吳明林 李海洋 江 河 何吉祥 侯冠軍 蔣陽陽

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草魚呼腸孤病毒AH528株全基因組特征及進化分析*

吳明林 李海洋 江 河 何吉祥①侯冠軍 蔣陽陽

(安徽省農業(yè)科學院水產研究所 合肥 230031)

草魚出血病是由草魚呼腸孤病毒(Grass carp reovirus, GCRV)引起的嚴重危害1~2齡草魚的一種傳染性疾病。本研究從安徽合肥地區(qū)患典型草魚出血病的病魚組織中分離到1株新的GCRV致病株，暫命名為GCRV-AH528。魚體人工感染實驗結果顯示，實驗魚出現典型的出血病癥狀：體背發(fā)黑，鰭基部、腹部、口腔、鰓絲、腸道充血發(fā)紅。全基因組特征分析顯示，GCRV-AH528由11個雙鏈RNA節(jié)段組成，節(jié)段大小在1027~3925 bp之間，AT平均含量為50.2%，GC平均含量為49.8%。與其他GCRVⅡ型毒株相比，L1節(jié)段在701~702位置缺少3個核苷酸(TAT)，少編碼1個酪氨基；M4節(jié)段出現突變，含2個開放閱讀框，編碼2個非結構蛋白NS9和NS69。所有節(jié)段兩端均含有6 bp保守的末端核苷酸序列5￠-GUAAU/CU???UU/GCAUC-3￠；另除L1、M6節(jié)段外，其余9個節(jié)段均在編碼區(qū)兩側發(fā)現5~9 bp的顛倒互補序列。GCRV-AH528與其他呼腸孤病毒核苷酸平均相似度在37.1%~98.1%之間；編碼蛋白平均相似度在24.3%~98.3%之間?；赩P1蛋白的聚類分析結果顯示，該病毒屬于水生呼腸孤病毒屬，在氨基酸水平上與典型株GCRV-873株的進化關系較遠。本研究結果表明，該毒株為一株新的草魚呼腸孤病毒Ⅱ型致病株。

草魚出血??；草魚呼腸孤病毒；VP1蛋白；水生呼腸孤病毒

草魚()是中國淡水養(yǎng)殖的主要品種之一，除西藏、青海零星養(yǎng)殖外，在我國各地均有較大規(guī)模的養(yǎng)殖。中國漁業(yè)統(tǒng)計年鑒顯示，2015年我國淡水魚類養(yǎng)殖產量為3062.27萬t，其中，草魚的養(yǎng)殖產量為567.62萬t，為我國所有養(yǎng)殖魚類之首(農業(yè)部漁業(yè)漁政管理局, 2016)。草魚養(yǎng)殖為保障我國農產品市場供給和人民生活水平的提高做出了重要貢獻。然而，草魚也是水產養(yǎng)殖動物中病害最為多發(fā)的一種魚類，主要病害包括草魚出血病、腸炎病、赤皮病、爛鰓病等(程文超等, 2016)。在感染草魚的所有病原中，由草魚呼腸孤病毒(Grass carp reovirus, GCRV)感染引起的草魚出血病是草魚養(yǎng)殖中最為常見的疾病，成為我國淡水水產養(yǎng)殖中最為突出的問題之一，于2008年被農業(yè)部規(guī)定為水生動物二類疫病。據不完全統(tǒng)計，我國每年由草魚出血病導致的經濟損失在10億元以上(Liang, 2014; Rodger, 2016)。

GCRV是中國分離的第一種魚類病毒，屬于呼腸孤病毒科、水生呼腸孤病毒屬，其變異性強，不同地區(qū)存在不同的毒株(Fan, 2013; 郝貴杰等, 2011; 劉永奎等, 2011)。GCRV毒株的地域差異性給該病的防治帶來巨大困難。不同分離株在毒力水平、細胞培養(yǎng)特性、免疫抗原性和對草魚的致病力等方面都具有較大的差異性(Fan, 2013; 柯麗華等, 1990; 張超等, 2010)。GCRV不同分離株的基因組均由11個節(jié)段組成，按分子量大小可分為3組，即較大節(jié)段(L1、L2和L3)、中等節(jié)段(M4、M5和M6)和較小節(jié)段(S7、S8、S9、S10和S11)(張超等, 2010)。研究表明，分節(jié)段的雙鏈RNA病毒，易于發(fā)生抗原變異及遺傳變異(Jiang, 2009; 黃毅昌等, 2016)。根據現有的分離株序列信息進行核苷酸序列與氨基酸序列比對以及構建系統(tǒng)進化樹分析，GCRV至少存在3種基因型，按照基因序列差異分為I型(代表株GCRV-873)、Ⅱ型(代表株GCRV HZ08)和Ⅲ型(代表株GCRV104) (Wang, 2012)。

本研究通過對采集自安徽合肥的發(fā)病草魚樣品進行病毒分離純化，獲得1株GCRV致病株，暫定名為GCRV-AH528。通過人工感染實驗、核酸分析、序列測定、進化分析等方法對該毒株進行研究，解析草魚出血病的分子流行病學特征，為該病害的防治提供基礎資料。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

Trizol、DNA聚合酶、pMD?18-T Vector、DNA Marker購自TaKaRa公司；青霉素、鏈霉素購自碧云天；T4 RNA ligase購自Promega公司；引物、瓊脂粉、LB培養(yǎng)基購自生工生物工程(上海)股份有限公司；瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒購自TIANGEN；PCR儀為ABI Veriti 96孔；超微量分光光度計為Quawell Q5000。

1.2 樣品的采集與處理

發(fā)病草魚采集自安徽合肥，臨床癥狀表現為魚體變黑，鰭基部、鰓蓋、鰓絲、眼眶、口腔和腸道充血發(fā)紅，肛門紅腫。收集病魚的肝、腎、脾和腸組織，用無菌剪刀剪碎，加入10倍體積含雙抗(100 IU/ml青霉素、100 mg/ml鏈霉素)的磷酸緩沖鹽溶液(PBS)。在冰浴下研磨成組織勻漿液，將組織勻漿液轉移至50 ml離心管中，在–80℃冷凍后于室溫再融化，反復凍融3次。隨后在4℃、8000 r/min離心30 min，上清液經0.22 μm濾器除菌后，置于–80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 人工感染實驗

將體重為(100±20) g的健康草魚隨機分成2組，每組30尾。實驗魚飼養(yǎng)水溫保持在(28±1)℃，每天投喂3次，投喂量占魚體重的3%~4%。實驗組通過腹鰭注射上述制備的病料組織懸液(0.5 ml/尾)，對照組注射等量的PBS。

1.4 病毒細胞培養(yǎng)

草魚腎臟組織細胞系(CIK)在塑料培養(yǎng)瓶中傳代培養(yǎng)，至細胞長成單層后，吸出培養(yǎng)基。每瓶接種0.5 ml病毒懸液，28℃吸附1 h，每隔15~20 min輕微晃動培養(yǎng)瓶以便均勻吸附。吸附結束后，吸出多余的組織勻漿濾液，加入含2%血清的DMEM細胞培養(yǎng)基，顯微鏡下觀察細胞增殖情況。病毒傳代時，將病毒細胞培養(yǎng)物反復凍融2次，繼續(xù)按上述接種方法傳代培養(yǎng)。病樣組織勻漿液接種CIK后，連續(xù)觀察7 d，沒有出現明顯的細胞病變(CPE)，盲傳至第8代，連續(xù)觀察仍未出現明顯的CPE。

1.5 病毒基因組提純與克隆

將含病毒的細胞培養(yǎng)物，–80℃至室溫反復凍融2次，4℃、4000 r/min離心30 min，上清液0.22 μm濾器過濾，濾液20000 r/min、4℃離心2 h，棄上清液，沉淀用超純水重懸后提純病毒(Qiu, 2001)。Trizol法提取病毒RNA后，采用加接頭引物的RT-PCR法擴增病毒基因組節(jié)段(Attoui, 2000)。首先在核酸的3￠端連接接頭引物A(5￠-PO4-AGGTC-TCGTAGACCGTGCACC-NH2-3￠)，然后利用A的互補引物B(5￠-GGTGCACGGTCTACGAGACCT-3￠)反轉錄，最后利用B進行PCR擴增。PCR產物經1%的瓊脂糖凝膠回收后，與pMD?18-T載體連接過夜，連接產物轉化感受態(tài)DH5α，挑選陽性克隆委托生工生物工程(上海)股份有限公司測序。

1.6 序列分析

應用Lasergene數據包中的SeqMan程序對核苷酸序列進行拼接(Burland, 1999)；使用NCBI的ORFfinder推測開放閱讀框(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/gorf. html)；用ExPASy在線完成蛋白質理化特性分析(http://web.expasy.org/protparam/)。使用Motif Scan進行蛋白基序的分析(http://myhits.isb-sib.ch/cgi-bin/motif_ scan)；用蛋白質分析軟件Antheprot中的GOR I method對蛋白序列進行二級結構預測(Deléage, 2001)。應用Lasergene數據包MegAlign模塊中的ClustalW對呼腸孤病毒核苷酸及其氨基酸序列進行同源性分析(Burland, 1999)。根據Neighbor-Joining(NJ)法，用MEGA軟件構建進化樹(Tamura, 2013)。

2 結果

2.1 人工感染實驗

人工感染實驗結果表明，GCRV-AH528對草魚具有較強的毒力。草魚被攻毒后，出現典型的出血病癥狀：體色發(fā)黑，鰭基部、腹部、口腔、鰓絲和腸道充血發(fā)紅(圖1)。

2.2 GCRV-AH528全基因組序列特征

GCRV-AH528全基因組由11個雙鏈RNA組成，核苷酸序列長度在1027~3925 bp之間(登錄號：KR180368-KR180378)，序列兩端含保守的核苷酸序列5￠-GUAAU/CU···UU/GCAUC-3￠。GCRV-AH528的11個節(jié)段AT含量為48.42%~54.23%，平均AT含量為50.20%；GC含量為45.77%~51.58%，平均GC含量為49.80%，AT含量略大于GC含量。進一步比較分析發(fā)現，除L1、M6節(jié)段外，其他9個節(jié)段均在編碼區(qū)兩側發(fā)現5~9 bp的顛倒互補序列(表1)。所有節(jié)段中，M4節(jié)段含有2個終止密碼子，編碼2個蛋白，其余10個節(jié)段均編碼1個蛋白。

2.3 L組節(jié)段核苷酸序列分析及編碼的蛋白功能預測

GCRV-AH528 L1節(jié)段全長3925 bp，編碼1個含1293個氨基酸的VP1結構蛋白，該蛋白與鳥苷酸轉移酶/甲基轉移酶同源，屬于呼腸孤病毒L2超家族。GCRV-AH528 L1與其他呼腸孤病毒相似節(jié)段的核苷酸、氨基酸同源性分別為37.1%~98.6%、24.2%~98.6%。

GCRV-AH528 L2節(jié)段全長3867 bp，編碼1個含1272個氨基酸的VP2結構蛋白，該蛋白為RNA依賴性RNA聚合酶(RdRp)。GCRV-AH528 L2具有呼腸孤病毒科RdRp的3個保守基序：motif I(IKACDASITPD YFLS)位于591~605氨基酸；motif Ⅱ(SG)位于687~ 688氨基酸；motif Ⅲ(GDD)位于738~740氨基酸。GCRV-AH528 L2與其他呼腸孤病毒相似節(jié)段的核苷酸、氨基酸同源性分別為46.2%~98.5%、43.3%~98.2%。

圖1 草魚出血病典型癥狀

A：體色發(fā)黑；B：腹部出血；C：口腔充血；D：鰓絲紅腫；E: 腸道出血

A: Blackened dorsum; B: Abdominal bleeding; C: Oral cavity hyperemia; D: Red and swollen gill; E:Intestine hemorrhage

表1 GCRV-AH528全基因組序列特征

Tab.1 Characteristics of GCRV-AH528 genome segments

GCRV-AH528 L3節(jié)段全長3753 bp，編碼1個含1232個氨基酸的內殼體蛋白VP3，該蛋白具有解旋酶及NTP酶的功能。序列分析發(fā)現，GCRV-AH528 VP3有1個保守的鋅指結構域(Cys-His-Cys-His)，位于氨基的第137~158位(CKVCLLEFDSLDKLQY-HQALAH)。GCRV-AH528 L3與其他呼腸孤病毒相似節(jié)段的核苷酸、氨基酸同源性分別為40.1%~98.4%、29.9%~99.3%(表2和表3)。

表2 GCRV-AH528與其他呼腸孤病毒同源蛋白比較

Tab.2 Comparison of homologous proteins encoded by GCRV-AH528 and other reovirus

草魚呼腸孤病毒AH528(GCRV-AH528)：AMR-58955.1-AMR58965.1；草魚呼腸孤病毒873(GCRV-873)：AAG10435.1- AAG10437.1，AAM92735.1-AAM92743.1；草魚呼腸孤病毒104(GCRV104)：AFG73672.1-AFG-73681.1，ADM25848.3；美國草魚呼腸孤病毒(AGCRV)：YP_001837094.1-YP_001837105.1；哺乳動物呼腸孤病毒(MRV)：ABP48913.1-ABP48922.1；禽呼腸孤病毒(ARV)：YP_004226521.1-YP_004226530.1

表3 GCRV-AH528與其他呼腸孤病毒核苷酸及氨基酸相似度比較(%)

Tab.3 Comparison of nucleotide and amino acid sequence identity between GCRV-AH528 and other reovirus(%)

草魚呼腸孤病毒873(GCRV-873)：AH009795.2，AF403390.1-AF403397.1，AAG10435.1-AAG10437.1，AAM92735.1- AAM92743.1；草魚呼腸孤病毒HZ08(GCRV HZ08)：GQ896334.1-GQ8963337.1，GU350742.1-GU350748.1，ADJ75335.1- ADJ75345.1；草魚呼腸孤病毒104(GCRV104)：JN967629.1-JN967639.1，AFG73672.1-AFG73681.1，ADM25848.3；美國草魚呼腸孤病毒(AGCRV)：NC_010584.1-NC_010594.1，YP_001837094.1-YP_001837105.1；哺乳動物呼腸孤病毒(MRV)：EF494435.1-EF494444.1，ABP48913.1-ABP48922.1；禽呼腸孤病毒(ARV)：NC_015126.1-NC_015135.1，YP_004226521.1- YP_004226530.1；核苷酸：NT；氨基酸：AA

2.4 M組節(jié)段核苷酸序列分析及編碼的蛋白功能預測

GCRV-AH528 M4節(jié)段全長2265 bp，含2個開放閱讀框，編碼2個非結構蛋白NS9(76個氨基酸)、NS69 (624個氨基酸)，2個蛋白由46 bp的非編碼區(qū)間隔。GCRV-AH528 M4與其他呼腸孤病毒相似節(jié)段的核苷酸、氨基酸同源性分別為29.9%~98.7%、18.1%~98.6%。

GCRV-AH528 M5節(jié)段全長2230 bp，編碼1個含726個氨基酸的VP5蛋白，該蛋白屬于呼腸孤病毒微管相關蛋白Mu-2超家族。GCRV-AH528 M5與其他呼腸孤病毒相似節(jié)段的核苷酸、氨基酸同源性分別為33.5%~97.5%、18.8%~98.3%。

GCRV-AH528 M6節(jié)段全長2028 bp，編碼1個含650個氨基酸的VP4蛋白，屬于呼腸孤病毒主要結構蛋白位于Asn 42和Pro 43。GCRV-AH528 M6與其他呼腸孤病毒相似節(jié)段的核苷酸、氨基酸同源性分別為28.7%~96.6%、20.6%~98.1% (表2和表3)。

2.5 S組節(jié)段核苷酸序列分析及編碼的蛋白功能預測

GCRV-AH528 S7節(jié)段全長1604 bp，編碼1個含512個氨基酸的VP56蛋白，該蛋白與水生呼腸孤病毒無同源性蛋白，但與哺乳動物呼腸孤病毒(MRV) Sigma 1和人腺病毒(Human adenovirus)fiber具有同源性。

GCRV-AH528 S8和S11節(jié)段分別編碼VP41(361個氨基酸)和VP35(310個氨基酸)蛋白，2個蛋白與其他呼腸孤病毒無同源性蛋白。

GCRV-AH528 S9節(jié)段全長1320 bp，編碼1個含418個氨基酸的VP6蛋白，該蛋白屬于呼腸孤病毒科Sigma1/Sigma2超家族。GCRV-AH528 S9與其他呼腸孤病毒相似節(jié)段的核苷酸、氨基酸同源性分別在33.9%~97.4%、19.4%~98.1%。

GCRV-AH528 S10節(jié)段全長1124 bp，編碼1個含345個氨基酸的NS38蛋白，該蛋白有1個保守的結構域，屬于PolyG-pol超家族，具有poly(C)依賴的poly(G)聚合酶活性。GCRV-AH528 S10與ARV sigma NS的核苷酸、氨基酸同源性分別為42.6%、17.9% (表2和表3)。

2.6 GCRV-AH528與其他呼腸孤病毒典型株基因組特征比較

水生呼腸孤病毒有11個節(jié)段，而正呼腸孤病毒僅有10個節(jié)段，2個屬的病毒編碼7個同源性蛋白，同源蛋白平均相似度為24.3%~98.3%(表3)。進一步分析顯示，2個屬的病毒5￠末端序列相差較大，但3￠末端序列較保守，存在共同的序列UCAUC-3￠(表4)。

表4 呼腸孤病毒保守末端序列比較

Tab.4 Comparison of conserved terminal nucleotide sequences

2.7 GCRV-AH528系統(tǒng)進化分析

在GenBank數據庫中搜索與GCRV-AH528 VP1蛋白具有同源性的序列，構建系統(tǒng)進化樹(圖2)。研究結果表明，VP1同源性蛋白至少分布于2個屬，分別為水生呼腸孤病毒屬和正呼腸孤病毒屬。GCRV- AH528株與水生呼腸孤病毒聚為一簇，為草魚呼腸孤病毒Ⅱ型株中的1個成員。

3 討論

3.1 草魚出血病流行病學特征

近年來，草魚的高密度養(yǎng)殖造成其病害頻發(fā)，細菌、寄生蟲等引起的疾病較易控制，但由GCRV引起的草魚出血病較難治療。草魚出血病疫情主要有以下流行病學特征：發(fā)病魚主要為1~2齡草魚，5~11月均有發(fā)病，同一漁場內的魚塘相互感染，發(fā)病時呈急性大規(guī)模死亡，2~3 d內可死亡養(yǎng)殖草魚總量的30%左右。水質較差的魚塘還容易造成多種病原菌的繼發(fā)感染，從而加重疫情，如出現爛鰓、赤皮、腸炎等。調查還發(fā)現，季節(jié)交替階段、晝夜溫差大的氣候天氣，特別是大雨后水溫在回溫過程中，病害較易發(fā)生。從攻毒實驗可以看出，本研究獲得的病毒使當年草魚種出現典型的出血病癥狀，可見GCRV-AH528具有極強的致病性。以VP1蛋白為基礎構建系統(tǒng)進化樹，GCRV-AH528株與水生呼腸孤病毒聚為一簇，進一步聚類于GCRV-Ⅱ型株，與GCRV-I型(GCRV-873)、GCRV-Ⅲ型(GCRV104)在內的其他水生呼腸孤病毒屬于不同的分支，距離較遠。GCRV-AH528株與GCRV-873株、GCRV104株存在較大差異，卻與近來發(fā)現的浙江湖州地區(qū)的HZ08株、湖北省的GCRV-109株具有極高的同源性(Pei, 2014)，這不僅證明了草魚呼腸孤病毒基因組的多樣性分布，還從一定程度上說明GCRV-Ⅱ型株是近年來的主要流行毒株。

3.2 呼腸孤病毒基因多樣性分析

圖2 基于VP1構建的系統(tǒng)進化樹

呼腸孤病毒末端結構在病毒組裝與功能識別方面發(fā)揮極其重要的作用，也是鑒別呼腸孤病毒的重要依據。GCRV相同基因型的毒株其末端特征基本一致，但不同基因型的毒株之間存在個別堿基的差別(Fan, 2013; 柯麗華等, 1990; 張超等, 2010)。GCRV-AH528基因組在5￠和3￠末端含有特異的保守序列和短的節(jié)段特異的顛倒互補序列。Anzola等(1987)推測末端保守序列是病毒基因組的信號區(qū)域，而顛倒互補序列為病毒基因組某一節(jié)段的信號序列。與其他Ⅱ型GCRV相比，本實驗室分離的GCRV- AH528毒株L1節(jié)段編碼區(qū)在701~702位置缺少3個核苷酸，少編碼1個氨基酸；M4節(jié)段在253~255、2174~2176位置均出現終止密碼子UAG，因此，M4節(jié)段存在2個開放閱讀框，編碼2個蛋白。研究結果充分說明，在進化過程中，GCRV毒株在一定程度上發(fā)生堿基的缺失或突變，導致核苷酸編碼區(qū)發(fā)生變化，編碼的蛋白發(fā)生差異，可見，GCRV存在較強的變異性。

不同類型、不同來源的呼腸孤病毒，其基因組序列、功能蛋白序列存在一定程度的差異。水生呼腸孤病毒均含有11個節(jié)段，而正呼腸孤病毒僅含有10個節(jié)段，這2個屬的病毒基因組各個節(jié)段分子量有較大差異，但基因組總分子量相差不大(曾令兵等, 1991)。另對這2個屬病毒編碼的蛋白分析表明，它們之間僅7種蛋白存在同源性，可見呼腸孤病毒不同屬之間存在一定的差異。序列相似度分析表明，GCRV-AH528與正呼腸孤病毒核苷酸、氨基酸的同源性低于水生呼腸孤病毒。但進一步研究發(fā)現，GCRV-AH528與GCRV-I型(GCRV-873)、GCRV-Ⅲ型(GCRV104)僅存在7種同源性蛋白，卻與MRV、ARV存在8種同源性蛋白。GCRV-AH528 S7、S10節(jié)段編碼的VP56、NS38蛋白與水生呼腸孤病毒無同源性蛋白，但分別與MRV Sigma 1蛋白、ARV sigma NS蛋白存在同源性序列，暗示GCRV-AH528在進化上比GCRV-873更趨于正呼腸孤病毒。

4 結論

本研究從分子生物學角度對GCRV-AH528新毒株進行鑒定，為安徽合肥地區(qū)草魚出血病的防治提供了理論依據，同時，為免疫工作的開展提供了基礎性的參考資料。在實際生產中應及早對該病病原進行檢測，盡早預防和治療。

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Genomic Characterization and Phylogenetic Analysis of Grass Carp Reovirus AH528 Strain

WU Minglin, LI Haiyang, JIANG He, HE Jixiang①, HOU Guanjun, JIANG Yangyang

(Fisheries Research Institute, Anhui Academy of Agricultural Sciences, Hefei 230031)

Grass carp haemorrhage is anepidemicdisease, which is caused by grass carp reovirus (GCRV). Grass carp fingerlings and yearlings are vulnerable to GCRV. A virulent reovirus, tentatively named GCRV-AH528, was isolated from a diseased grass carp exhibiting typical hemorrhage symptoms in Hefei, Anhui Province. Intraperitoneal injection with the virus suspension led to hemorrhage similar to the observed clinical symptoms of blackened dorsum and hemorrhage around the mouth cavity, gill, intestine, belly, and base of the fin ray. The GCRV-AH528 genome contained 11 double-stranded RNA segments ranging from 1027 to 3925 bp, and its averagecontent of AT and GC was 50.2% and 49.8%, respectively. Compared with registered GCRV Ⅱstrains, the GCRV-AH528 L1 segment had lost three continuous nucleotides (TAT) at nt 701~702, leading to the loss of a tyrosine, and the M4 segment mutated two ORFs encoding two non-structural proteins (NS9 and NS69). All segments had 6 bp-conserved terminal nucleotides 5'-GUAAU/CU???UU/GCAUC-3'. Except for the L1 and M6 segments,the two ends inthe coding region of the other nine segments existed at 5~9 bp short specific inverted complementary sequences. GCRV-AH528 showed 37.1%~98.1% nucleotide and 24.3%~98.3% AA sequence identities with other reovirus. A phylogenetic tree based on VP1 protein revealed that GCRV-AH528 clustered with members of the genus Aquareovirus and was far from GCRV-873. These results indicated that the GCRV-AH528 isolate was a new GCRV Ⅱtype virulent strain.

Grass carp haemorrhage disease;Grass carp reovirus; VP1 protein; Aquareovirus

* 安徽省農業(yè)科學院學科建設項目(17A0515)、現代農業(yè)產業(yè)技術體系(CARS-46)、國家星火計劃項目(2015GA710004)和安徽省農業(yè)科學院科技創(chuàng)新團隊(13C0506)共同資助 [This work was supported by the Subjects Construction Fund of Anhui Academy of Agricultural Sciences (17A0515), the Earmarked Fund for China Agriculture Research System (CARS-46), China SparkProgram (2015GA710004), and the Scientific and Technological Innovation Fund of Anhui Academy of Agricultural Sciences (13C0506)]. 吳明林, E-mail: flyinghu2017@qq.com

何吉祥，副研究員，E-mail: flyinghu2008@foxmail.com

HE Jixiang, E-mail: flyinghu2008@foxmail.com

2017-07-12,

2017-07-27

10.19663/j.issn2095-9869.20170712001

吳明林, 李海洋, 江河, 何吉祥, 侯冠軍, 蔣陽陽. 草魚呼腸孤病毒AH528株全基因組特征及進化分析. 漁業(yè)科學進展, 2018, 39(5): 36–43Wu ML, Li HY, Jiang H, He JX, Hou GJ, Jiang YY. Genomic characterization and phylogenetic analysis of grass carp reovirus AH528 strain. Progress in Fishery Sciences, 2018, 39(5): 36–43

S941

A

2095-9869(2018)05-0036-08

(編輯 馮小花)