白 莉 陳亞東 夏永濤 許式見 胡 謀 沙珍霞

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俄羅斯鱘β-防御素基因的克隆及表達(dá)分析*

白 莉1,3陳亞東2,3夏永濤4許式見4胡 謀4沙珍霞2①

(1. 大連海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院 大連 116023；2. 青島大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 青島 266071；3. 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部海洋漁業(yè)可持續(xù)發(fā)展重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所 青島 266071；4. 杭州千島湖鱘龍科技股份有限公司 杭州 311701)

β-防御素是一類富含半胱氨酸的陽離子抗菌肽，在脊椎動(dòng)物免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。本研究基于轉(zhuǎn)錄組Solexa測(cè)序結(jié)果，利用PCR和熒光定量PCR技術(shù)對(duì)俄羅斯鱘() β-防御素基因進(jìn)行了克隆和表達(dá)模式分析。結(jié)果顯示，俄羅斯鱘β-防御素cDNA片段長(zhǎng)度為333 bp，包含開放閱讀框(Open reading frame, ORF) 213 bp，推測(cè)編碼71個(gè)氨基酸；SMART分析顯示，該基因包含23個(gè)氨基酸的信號(hào)肽、1個(gè)防御素-β-2結(jié)構(gòu)域和6個(gè)保守的半胱氨酸殘基，此結(jié)構(gòu)與其他物種極為相似，在進(jìn)化中比較保守。同源比對(duì)發(fā)現(xiàn)，俄羅斯鱘β-防御素與魚類的相似度最高，為54%~60%。β防御素基因在健康俄羅斯鱘11種組織(肝、腸、脾、頭腎、胃、鰓、血液、腦、皮膚、肌肉和性腺)中均有表達(dá)，其中，在性腺和皮膚中表達(dá)量最高；病原菌嗜水氣單胞菌()感染后可強(qiáng)烈影響β-防御素基因在6種免疫組織(肝、腸、脾、頭腎、血液和鰓)中的時(shí)空表達(dá)。其中，在頭腎中的上調(diào)表達(dá)最明顯，在感染后72 h為表達(dá)峰值，達(dá)到0 h表達(dá)量的700倍。在脾、血液和腸中均有幾倍至十幾倍的上調(diào)，而在肝中整體呈現(xiàn)下調(diào)表達(dá)趨勢(shì)。研究表明，β-防御素基因參與了俄羅斯鱘的免疫應(yīng)答過程，本結(jié)果為俄羅斯鱘的免疫調(diào)控和病害防治研究奠定了基礎(chǔ)。

俄羅斯鱘；β-防御素；基因克隆；基因表達(dá)；嗜水氣單胞菌

防御素是一類富含半胱氨酸的陽離子抗菌肽，廣泛分布于植物、昆蟲和脊椎動(dòng)物中。根據(jù)對(duì)6個(gè)保守的半胱氨酸的位置和二硫鍵連接方式不同將防御素分為3個(gè)亞家族：α、β和θ-防御素(Zhu2013)。β-防御素是動(dòng)物防御素系統(tǒng)中最大的成員，具有廣譜的抗菌活性及不受傳統(tǒng)抗生素耐藥性菌株影響的抗菌機(jī)理，同時(shí)，與典型抗生素具有協(xié)同作用，能中和內(nèi)毒素、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)組織創(chuàng)傷修復(fù)等而備受人們關(guān)注(張偉等, 2006)。

鱘魚被稱為“水中活化石”，近年來，俄羅斯鱘()養(yǎng)殖業(yè)在我國(guó)發(fā)展較快，由于其性成熟周期較長(zhǎng)，養(yǎng)殖過程一旦發(fā)生病害，將對(duì)養(yǎng)殖業(yè)產(chǎn)生巨大影響，而嗜水氣單胞菌()是致病的主要病原體之一(楊治國(guó), 2001)。但俄羅斯鱘的免疫基因發(fā)掘及免疫機(jī)制鮮有報(bào)道。本研究在前期俄羅斯鱘性腺轉(zhuǎn)錄組(Chen, 2016)中挖掘到β-防御素部分序列的基礎(chǔ)上，克隆了俄羅斯鱘β-防御素cDNA序列，推導(dǎo)出包含信號(hào)肽的完整蛋白序列，研究其組織表達(dá)及響應(yīng)病原菌刺激后在免疫組織中的時(shí)空表達(dá)模式，為俄羅斯鱘免疫機(jī)理研究、病害防治和健康養(yǎng)殖提供有價(jià)值的研究資料。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

健康1.5齡俄羅斯鱘，體長(zhǎng)為(47.5±2.5) cm，體重為(450±10) g。取自杭州千島湖鱘龍集團(tuán)有限公司，暫養(yǎng)于直徑2 m、水深0.5 m的圓形玻璃鋼養(yǎng)殖缸中，至少15 d后方可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。養(yǎng)殖用水引自烏溪江，水溫為17~20℃。嗜水氣單胞菌為實(shí)驗(yàn)室保存菌種，分離自俄羅斯鱘病魚組織，經(jīng)16S rRNA測(cè)序進(jìn)行菌種鑒定。

1.2 組織收集

分別收集3條健康俄羅斯鱘的肝、腸、脾、頭腎、胃、鰓、血液、腦、皮膚、肌肉和性腺11種組織，立即放入液氮中，隨后將組織轉(zhuǎn)移至–80℃冰箱中保存，用于總RNA提取。采用腹腔注射方法按照半致死劑量(2.07×104CFU/g)進(jìn)行病原感染。對(duì)照組注射同等體積的1×PBS溶液。收集感染0、6、12、24、48、72 h實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，各取3條俄羅斯鱘的肝、脾、鰓、血液、頭腎和腸組織，保存方式同上所述。

1.3 總RNA提取及cDNA的合成

采用液氮研磨收集的組織，參照總RNA提取試劑盒(天根, 北京)說明書進(jìn)行組織總RNA提取。使用Agilent 2100生物分析儀(Applied Biosystems, 美國(guó))檢測(cè)其質(zhì)量和濃度，通過瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA的完整性。按照Prime Script TM RT reagent kit (Perfect Real time) (寶生物, 大連)試劑盒合成cDNA，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 俄羅斯鱘β-防御素基因cDNA片段克隆

從俄羅斯鱘性腺轉(zhuǎn)錄組中篩選出β-防御素基因部分cDNA序列，采用Primer Premier 5.0在線軟件(www.bio-soft.net)設(shè)計(jì)特異性引物P1和P2(表1)，以俄羅斯鱘11個(gè)組織混合cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物連接T載體，轉(zhuǎn)化到T1感受態(tài)細(xì)胞中，對(duì)陽性克隆進(jìn)行測(cè)序。

表1 俄羅斯鱘β-防御素基因克隆和表達(dá)分析所用引物

Tab.1 Primers used for cloning and expression of A. gueldenstaedti β-defensin

1.5 生物信息學(xué)分析

將測(cè)序拼接獲得的基因序列運(yùn)用NCBI(http:// blast.ncbi.nlm.nih.gov/)Protein Blast進(jìn)行β-防御素氨基酸同源性比對(duì)，使用在線軟件SMART(http://smart. embl-heidelberg.de/)預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域；信號(hào)肽預(yù)測(cè)采用SignalP3.0Server(http://www.cbs.dtu.dk/ services/ SignalP/)，應(yīng)用ORF finder(https://www.ncbi.nlm.nih. gov/orffinder/)、DNAstar(http://www.dnastar.com/)、ClustalX1.83 (http://www.genome.jp/tools/clustalx/)和DNAMAN(http://www.lynnon.com/)等軟件進(jìn)行俄羅斯鱘β-防御素基因開放閱讀框的查找及氨基酸多重序列比對(duì)分析。利用MEGA 5.1重復(fù)1000次構(gòu)建N-J進(jìn)化樹。應(yīng)用CPHmodels3.2server(http://www.cbs. dtu.dk/services/CPHmodels/)在線軟件預(yù)測(cè)β-防御素蛋白的三維結(jié)構(gòu)。

1.6 俄羅斯鱘β-防御素基因表達(dá)的實(shí)時(shí)定量分析

基因?qū)崟r(shí)定量表達(dá)分析參照已報(bào)道的方法進(jìn)行(路飏等, 2013; 于孟君等, 2017)。根據(jù)測(cè)序得到的俄羅斯鱘β-防御素cDNA序列設(shè)計(jì)qRT-PCR引物為P3、P4(表1)，以俄羅斯鱘18S rRNA基因?yàn)閮?nèi)參設(shè)計(jì)特異引物18S-F和18S-R(表1)。用SYBR Green熒光定量試劑盒(天根, 北京)按照說明書在ABI PRISM 7500Fast實(shí)時(shí)定量擴(kuò)增儀上(ABI，美國(guó))進(jìn)行該基因的實(shí)時(shí)定量分析(qRT-PCR)。每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，使用2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因相對(duì)表達(dá)量，值取3個(gè)平行樣品的平均值。qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果使用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA)的Duncan法對(duì)多組樣本均數(shù)進(jìn)行兩兩比較分析，0.05時(shí)，認(rèn)為存在顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 俄羅斯鱘β-防御素基因序列分析

克隆測(cè)序得到的俄羅斯鱘β-防御素基因部分cDNA片段長(zhǎng)度為333 bp，用ORF finder軟件分析其ORF長(zhǎng)度為213 bp，編碼71個(gè)氨基酸(圖1)，與其他物種的同源序列所包含的ORF長(zhǎng)度相當(dāng)。信號(hào)肽和結(jié)構(gòu)域分析結(jié)果顯示，該基因序列包含23個(gè)氨基酸的信號(hào)肽、完整的β-防御素-2結(jié)構(gòu)域(82~234)。

圖1 俄羅斯鱘β-防御素cDNA序列和推測(cè)的氨基酸序列

推導(dǎo)的氨基酸序列顯示在核苷酸序列下方，用大寫字母表示；雙下劃線(=)所示為信號(hào)肽；方框所示為起始密碼子(ATG)、星號(hào)(*)所示為終止密碼子(TAG)；下劃線(—)為defensin-β-2結(jié)構(gòu)域

Translated amino acid sequence was shown under nucleotide sequence as uppercase; The iniation codon and termination codon were marked by a box and an asterisk, respectively; Signal peptide was shown with double solid line(=); Defensin-β-2 domain was shown with underline(—)

2.2 俄羅斯鱘β-防御素基因同源比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化分析

推導(dǎo)的俄羅斯鱘β-防御素氨基酸序列和其他物種的β-防御素氨基酸序列如斑馬魚(, NP_001075024.1)、青鳉(, ACG55699.1)、鱖(, AFA41485.1)、鯉(, AGZ03658.1)、梭魚(, AIK66783.1)、點(diǎn)帶石斑魚(, AFA41485.1)、福鼎蠑螈(AHF22421.1)、原雞(, ALI16124.1)、小鼠(EDL32923.1)、大鼠(, AAC61871.1)、恒河猴(, AAC61871.1)和人(, AAH93985.1)等進(jìn)行同源比對(duì)。結(jié)果顯示，俄羅斯鱘β-防御素與其他物種的氨基酸序列同源性在39%~60%之間，其中，與斑馬魚和鯉魚的同源性最高，為60%，其次是鱖魚59%，與青鳉的同源性最低，為54%。但在不同的物種之間，都具有6個(gè)保守的半胱氨酸殘基(圖2)。

利用MEGA 5.1以N-J法構(gòu)建基于上述物種β-防御素氨基酸序列的分子系統(tǒng)進(jìn)化樹。結(jié)果顯示，系統(tǒng)進(jìn)化樹分為兩個(gè)大的分支，俄羅斯鱘β-防御素與斑馬魚、青鳉、鱖、梭魚、點(diǎn)帶石斑魚聚為一大支，其中俄羅斯鱘單獨(dú)聚為一個(gè)亞支，與斑馬魚和鯉進(jìn)化關(guān)系最近；小鼠、大鼠和人聚為另外一個(gè)大支，其中，鼠類按親緣關(guān)系遠(yuǎn)近聚成相應(yīng)的亞支；兩棲類福鼎蠑螈單獨(dú)聚為一個(gè)分支(圖3)。

2.3 β-防御素蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

預(yù)測(cè)的俄羅斯鱘β-防御素的3D結(jié)構(gòu)如圖4所示。結(jié)果顯示，C38和C66、C44和C60及C48和C67之間分別形成3對(duì)二硫鍵，6個(gè)保守的半胱氨酸殘基按照箭頭方向形成反向平行的β片層折疊結(jié)構(gòu)，對(duì)β-防御素結(jié)構(gòu)穩(wěn)定具有重要作用。該結(jié)構(gòu)與斑馬魚β-防御素-2非常相似，從結(jié)構(gòu)上判斷，獲得的俄羅斯鱘β-防御素基因應(yīng)屬于β-防御素-2基因。

2.4 β-防御素基因在俄羅斯鱘健康組織中的表達(dá)分析

圖2 推導(dǎo)的俄羅斯鱘β-防御素氨基酸與其他物種已知同源序列比對(duì)

圖中標(biāo)黑處表示6個(gè)保守的半胱氨酸殘基及位置，分別是C38、C44、C48、C60、C66和C67

Six conserved Cysteine residues (C38, C44, C48, C60, C66 and C67) in β-defensin protein were highlighted by black color

圖3 俄羅斯鱘與其他物種的β-防御素系統(tǒng)進(jìn)化分析

圖4 預(yù)測(cè)的俄羅斯鱘β-防御素蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)

三個(gè)二硫鍵：C38和C66(綠色)，C44和C60(藍(lán)色)和C48和C67(紅色)，箭頭方向表示β-片層折疊

Three disulfied bonds were formed C38-C66 (green), C44-C60 (blue) and C48-C67 (red), respectively Arrow mark indicates β-sheet

qRT-PCR結(jié)果顯示，β-防御素基因在檢測(cè)的健康俄羅斯鱘11種組織(肝、腸、脾、頭腎、胃、鰓、血液、腦、皮膚、肌肉和性腺)中均有不同程度的表達(dá)(圖5)。以表達(dá)量最低的血液(1.0)為對(duì)照，相對(duì)表達(dá)量最高的組織是性腺(21.75)，其次是皮膚(10.05)、胃(2.5)、肌肉(2.4)，在肝(1.5)和脾(1.5)、鰓(1.05)、腸(1.2)、腦(1.25)及頭腎(1.1)中的表達(dá)量相對(duì)較低，β-防御素基因在不同組織中表達(dá)存在特異性。

2.5 俄羅斯鱘感染嗜水氣單胞菌后β-防御素基因在免疫組織中的表達(dá)分析

圖5 β-防御素基因在健康俄羅斯鱘組織中的表達(dá)

L: 肝; In: 小腸; Sp: 脾; HK:頭腎; Sk: 皮膚; Mu: 肌肉; Gi: 鰓; Br: 腦; Bl: 血液; Go: 性腺; St: 胃。字母“a，b，c”代表SPSS多重分析的不同分組，有相同字母表示差異不顯著(0.05)，無相同字母表示差異顯著(<0.05)。下同L: Liver; In: Intestine; Sp: Spleen; HK: Head-Kidney; Sk: Skin; Mu: Muscle; Gi: Gill; Br: Brain; Bl: Blood; Go: Gonad; St: Stomach. The letters ‘a(chǎn), b, c, d’ are subsets by Duncan algorithm. The same letters indicate unsignificant difference (0.05), the different letters indicate significant difference (0.05). The same as below

圖6 俄羅斯鱘感染嗜水氣單胞菌后β-防御素基因在免疫組織中的表達(dá)

每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的β-防御素的表達(dá)量為感染組除以PBS組的相對(duì)表達(dá)量

The expression level of β-defensin at each timepoint was presented as relative expression in which the infected group divided by the PBS group

嗜水氣單胞菌感染俄羅斯鱘0、6、12、24、48和72 h后，β-防御素基因在6種免疫組織(肝、腸、脾、頭腎、鰓和血液)中呈現(xiàn)不同的表達(dá)特征，結(jié)果如圖6所示。嗜水氣單胞菌感染俄羅斯鱘后，β-防御素在頭腎、血液、腸、脾和鰓5種組織中均呈現(xiàn)上調(diào)表達(dá)，只是各組織中峰值出現(xiàn)的時(shí)間點(diǎn)不同，在肝中則呈現(xiàn)下調(diào)趨勢(shì)。其中，β-防御素基因在頭腎中呈現(xiàn)最為顯著的上調(diào)表達(dá)，與0 h相比，在感染后6 h后即出現(xiàn)了10倍的增加，在感染后的12~48 h，基因表達(dá)表現(xiàn)為幾十倍到上百倍不等的上調(diào)，到感染72 h達(dá)到峰值，為0 h表達(dá)量的700倍；β-防御素基因在小腸、血液和脾中整體上表現(xiàn)為上調(diào)表達(dá)，最大表達(dá)峰值達(dá)到幾倍到十幾倍，在鰓中表達(dá)量變化不大，最高的表達(dá)量出現(xiàn)在感染后12 h，為0 h表達(dá)量的2倍，其他時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量與0 h相當(dāng)；β-防御素基因在肝臟中則總體呈現(xiàn)下調(diào)表達(dá)模式，感染12~72 h后，表達(dá)量與0 h相比，呈現(xiàn)近5倍的明顯下調(diào)表達(dá)。

3 討論

養(yǎng)殖環(huán)境的生態(tài)環(huán)保對(duì)魚類健康養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)提出了嚴(yán)格要求，發(fā)展替代抗生素的綠色無污染的漁藥如抗菌肽等勢(shì)在必行。魚類β-防御素已被證明具有明顯的抗菌、抗病毒功能(Jin, 2010; Casadei, 2009)，具有廣闊的應(yīng)用前景。但目前魚類β-防御素的研究不深入，亟待在更多的魚種和功能分析上進(jìn)行更深入的研究。俄羅斯鱘是生產(chǎn)魚子醬的主要魚種之一，經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高，開展免疫機(jī)理和綠色病害防治研究，對(duì)發(fā)展和穩(wěn)定鱘魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)具有重要意義。本研究關(guān)于俄羅斯鱘β-防御素基因的克隆和表達(dá)研究，是俄羅斯鱘宿主免疫的首次報(bào)道。

俄羅斯鱘β-防御素基因cDNA長(zhǎng)度為333 bp，ORF為213 bp，編碼71個(gè)氨基酸，包含23個(gè)氨基酸的信號(hào)肽和48個(gè)成熟肽，目前報(bào)道的不同魚類的β-防御素前體分子一般由62~77個(gè)氨基酸殘基組成，信號(hào)序列和前導(dǎo)序列含有22~38個(gè)氨基酸殘基，成熟肽序列由39~45個(gè)氨基酸殘基組成(Casadei, 2009)，本研究結(jié)果與報(bào)道結(jié)果吻合。另外，俄羅斯鱘β-防御素C端包含6個(gè)保守的半光氨酸殘基，形成3個(gè)二硫鍵結(jié)構(gòu)，與報(bào)道的魚類β-防御素結(jié)構(gòu)一致(Dong, 2015; Ruangsri, 2013; Guo, 2012; Ellis, 2001)。俄羅斯鱘β-防御素蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)形成3個(gè)β-片層折疊，與斑馬魚BD-2的結(jié)構(gòu)(Ellis, 2001)很類似，SMART結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)，俄羅斯鱘β-防御素包含β-防御素-2結(jié)構(gòu)域，同源序列比對(duì)的結(jié)果也證實(shí)其與斑馬魚BD-2的相似度最高，為60%，這些證據(jù)都指明所獲得俄羅斯鱘β-防御素基因應(yīng)屬于β-防御素-2，在進(jìn)化上還是屬于相對(duì)原始的類型。

本研究初步研究了俄羅斯鱘的克隆、組織表達(dá)及相應(yīng)病原刺激的免疫應(yīng)答，后續(xù)研究尚需進(jìn)一步深入。由于俄羅斯鱘的基因資源還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不足，缺乏基因組及多數(shù)組織的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，加之俄羅斯鱘的基因組又極其復(fù)雜，染色體數(shù)目多達(dá)236條(尹洪濱等, 2006)，β-防御素有可能存在較多的同源基因和重復(fù)基因，在一定程度上對(duì)俄羅斯鱘β-防御素基因的克隆和精準(zhǔn)分型造成困難。由于獲得的俄羅斯鱘cDNA片段長(zhǎng)度只有333 bp，缺乏合適的位點(diǎn)設(shè)計(jì)RACE引物，我們嘗試多次克隆，仍無法獲得完整的5￠和3￠全長(zhǎng)，但我們獲得了完整的ORF，對(duì)進(jìn)一步開展功能研究奠定了良好基礎(chǔ)。在后續(xù)研究中，將進(jìn)一步驗(yàn)證其對(duì)不同病原(細(xì)菌、病毒)等的體內(nèi)和體外抗菌活性的研究，為俄羅斯鱘的綠色病害防治途徑探討可行之路。

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Cloning and Expression Analysis of β-Defensin Gene from Russian Sturgeon ()

BAI Li1,3, CHEN Yadong2,3, XIA Yongtao4, XU Shijian4, HU Mou4, SHA Zhenxia2①

(1. College of Fisheries and Life Science, Dalian Ocean University, Dalian 116023; 2. College of Life Sciences, Qingdao University, Qingdao 266071; 3. Key Laboratory for Sustainable Development of Marine Fisheries, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071; 4. Hangzhou Qiandaohu Xunlong Sci-Tech Co. Ltd. Hangzhou 311701)

β-defensins are cysteine, cationic, antibacterial peptides that play very important roles in the vertebrate immune system. In this study, the cDNA fragment of β-defensin gene fromwas cloned using a PCR method based on the Solexa sequencing results of gonad transcriptome, and gene expression was performed by qRT-PCR. The results showed that cDNA of β-defensin was 333 bp in length and contained an open reading frame (ORF) with 213 bp, which was deduced to encode a precursor peptide of 71 amino acids consisting of a signal peptide of 23 amino acid residues and a mature peptide of 48 amino acid residues. Russian sturgeon β-defensin possessed six conserved cysteine residues, forming three disulfide bridges at C38~C66, C44~C60 and C48~C67, and containing 1 defensin-β-2 domain. This structure is very similar to other species and conserved in evolution. Homologous alignment revealed that Russian sturgeon β-defensin had the highest sequence identity with fish species, about 54%~60%. qRT-PCR analysis showed the β-defensin transcript is constitutively expressed in 11 tissues (liver, intestine, spleen, head-kidney, gill, blood, brain, skin, muscle and gonad, stomach) in healthy fish, with highest expression in the gonads and skin. Artificial infection ofwithresulted in a significantly upregulated expression in the intestine, spleen, head kidney, blood, and gill while downregulating expression in the liver. The most significant upregulated expression and the peak level at 72 h reached 700 times baseline in the head-kidney. The results indicateβ-defensin genes are involved in the immune response.

; β-Defensin; Gene cloning; Gene expression;

* 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)(2014A03XK01)資助項(xiàng)目[This work was supported by Special Scientific Research Funds for Central Non-Profit Institutes, Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences (2014A03XK01)]. 白 莉，E-mail: Baili_soul@163.com

沙珍霞，研究員，E-mail: shazhenxia@163.com

SHA Zhenxia, E-mail: shazhenxia@163.com

2018-01-12,

2018-02-01

10.19663/j.issn2095-9869.20180112001

白莉, 陳亞東, 夏永濤, 許式見, 胡謀, 沙珍霞. 俄羅斯鱘β-防御素基因的克隆及表達(dá)分析. 漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2018, 39(5): 20–26Bai L, Chen YD, Xia YT, Xu SJ, Hu M, Sha ZX. Cloning and expression analysis of β-defensin gene from Russian sturgeon (). Progress in Fishery Sciences, 2018, 39(5): 20–26

S917.4

A

2095-9869(2018)05-0020-07

(編輯 馮小花)