法

2.1 溫敏凝膠的制備

采用冷溶法［7］，稱取處方量P407加入適量蒸餾水，攪拌放入4℃冰箱冷藏直至完全溶脹，加入處方量P188、PEG及雙氯芬酸鈉，補水至全量，攪拌混勻。

2.2 膠凝溫度的測定

采用倒置法［8］，稱取凝膠溶液適量置試管中，再將試管置于恒溫加熱磁力攪拌器中，緩慢升溫，升溫速率為1℃/min，不時小幅度傾斜試管，當液體不流動時，溫度即膠凝溫度。

2.3 影響溫敏凝膠膠凝溫度的探究

2.3.1 不同PEG型號對膠凝溫度的影響 按照表1的處方制備溫敏凝膠，采用2.2項的方法測定膠凝溫度。

2.3.2 溫敏凝膠組成比例對膠凝溫度的影響 按照表2的處方比例制備溫敏凝膠，采用2.2項的方法測定膠凝溫度。

2.4 溫敏凝膠劑中雙氯芬酸鈉含量的測定［9］

2.4.1 檢測波長的選擇 取雙氯芬酸鈉對照品溶液，雙氯芬酸鈉溫敏凝膠及空白溫敏凝膠適量，于200～600 nm波長范圍內掃描。結果對照品和雙氯芬酸鈉溫敏凝膠在276 nm波長處有最大吸收，空白溫敏凝膠對雙氯芬酸鈉測定無干擾。因此確定276 nm波長為最適檢測波長。

2.4.2 標準曲線的制備 精密稱取雙氯芬酸鈉對照品25 mg，置100 mL容量瓶中，加入生理鹽水溶液，定容，搖勻，量取本溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0、6.0 mL分別置50 mL容量瓶中，加上述生理鹽水溶液至刻度，搖勻，測量出各個濃度溶液的吸光度A，將A測定與濃度C進行回歸，能夠得到以下標準曲線：y=33.699 0x+0.004 7（R=0.999 8，n=6）。結果表明，雙氯芬酸鈉檢測質量濃度線性范圍為：0.002 5 ～ 0.030 mg/mL。

2.4.3 精密度試驗 取2.4.1項下雙氯芬酸鈉對照品溶液適量，連續(xù)進樣測定6次，記錄吸光度。結果雙氯芬酸鈉吸光度的RSD=1.78%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗 取2.4.1項下雙氯芬酸鈉對照品溶液適量，分別在2、4、6、8、10、12 h進樣測定，記錄吸光度，數(shù)據(jù)顯示雙氯芬酸鈉的RSD=2.04%，表明對照品溶液在12 h內穩(wěn)定性良好。

2.4.5 重復性試驗 按對照品溶液制備方法，平行制備5份對照品溶液，分別進樣測定雙氯芬酸鈉的量，其RSD=1.89%，結果表明本方法重復性良好。

2.4.6 回收率試驗 精密量取雙氯芬酸鈉對照品溶液適量，配置成質量濃度分別為5、10、20 μg/mL的對照品溶液，每個質量濃度3份，測定A值，計算雙氯芬酸鈉的量，與加入量進行比較，計算回收率得3個質量濃度的平均回收率分別為96.66%、98.57%、99.87%，RSD=1.61%。

2.5 體外透皮實驗

2.5.1 離體豬皮的制備 取豬皮，祛除豬毛，刮去皮下脂肪組織，使全部豬皮厚度均一。放置冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.5.2 透皮實驗方法［9-10］采用Franz擴散池進行透皮試驗。分組實驗，均固定豬皮在透皮擴散儀的擴散室與接受室之間，豬皮內側朝向接受室，皮膚角質層朝向擴散室，使其緊密接觸。在兩組豬皮擴散室上分別覆蓋雙氯芬酸鈉凝膠，均在接受室中注入生理鹽水接收液，液面恰與皮膚內層接觸，開動電磁攪拌器恒速攪拌并恒溫，接收池體積為6.5 mL，有效擴散面積為2.4 cm2。分別在給藥后2、4、6、8、10、12 h取樣置10 mL量瓶中。每次取樣后均補加相同體積的新鮮接收液并排除接受室中的氣泡。在波長為276 nm下，用生理鹽水接收液歸零，測量各個濃度吸光度，計算雙氯芬酸鈉的含量，并按以下公式計算累積滲透量Q，

式中Cn：第n個時間點取樣測得的質量濃度（mg/mL）；V：接受室容積（mL）：為取樣時藥物累積量之和；Ci：第i個時間點取樣測得的藥物質量濃度（mg/mL）；Vi：取樣體積（mL）；S：有效透皮面積（cm2）。

3 結果

3.1 不同型號PEG對膠凝溫度的影響

三種不同型號PEG對凝膠膠凝溫度影響結果可見表1。結果表明，雖然添加PEG對膠凝溫度有一定影響，且不同型號PEG的影響不同，但總體影響較小。

表1 不同型號的PEG對膠凝溫度的影響Tab.1 Influence of different types of PEG on gelation temperature

3.2 溫敏凝膠組成比例對膠凝溫度的影響

本次實驗研究了P188對溫敏凝膠膠凝溫度的影響，結果見表2。結果表明當P407含量一定時，在一定范圍內，膠凝溫度隨P188的含量增大而增大，其原因可能是P188可參與P407膠束的形成，使體系中環(huán)氧乙烯和聚氧乙烯的比值降低，膠凝溫度升高。

表2 溫敏凝膠組成比例對膠凝溫度的影響Tab.2 Influence of thermosensitive gel composition on gelation temperature

3.3 體外透皮實驗結果

分別取膠凝溫度為32、34、36℃的溫敏凝膠進行透皮實驗，不同處方在不同溫度下的Q12h見表3。數(shù)據(jù)顯示，添加不同型號PEG的處方在實驗的任何溫度下，體外透皮量均比不添加PEG的溫敏凝膠處方高，說明在溫敏凝膠處方中添加PEG2000、PEG4000或PEG6000，均能提高溫敏凝膠的經皮滲透效果，從而明顯提高藥物生物利用度。體外經皮滲透曲線見圖1、圖2和圖3。

表3 不同處方在不同溫度下的Q12hTab.3 Q12h of different prescriptions at different temperatures/（mg·cm-2）

圖1 膠凝溫度為32℃的溫敏凝膠透皮結果Fig.1 Percutaneous results at 32℃gelling temperature

圖2 膠凝溫度為34℃的溫敏凝膠透皮結果Fig.2 Percutaneous results at 34℃gelling temperature

圖3 膠凝溫度為36℃的溫敏凝膠透皮結果Fig.3 Percutaneous results at 36℃gelling temperature

4 討論

溫敏凝膠劑是一種新型的現(xiàn)代給藥系統(tǒng)，制劑的關鍵在于確定適宜的膠凝溫度。本實驗以P188與P407作為溫敏材料，結果也證實當P407比例不變時，在一定范圍內，隨著P188的比例增大，膠凝溫度升高。

聚乙二醇是一類親水性基質，其性質穩(wěn)定，對皮膚無刺激性，具有潤滑性，可用于凝膠劑，且無毒、無味，與藥物、基質、皮膚有良好的相容性，可作為滲透促進劑，可逆地改變角質層的屏障功能，又不損傷活性細胞［11］，用在凝膠制劑中可以提高藥物透皮吸收率。本研究采取與P407和P188熔點相似的PEG2000、PEG4000、PEG6000作為凝膠輔料進行體外透皮實驗。結果證實，添加不同型號聚乙二醇的雙氯芬酸鈉溫敏凝膠劑在不同溫度下的透皮量均比未加聚乙二醇的高，說明處方中添加聚乙二醇制備雙氯芬酸鈉溫敏凝膠能有效提高雙氯芬酸鈉的經皮滲透效果。本研究可為溫敏凝膠載藥系統(tǒng)的制備方法改進提供一定參考。