鐘聲平 陳 超 莊志猛
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日本東京灣云紋石斑魚染色體核型研究
鐘聲平1,2①陳 超2莊志猛2
(1. 廣西壯族自治區(qū)海洋研究所 廣西海洋生物技術(shù)重點實驗室 北海 536000;2. 中國水產(chǎn)科學研究院黃海水產(chǎn)研究所 山東省漁業(yè)資源與生態(tài)環(huán)境重點實驗室 青島 266071)
采用PHA體內(nèi)直接注射法制備了云紋石斑魚(Temminck & Schlegel 1842)東京灣群體頭腎組織染色體標本并分析其核型。結(jié)果顯示,其東京灣群體二倍體染色體數(shù)為48,其中,亞中部著絲粒3對;其余21對染色體為端部著絲粒染色體,其染色體臂數(shù)NF為54,核型公式為:2n = 48,6sm + 42t,NF = 54;第24對染色體的短臂的形態(tài)具有多態(tài)性。該魚染色體臂數(shù)高于石斑魚類的原始核型類群,屬于石斑魚屬的特化類群。云紋石斑魚日本東京灣群體與廈門群體染色體核型存在顯著差異,東京灣群體比廈門群體多1對亞中部著絲粒染色體,可能是長期隔離導致染色體重組進化形成的。結(jié)果表明,云紋石斑魚不同地理群體間存在豐富的遺傳差異,可利用不同地理群體間的種內(nèi)雜交優(yōu)勢改良云紋石斑魚種質(zhì)。
云紋石斑魚;染色體;核型
云紋石斑魚(Temminck & Schlegel 1842)俗稱草斑、油斑,為中下層礁棲魚類,主要分布于太平洋西岸的日本、韓國和中國海域 (郭明蘭等, 2008)。其個體大、生長速度快、適應能力強、肉質(zhì)鮮嫩可口,是我國東南沿海重要經(jīng)濟養(yǎng)殖對象,具有良好的養(yǎng)殖開發(fā)前景(陸麗君等, 2011)。然而,因其人工催產(chǎn)和苗種培育技術(shù)難度較高,日本在2001年才實現(xiàn)云紋石斑魚苗種規(guī)模化繁育(王民生, 2001)。在我國,中國水產(chǎn)科學研究院黃海水產(chǎn)研究所在2010年突破了其苗種規(guī)模化繁育技術(shù)(林時雨, 2010; 宋振鑫等, 2012)。近幾年,有關(guān)云紋石斑魚的研究主要集中在種間雜交(李炎璐等, 2012; 張夢淇等, 2016)、生長營養(yǎng)(陸麗君等, 2011; 宋振鑫等, 2014; 張廷廷等, 2016)、免疫抗逆(Tian, 2017; 廖雅麗等, 2016; 潘桂平等, 2016; 施兆鴻等, 2015)以及養(yǎng)殖技術(shù)(梁友等, 2014; 宋振鑫等, 2012)等方面,仍缺乏該魚種質(zhì)遺傳多樣性相關(guān)研究。本文研究了日本東京灣云紋石斑魚染色體核型,并與該魚廈門群體的染色體核型進行比較,以期為云紋石斑魚種質(zhì)資源的保護及遺傳育種研究提供理論依據(jù)。
所用材料采自山東省煙臺開發(fā)區(qū)天源水產(chǎn)有限公司養(yǎng)魚場,為日本東京灣海域捕獲的幼魚,引種后在室內(nèi)24 m2水泥池人工馴養(yǎng)1個月,養(yǎng)殖期間 投喂鮮雜魚餌料,日投餌2~3次,總的投餌量約為體重的8%。本實驗隨機挑選6尾幼魚,體長為20.3~23.6 cm,體重為127~161 g。
1.2.1 染色體標本的制備 參照PHA(植物凝集素)(林義浩, 1982)體腔直接注射法制備染色體標本,略作修改。取充氣暫養(yǎng)于25℃海水24 h后的云紋石斑魚,按PHA劑量為10 μg/g魚體重進行腹腔活體注射,3 h后按1 μg/g魚體重的劑量注射秋水仙素,1 h后剪鰓放血,然后取出頭腎于生理鹽水中洗滌、剪碎,用紗布過濾細胞懸浮液至離心管中,1000 r/min離心5 min,收集細胞,用生理鹽水洗滌細胞2次,1000 r/min離心10 min收集細胞,加入0.075 mol/L的KCl溶液于32℃低滲處理20 min,1000 r/min離心10 min,收集細胞,加入預冷新配制的卡諾氏固定液(甲醇∶乙酸=3∶1∶) (固定90 min,每30 min更換固定液,共換液2次。冷滴片法制片,空氣干燥過夜。染色體玻片用10%吉姆薩染色液染色30 min,自然干燥后顯微鏡(Olympus BX51)觀察拍照。
1.2.2 核型分析 選取清晰的染色體中期分裂相計數(shù)確定染色體眾數(shù)。選取10個分散效果良好、著絲粒清晰、長度適中、2條染色單體適度分開的中期分裂相放大、測量、統(tǒng)計,使用Photoshop軟件依據(jù)相對大小從大到小編號,根據(jù)Levan等(1964)的標準進行核型分析。
本實驗對464個中期分裂相計數(shù)、統(tǒng)計。結(jié)果顯示,76.72%的中期分裂相染色體數(shù)目為48 (表1),據(jù)此確定云紋石斑魚日本東京灣群體二倍體染色體眾數(shù)是48,即:2n = 48。
對10個中期分裂相進行鏡檢和測量,統(tǒng)計了染色體的相對長度和臂比以及染色體類型,結(jié)果見表2。分析顯示,云紋石斑魚日本東京灣群體的染色體可配對成24對同源染色體,按Levan命名法可分為2組,其中,具亞中部著絲粒(sm)3對;其余21對染色體為端部著絲粒(t)染色體(圖1和圖2)。24對染色體中,第24對染色體的相對長度明顯短于其他23對染色體,其他23對染色體彼此相對長度差異不明顯,從5.13±0.15均勻遞減至2.81±0.13(表2),根據(jù)染色體的相對長度、著絲點位置和特征,確定云紋石斑魚日本東京灣群體染色體核型公式為:2n = 48,6sm + 42t,NF = 54。
表1 云紋石斑魚染色體數(shù)目統(tǒng)計結(jié)果
Tab.1 Chromosome numbers of E. moara
對云紋石斑魚中期分裂相進行鏡檢后發(fā)現(xiàn):第24對染色體的短臂的形態(tài)具有可變性。部分中期分裂相中短臂形態(tài)清晰,為sm型染色體(圖2c);部分中期分裂相中短臂變短消失,為t型染色體(圖2b),或變長表現(xiàn)為絲狀,為次縊痕(圖2a)。
生物遺傳信息一般以染色體為主要載體,染色體核型在很大程度上反映了該物種的進化歷史及其物種間的親緣關(guān)系。染色體核型的變異可能會導致該物種生物學特征的變異、生殖隔離的發(fā)生,乃至新物種產(chǎn)生(郭明蘭, 2008)。對已報道的國內(nèi)外魚類的染色體核型進行統(tǒng)計比較研究,結(jié)果顯示,淡水魚類染色體二倍數(shù)變化較大,多數(shù)為48和50 (Yu, 1987; 余先覺等, 1989),海水魚類的染色體二倍數(shù)則相對一致,多數(shù)為48 (Junior, 2006)。據(jù)此推測,淡水魚類的基本二倍體數(shù)目是2n = 48和2n = 50,其原始染色體核型為2n = 48t或50t;海水魚類的基本二倍體數(shù)目是2n = 48,其原始染色體核型為2n = 48t。有關(guān)研究指出,石斑魚屬的原始染色體核型也為2n = 48t,符合海水魚類原始核型特征(劉莉等, 2016; 鐘聲平等, 2010)。其他具有中部、亞中部和亞端部著絲粒染色體應該是由端部著絲粒染色體經(jīng)易位、倒位等染色體重組的方式進化而來,屬于比較特化的類型(王世鋒, 2007)。日本東京灣云紋石斑魚的染色體核型公式為:2n = 48,6sm + 42t,NF = 54,其染色體臂數(shù)為54,高于石斑魚屬魚類的原始核型染色體臂數(shù)48,屬于石斑魚屬的特化類群,推測是石斑魚屬演化過程中較晚出現(xiàn)的物種之一。郭明蘭(2008)對廈門群體云紋石斑魚的核仁組織區(qū)銀染(Ag-NORs)實驗結(jié)果顯示,其中期分裂相中主要有2對Ag-NORs,也高于石斑魚屬具有1對Ag-NORs數(shù)目的原始核仁組織區(qū)特征,推測其原始1對核仁組織區(qū)在進化中由于染色體易位重組,導致2對染色體都具有核仁組織區(qū)。核仁組織區(qū)結(jié)果同樣顯示,云紋石斑魚屬于石斑魚屬的特化類群。此外,郭明蘭(2008)研究表明,石斑魚屬魚類核仁組織區(qū)位置具有很高的同源性,一般位于最小的 1對染色體(第24對染色體)上,且石斑魚屬大多數(shù)種類第24對染色體形態(tài)高度保守,為該屬原始核型的T型染色體。迄今,包括本研究在內(nèi)的已報道的26種石斑魚中,僅有4種石斑魚[云紋石斑魚(郭明蘭, 2008),斜帶石斑魚()(丁少雄等, 2004; 王云新等, 2004),褐點石斑魚()(廖經(jīng)球等, 2006),褐石斑魚()(郭明蘭, 2008; 王世鋒, 2007)]的第24對染色體形態(tài)發(fā)生了改變,為SM型染色體。該結(jié)果也支持云紋石斑魚屬于石斑魚屬的特化類群的推論。
表2 云紋石斑魚各染色體的相對長度和臂比值
Tab.2 Relative length and arm ratio of chromosomes of E. moara (n = 10;±SD)
圖1 云紋石斑魚染色體核型
圖2 云紋石斑魚不同中期分裂相中第24對染色體(不同箭頭所指)三種形態(tài)
a: 絲狀; b: T型; c: SM型a: Filiform; b: T type; c: SM type
研究顯示,一個物種的染色體核型特征,包括染色體數(shù)目和染色體類型是相對穩(wěn)定的,海水魚類中同物種不同地理群體,甚至同個體不同細胞、不同發(fā)育階段染色體核型特征有差異時有發(fā)生(郭明蘭, 2008)。在石斑魚類中有研究報道,斜帶石斑魚、褐石斑魚及云紋石斑魚廈門群體個體中第24對染色體在不同中期分裂相中存在不同形態(tài)的短臂。推測其原因,可能與核仁組織區(qū)的rDNA表達活性相關(guān),表達活性強時,短臂明顯,反之則不可見。本研究結(jié)果顯示,云紋石斑魚東京灣群體個體中第24對染色體形態(tài)也存在多態(tài)性,表現(xiàn)為sm型染色體、t型染色體,或變長表現(xiàn)為絲狀,為次縊痕,與該魚廈門群體研究結(jié)果相同,推測其多態(tài)性也與第24對染色體上核仁組織區(qū)的rDNA表達活性相關(guān)。另外,比較大黃魚()岱衢族和閩粵東族群體的染色體核型,顯示2個地理群體間染色體核型存在顯著差異:岱衢族群體的染色體核型公式為2n = 48,6m + 6sm + 36t,NF = 60;而閩粵東族群體的染色體核型公式為2n = 48,6st + 42t,NF = 48。因適應不同生長環(huán)境、長期地理隔離,可能是大黃魚不同地理群體間染色體核型存在顯著差異重要原因之一(王德祥等, 2006)。此外,花尾胡椒鯛()(曹伏君等, 2008; 覃映雪等, 2003)、中華烏塘鱧()(費志清等, 1987; 沈亦平等, 1994)和黑鯛()(劉靜等, 1991; 喻子牛等, 1993)等海水魚類均報道存在染色體核型多態(tài)。石斑魚屬魚類中,擬青石斑魚 ()(王世鋒, 2007; 鄭蓮等, 2005)、赤點石斑魚()(王世鋒, 2007; 王云新等, 2004)和鮭點石斑魚()(陳毅恒等, 1990; 鄭蓮等, 2005)等種類也存在染色體核型多態(tài)。本研究結(jié)果表明,云紋石斑魚日本東京灣群體與廈門群體染色體核型也存在顯著差異:日本東京灣群體的染色體核型公式為2n = 48,6sm + 42t,NF = 54;而廈門群體染色體核型公式為2n = 48,4sm + 44t,NF = 52。云紋石斑魚不同地理群體間存在豐富的遺傳多樣性,可利用不同地理群體間遺傳差異加速該魚的種質(zhì)改良進展。推測其可能因為長期的地理隔離,導致該魚2個地區(qū)群體染色體進化重組而存在差異,有待進一步證實。該結(jié)果也提示,云紋石斑魚不同地理群體間存在豐富的遺傳多樣性,可利用不同地理群體間遺傳差異加速該魚的種質(zhì)改良進展。
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Chromosome Karyotype of(Temminck & Schlegel 1842) of Tokyo Bay Population
ZHONG Shengping1,2①, CHEN Chao2, ZHUANG Zhimeng2
(1. Key Laboratory of Marine Biotechnology, Guangxi Institute of Oceanology, Beihai 536000;2. Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences; Shandong Provincial Key Laboratory for Fishery Resources and Eco-Environment, Qingdao 266071)
Cytogenetic analysis is a valuable tool for germplasm study and protection. In order to clarify the Germplasm resources of, the metaphase chromosomes ofof Tokyo Bay population were obtained from the head kidney tissue by the method of PHA and colchicine injection and the karyotype was analyzed by using microscopes. We observed 464 mitotic metaphases from 6 individuals, and 356 of all observed mitotic metaphases (76.72%) showed 2n = 48 chromosomes, which indicated that there were 48 chromosomes in the diploid. We then analyzed 10 mitotic metaphases and calculated the relative length and arm ratio of the chromosomes. The relative length of the chromosomes inof Tokyo Bay population varied from (5.13±0.15) % to (2.81±0.13) %. The arm ratio of the 14thchromosome was 2.35±0.14, and the arm ratio of the 16th chromosome was 2.71±0.24. The 24thchromosome had the minimum arm ratio, which was 1.99±0.13. According to arm ratio, the diploid consisted of 6 submetacentric, and 42 telocentric chromosomes, and the fundamental number of chromosome arms was 54, which indicated karyotypic formula inof Tokyo Bay population was 2n = 48,6sm + 42t,NF = 54. The form of the 24thchromosome was changed in different metaphase from the same individual (the shorter arm changed among filiform, T type, and SM type), which may be related with the expressed activity of the rDNA in nucleolar organizing region. By comparison with the chromosome karyotypes of other,has the evolutive characteristics of karyotypic pattern and belongs to the specialization group. As detected, the karyotypes ofwere different between Japan (Tokyo Bay) and China (Xiamen coastal waters) samples, which may be caused by geographic isolation. There were abundant genetic diversity among different geographic populations, and the germplasm improvement ofcould be accelerated by heterosis among different geographic groups.
; Chromosome; Karyotype
* 廣西重點研發(fā)計劃(桂科AB16380105)和引進國際先進農(nóng)業(yè)科學技術(shù)(948)項目(2008-Z8)共同資助 [This work was supported by Scientific Research and Technology Development Program of Guangxi (AB16380105), and the Introduction of International Advanced Agricultural Science and Technology (948) Project (2008-Z8)].
鐘聲平,E-mail: shpzhong@foxmail.com
ZHONG Shengping,E-mail: shpzhong@foxmail.com
2017-06-26,
2017-07-11
10.19663/j.issn2095-9869.20170626001
鐘聲平, 陳超, 莊志猛. 日本東京灣云紋石斑魚染色體核型研究. 漁業(yè)科學進展, 2018, 39(5): 44–49 Zhong SP, Chen C, Zhuang ZM. Chromosome karyotype of(Temminck & Schlegel 1842) of Tokyo Bay population. Progress in Fishery Sciences, 2018, 39(5): 44–49
S917.4
A
2095-9869(2018)05-0044-06
(編輯 馮小花)