劉星，李曉娜，劉翠玲，黃金龍，黃衛(wèi)鋒

（三峽大學(xué)醫(yī)學(xué)院感染與損傷研究所，湖北宜昌 443002）

對乙酰氨基酚（acetaminophen，APAP）是臨床常用的解熱鎮(zhèn)痛類非處方藥，在正常劑量使用APAP時(shí)具有很好的治療效果，然而長期或過劑量服用APAP則會導(dǎo)致嚴(yán)重的肝損傷[1]。在西方國家，APAP過量已成為引發(fā)急性肝功能衰竭最主要的原因[2]，在美國每年因APA過量引起的死亡人數(shù)就多達(dá)500人[3]。我國目前也有過量服用APAP致死的病例報(bào)道，APAP誘導(dǎo)的急性肝損傷已經(jīng)成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。然而引起肝損傷的發(fā)病機(jī)制尚未闡明，有研究報(bào)道氧化應(yīng)激在參與其中，核因子E2相關(guān)因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor，Nrf2）作為一種重要的轉(zhuǎn)錄，其與抗氧化應(yīng)答元件（antioxidant response element，ARE）相互作用可調(diào)控下游抗氧化酶和Ⅱ相代謝酶的表達(dá)，促使細(xì)胞增強(qiáng)清除活性氧自由基的能力，從而降低細(xì)胞、組織、器官等因氧化應(yīng)激帶來的損傷[4]。因此，抑制氧化應(yīng)激可改善APAP引起的肝損傷。香葉木素（Diosmetin，Dios）是一種黃酮類化合物的主要活性成分，在各種食物來源中均有應(yīng)用，包括牛至，柑橘類水果，也可以從某些藥草中提取，如玫瑰花科，菊花菊科和石竹花[5]，黃酮類化合物被認(rèn)為與多種有益的作用相關(guān)，包括抗氧化活性[6]，它能保護(hù)組織免受氧化應(yīng)激和相關(guān)病理炎癥[7]，具有抗氧化、抗菌、抗炎癥、抗過敏、抗腫瘤以及植物雌激素作用等多種藥理活性。前期我們的研究表明香葉木素通過激活 Nrf2信號通路預(yù)防腎缺血再灌注引起腎臟的氧化應(yīng)激[8]。但香葉木素能否通過抗氧化應(yīng)激對APAP引起的肝損傷起保護(hù)作用，目前尚無相關(guān)研究。故本研究旨在探討香葉木素對預(yù)防APAP引起肝損傷的保護(hù)性作用，并探討這一保護(hù)性作用是否與Nrf2/ARE信號通路有關(guān)，為進(jìn)一步研究治療APAP誘發(fā)急性肝損傷的新型藥物提供理論思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞與動(dòng)物

人非腫瘤肝細(xì)胞LO2由中國上海中科院提供。雄性C57BL/6J小鼠，6～8周齡，體質(zhì)量18～22 g，由三峽大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用經(jīng)中國三峽大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會批準(zhǔn)（許可證編號：2017090D），動(dòng)物分籠飼養(yǎng)于溫度：20 ℃～22 ℃，相對濕度：40%～50%，12 h晝夜交替的三峽大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心的SPF級動(dòng)物房中，自由飲水和進(jìn)食，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為4組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 藥物與試劑

香葉木素(純度＞98%)、對乙酰氨基酚（化學(xué)純，含量≥98%）、MTT均購自美國Sigma-AIdrich公司；蘇木精-蘇紅染液（HE）由上海碧云天生物技術(shù)有限公司提供；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙二醛（MDA）及谷胱甘肽（GSH）試劑盒，購自中國南京建成生物工程有限公司；多克隆兔抗Nrf2 抗體（1：1500）、兔抗 β-actin 抗體(1：8000)購自Santa Cruz公司；HRP標(biāo)記的二抗(1：5000)、BCA蛋白質(zhì)測定試劑盒、超敏型化學(xué)發(fā)光底物試劑盒均購自美國Pierce公司；醫(yī)用X射線膠片由銳珂（廈門）醫(yī)療器材有限公司提供；Trizol試劑購自Invitrogen公司；RNA逆轉(zhuǎn)錄酶購自中國Toyobo公司；引物序列由生工生物科技公司設(shè)計(jì)合成；其他試劑為分析純。

1.3 儀器

電子分析天平，北京賽多斯儀器系統(tǒng)有限公司；高速冷凍離心機(jī)，Sigma公司；SZ-93A自動(dòng)雙重純水蒸餾器，上海亞榮生化儀器廠；CO2培養(yǎng)箱，SHELLAB公司；超凈工作臺，蘇州蘇云凈化設(shè)備有限公司；水平搖床和DYY-6C型電泳儀，北京市六一儀器廠；全波長酶標(biāo)儀，Thermo Electron公司；核酸檢測儀，Thermo SCIENTFIC公司；PCR擴(kuò)增儀，ABI公司；Real Time PCR儀，Whatman Biometra公司；TP 1020型脫水機(jī)、ULTRACUTR型超薄切片機(jī)、石蠟包埋機(jī)、圖像分析儀，Leica公司；CS-V1型攤片烤片機(jī)，孝感市宏業(yè)醫(yī)用儀器有限公司；光學(xué)顯微鏡，Olympus公司。

1.4 方法

1.4.1 藥物配制

稱取Dios，溶解于含有濃度為2%二甲基亞砜的0.9%氯化鈉溶液配制成 1 mg/mL濃度的藥物；稱取APAP溶于0.9%氯化鈉溶液配制成300 mg/kg濃度藥物。

1.4.2 細(xì)胞分組及處理

人非腫瘤肝細(xì)胞 LO2由中國上海中科院提供，LO2細(xì)胞用含有10% FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)箱環(huán)境為溫度為5% CO2、37 ℃的恒溫進(jìn)行培養(yǎng)。開始細(xì)胞培養(yǎng)的處理分為空白對照組，不同濃度的Dios無血清培養(yǎng)基代替舊培養(yǎng)基（15，30 μM）6 h。然后，將細(xì)胞進(jìn)一步加入APAP 10 mM再溫育24 h。收集的細(xì)胞用PBS洗滌兩次，用于細(xì)胞活力和GSH分析。

1.4.3 動(dòng)物分組及處理

購買雄性SPF級C57BL/6J小鼠40只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分成4組，即對照組、APAP組、Dios 30 mg/kg和Dios 60 mg/kg給藥組，每組10只，各組灌胃給藥，對照組和模型組灌胃給予等量生理鹽水，Dios組每日分別給藥1次，連續(xù)給藥7 d。給藥第6 d，模型組與Dios組小鼠腹腔注射給予溶解在0.9%氯化鈉中的APAP 300 mg/kg，對照組腹腔注射給予等量0.9%氯化鈉，24 h后小鼠眼球取血，血液室溫凝結(jié)1 h后4 ℃離心（4000 r/min，15 min），留取上清供血清指標(biāo)ALT和AST檢測。切取一部分肝臟組織溶于0.9%氯化鈉中制成肝勻漿用于檢測GSH和MDA水平，取相同部位的肝組織固定在 4%多聚甲醛中，用于肝組織切片觀察病理變化，其余部分立即凍存在-80 ℃冰箱。

1.4.4 MTT測定法測定細(xì)胞活力

每孔加入20 μL的MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入150 μL二甲基亞砜，置搖床低速振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解，用酶標(biāo)儀OD490nm處測量各孔的吸光（A），重復(fù)3次。細(xì)胞存活率(%)=(Dios組 A490nm-空白對照組A490nm)/(細(xì)胞對照組 A490nm-空白對照組A490nm)×100%。用 GraphPad Prism5軟件進(jìn)行分析處理，吸光強(qiáng)度反映細(xì)胞生長狀況。

1.4.5 LO2細(xì)胞GSH含量檢測

將LO2細(xì)胞在1 mL PBS含有1 mM EDTA（pH 7.5）勻漿，取上清液（4 ℃，10000 r/min，10 min）。采用南京建成生物有限公司提供的 GSH定量試劑盒按照說明書測量GSH含量。

1.4.6 氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測

取凍存的肝臟組織，制備組織勻漿，取上清液，采用二硫代硝基苯法和硫代巴比妥法試劑盒測定GSH和MDA含量，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.4.7 血清生化指標(biāo)檢測

將從小鼠獲得的血液置于室溫下1 h凝固，4 ℃離心（4000 r/min，15 min）收集血清。采用南京建成生物有限公司提供的試劑盒說明書，采用微板法檢測血清中ALT和AST肝功能活性水平。

1.4.8 HE染色檢測肝組織病變

將肝臟組織用 4%多聚甲醛液浸泡固定過夜，常規(guī)脫水、包埋、切片，按HE染色步驟進(jìn)行染色，中性樹膠封片，光鏡下觀察肝組織切片的病理學(xué)改變，并在相同設(shè)置下不同視野隨機(jī)拍照取圖。

1.4.9 Western Blot印跡法檢測Nrf2蛋白表達(dá)

稱取0.2 g肝組織于1.5 mL EP管剪碎后用RIPA裂解緩沖液制備小鼠肝裂解物，勻漿、離心后取上清。蛋白濃度用BCA試劑盒測定。制備SDS-PAGE電泳分離蛋白后，通過濕轉(zhuǎn)法將蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，并用5%的脫脂牛奶封閉1 h，4 ℃冰箱孵育一抗過夜，室溫孵育二抗1 h左右，暗室發(fā)光后顯影和定影，將蛋白表達(dá)于膠片，掃描儀掃描膠片。Image-Pro Plus6.0灰度掃描、GraphPad Prism5軟件進(jìn)行分析處理。

1.4.10 RT-PCR法檢測基因表達(dá)變化

小鼠肝臟Nqo1、G6pdx、SOD2 mRNA表達(dá)情況。Trizol法提取RNA，核酸檢測儀測定RNA濃度及純度后逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。具體引物信息：Nqo1上游引物序列：5’-GGGACATGAACGTCATTCTCTG-3’，下游引物序列 5’-GGTCTCCTCCCAGACGGTTT-3’G6pdx上 游 引 物 序 列 5’-GCTGCACAAGATTGATCGA GAA-3’， 下 游 引 物 序 5’-GGTACCCTCGTACTG GAAGCC-3’，SOD2 上游引物序列 5’-GCAAGG TCGCTTACAGATTGC-3’，下游引物序列 5’-GCTT TCAGATAGTCAGGTCTGACG-3’，18S rRNA 上游引物序列為5’-GGTCATAAGCTTGCGTTGATTAAG-3’，下 游 引 物 為 5’-CTACGGAAACCTTGTTACGA CTTT-3’。擴(kuò)增體系為20 μL，配置96孔板封條、離心后放置于ABI PRISMx 7000熒光定量PCR儀進(jìn)行Real-Time PCR，18S rRNA為內(nèi)參基因，精確定量目的基因的mRNA表達(dá)水平。

1.4.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用GraphPad Prism 5和Image-Pro Plus軟件處理并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果均采用（±s）形式表示，各組均數(shù)之間比較用單因素方差分析，p＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與討論

2.1 香葉木素對LO2細(xì)胞活力及GSH的影響

圖1 不同濃度的香葉木素（15, 30 μM）對APAP致LO2細(xì)胞活力及GSH含量的影響Fig.1 Effects of Dios on cell viability in LO2 with 10 mM APAP exposure

肝細(xì)胞中谷胱甘肽的濃度非常高，在肝臟代謝外援物質(zhì)過程中發(fā)揮主導(dǎo)作用。因此，如圖1所示，與正常對照組相比，APAP組LO2細(xì)胞活力明顯降低，與APAP組比較，Dios預(yù)處理組的細(xì)胞活力顯著升高（##，p＜0.01），與正常對照組相比，APAP組LO2細(xì)胞 GSH 含量明顯降低至 4.45±1.21 μmol/mg（***，p＜0.001）。與APAP組比較，Dios預(yù)處理組LO2細(xì)胞GSH 含量也顯著提高至 12.33±1.47和 21.65±2.91 μmol/mg（##，p＜0.01），因此 Dios預(yù)處理組可以保護(hù)APAP誘發(fā)的肝損傷且部分是通過保護(hù)自由基細(xì)胞免受APAP誘導(dǎo)的肝毒性。

2.2 香葉木素對小鼠血清指標(biāo)的影響

圖2 香葉木素對APAP致急性肝損傷小鼠血清中AST和ALT水平的影響Fig.2 Effects of Dios on serum ALT and AST levels of acute liver-injury mice induced by APAP (±s, n=10)

AST和ALT是檢測肝功能的最重要、最敏感的指標(biāo)，其活性的高低反映了肝臟受損的程度[9]。當(dāng)肝細(xì)胞受到損傷時(shí)，這些標(biāo)記物會從肝臟滲漏到血液中，從而導(dǎo)致二者血清濃度急劇升高。正常狀態(tài)下ALT和AST存在于肝細(xì)胞漿中，而高劑量APAP引起的肝細(xì)胞損傷導(dǎo)致ALT和AST釋放到細(xì)胞外間隙，因此ALT和 AST是評估肝細(xì)胞損傷程度的一個(gè)有效的定量標(biāo)記[10]。如圖2所示，與正常對照組比較，APAP組血清中ALT和AST水平顯著升高至975.6±207.8 IU/L和1543.7±224.6 IU/L(***，p＜0.001)，說明小鼠急性肝損傷模型制備成功；Dios 30 mg/kg和60 mg/kg組的血清ALT和AST水平明顯低于APAP組194.2±129.1 IU/L 和 46.9±310.4 IU/L(###，p＜0.001)，且存在一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。說明Dios可以降低急性肝損傷的轉(zhuǎn)氨酶活性，具有較好的保護(hù)肝臟受損的作用。

2.3 香葉木素對小鼠肝臟中GSH和MDA的影響

圖3 香葉木素對APAP致急性肝損傷小鼠肝勻漿中GSH和MDA水平的影響Fig.3 Effects of Dios on Liver GSH and MDA levels of acute liver-injury mice induced by APAP (±s, n=10)

GSH主要在肝臟中產(chǎn)生[11]，當(dāng)APAP過量時(shí)，過多的NAPQI的產(chǎn)生會耗盡GSH，而GSH的耗竭會影響肝臟的正常功能。MDA是一種很好的脂質(zhì)過氧化程度的生物標(biāo)志物，其含量高低可反映機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度[12]。如圖3所示，APAP組小鼠肝組織勻漿中 GSH水平明顯低于正常對照組顯著降低 5.54±0.89 μmol/mg（***，p＜0.001），而Dios組抑制了GSH水平的降低，且Dios 60 mg/kg組明顯升高了 GSH 含量 6.94±0.72 和 8.95±0.86 μmol/mg（##，p＜0.01）。與正常對照組比較，APAP組的MDA含量明顯升高至1.91±0.27 nmol/mg（***，p＜0.001），Dios 30 mg/kg和60 mg/kg組較APAP組明顯降低，分別下降至 1.04±0.16 和 0.55±0.14 nmol/mg（###，p ＜0.001）。以上數(shù)據(jù)說明 Dios能夠提高肝組織抗氧化能力以及減輕APAP對肝細(xì)胞產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化作用。

2.4 香葉木素對小鼠肝組織病理變化影響

圖4 香葉木素對APAP致急性肝損傷小鼠肝組織病理變化的影響（×100）Fig.4 Effects of Dios on liver tissue pathological changes of acute liver-injury mice induced by APAP(×100)

肝臟組織病理學(xué)檢查被認(rèn)為是判斷肝臟損傷的金標(biāo)準(zhǔn)，肉眼觀察正常對照組小鼠肝臟顏色暗紅，組織緊實(shí)富有彈性；模型組肝臟組織顏色呈紅褐色，表面出現(xiàn)可見白色顆粒。Dios組大體病變減輕，且隨著劑量增大減輕更為明顯。顯微鏡下觀察對照組病理切片，如圖4所示，正常對照組小鼠肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈放射狀整齊排列，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，未見明顯病理改變（見圖 4a）；模型組肝臟組織切片顯示中央靜脈周圍的肝小葉中心壞死，肝細(xì)胞出現(xiàn)明顯的腫脹變性，匯管區(qū)及間質(zhì)有大量炎性細(xì)胞浸潤，細(xì)胞邊界氣球樣變性減少（見圖4b）；Dios 30 mg/kg組細(xì)胞壞死顯著減輕，炎性細(xì)胞浸潤減輕（見圖4c）。Dios 60 mg/kg組細(xì)胞壞死顯著減輕，肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常，匯管區(qū)炎性細(xì)潤浸潤較少，肝索整齊（見圖 4d）。肝細(xì)胞損傷面積如圖所示，與對照組相比，APAP組損傷面積高達(dá)39.55±3.45%（***，p＜0.001），與APAP 組相比，Dios 30 mg/kg和60 mg/kg組肝細(xì)胞損傷面積明顯降低 20.45±1.33%和10.45±2.75%（###，p＜0.001）。因此，Dios組明顯緩解肝組織損傷均有一定的作用。

2.5 香葉木素對小鼠肝組織 Nrf2蛋白表達(dá)的影響

圖5 香葉木素對APAP致急性肝損傷小鼠肝組織中Nrf2蛋白表達(dá)的影響Fig.5 Effects of Dios on protein expression of Nrf2 in liver of acute liver-injury mice induced by APAP

核因子 Nrf2是激活抗氧化防御系統(tǒng)必不可少的轉(zhuǎn)錄因子，其通過與 ARE相互作用調(diào)節(jié)編碼抗氧化蛋白，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最為重要的內(nèi)源性抗氧化應(yīng)激通路[13]。生理狀態(tài)下，Nrf2在細(xì)胞質(zhì)中與它的抑制蛋白果蠅肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Kelch樣ECH相關(guān)蛋白1( Kelch-like ECH-associated protein 1，Keap1)結(jié)合，無法進(jìn)入到細(xì)胞核中發(fā)揮轉(zhuǎn)錄活性[14]。當(dāng)受到 ROS等刺激時(shí)，Keap1與Nrf2解偶聯(lián)使得Nrf2轉(zhuǎn)位入核，與Maf蛋白結(jié)合成異質(zhì)二聚體后與ARE結(jié)合，激活下游靶基因如NQO1、G6pdx、SOD2等表達(dá)，從而發(fā)揮抗氧化損傷作用[15]。如圖5所示，Western blot法檢測肝組織 Nrf2蛋白表達(dá)水平，與正常對照組相比，APAP組Nrf2表達(dá)增加5.61倍(***，p＜0.001)，Dios低劑量組Nrf2表達(dá)水平與APAP組無明顯差異，而Dios高劑量組核內(nèi)Nrf2表達(dá)水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(#，p＜0.05)。

2.6 香葉木素對小鼠肝組織NQO1、G6pdX、SOD2 mRNA水平的影響

圖6 香葉木素對APAP致急性肝損傷小鼠肝組織中NQO1、mG6pdX、SOD2 mRNA表達(dá)的影響Fig.6 Effects of Dios on mRNA expression of mNQO1, G6pdx,SOD2 in liver of acute liver-injury mice induced by APAP

氧化應(yīng)激是 APAP誘發(fā)急性肝損傷最重要的發(fā)病機(jī)制之一，其中氧自由基對APAP引起的急性肝損傷的發(fā)生起著重要作用，NQO1、G6pdx、SOD2都是重要的抗氧化轉(zhuǎn)錄因子，有報(bào)道m(xù)NQO1、mG6pdx、mSOD2都是Nrf2的直接轉(zhuǎn)錄靶標(biāo)。如圖6所示，實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示，APAP組NQO1、G6pdX、SOD2表達(dá)水平比正常對照組升高(*，p＜0.05)；Dios低劑量組相比于APAP組略有上調(diào)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與APAP組相比，Dios高劑量組NQO1、G6pdX、SOD2的表達(dá)水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(#，p＜0.05)。這些結(jié)果提供了有力的證據(jù)支持香葉木素介導(dǎo)的抗氧化基因上調(diào)可歸因于Nrf2表達(dá)增強(qiáng)。

3 結(jié)論

3.1 急性肝損傷是多種肝臟疾病發(fā)生、發(fā)展及最終導(dǎo)致肝功能衰竭的始動(dòng)環(huán)節(jié)和共同途徑，目前對急性肝損傷的治療仍是一個(gè)全球性的問題。建立APAP誘發(fā)的小鼠急性肝損傷模型是研究藥物護(hù)肝活性的經(jīng)典方法，為深入研究急性肝損傷的發(fā)生機(jī)制，開發(fā)新的安全高效藥物奠定基礎(chǔ)。香葉木素是一種黃酮類化合物的主要活性成分，此類物質(zhì)具有抗活性氧自由基、抗感染、抗炎癥、抗過敏、抗腫瘤以及植物雌激素作用等多種藥理活性。楊陽等[16]研究發(fā)現(xiàn)香葉木素可抑制肝癌HepG2細(xì)胞的活力、促進(jìn)細(xì)胞凋亡、促使肝癌細(xì)胞 HepG2細(xì)胞的生長阻滯。Yang[17]研究發(fā)現(xiàn)香葉木素通過抗氧化、抑制NF-κB信號傳導(dǎo)、抑制炎癥介質(zhì)，對內(nèi)毒素引起的小鼠急性肝衰竭具有保護(hù)作用。Wang等[18]報(bào)道通過香葉木素激活Nrf2/NQO1-HO-1信號通路對抗氧化應(yīng)激保護(hù)H2O2誘導(dǎo)的LO2細(xì)胞氧化損傷。然而，香葉木素能否通過抗氧化應(yīng)激對APAP引起的肝損傷起保護(hù)作用尚未被研究。本研究第一次表明，在體外和體內(nèi)已證明顯著抑制APAP誘導(dǎo)的肝毒性，香葉木素預(yù)處理具有潛在的肝臟保護(hù)作用。

3.2 現(xiàn)有研究表明氧化應(yīng)激在APAP誘導(dǎo)的肝細(xì)胞毒性中起關(guān)鍵作用[19]，毒性主要由NAPQI（APAP的活性代謝物）與 GSH的巰基結(jié)合，其他細(xì)胞蛋白（如線粒體蛋白）及其隨后的氧化的共價(jià)結(jié)合介導(dǎo)。過度生成肝細(xì)胞中的自由基可能引發(fā)脂質(zhì)過氧化，損害線粒體呼吸，并干擾鈣穩(wěn)態(tài)，從而誘導(dǎo)肝細(xì)胞死亡和肝功能衰竭[20]。我們目前的實(shí)驗(yàn)研究表明，與APAP組相比，香葉木素能通過降低小鼠血清中ALT、AST水平，增加肝細(xì)胞谷胱甘肽 GSH的含量，減少脂質(zhì)過氧化物MDA的生成，小鼠肝組織H & E染色顯微鏡觀察結(jié)果顯示，香葉木素可以在一定程度上抑制了小鼠肝臟組織壞死，保護(hù)了小鼠肝細(xì)胞的完整性，對肝臟起到保護(hù)作用。而香葉木素中所含黃酮類化合物具有抑制自由基的生成，降低脂質(zhì)過氧化和刺激抗氧化酶的作用，香葉木素可以清除機(jī)體內(nèi)的氧自由基和過氧化物，具有良好的抗氧化能力，進(jìn)而顯著改善小鼠的肝損傷。香葉木素通過上調(diào)肝組織Nrf2的表達(dá)，誘導(dǎo)下游靶基因NQO1、G6pdx、SOD2的表達(dá)，提高組織內(nèi)GSH的含量，清除ROS，增強(qiáng)抗氧化損傷的能力。

3.3 綜上所述，香葉木素具有抗氧化、明顯減輕APAP引起的急性肝損傷，抑制急性肝損傷的發(fā)生與發(fā)展，具有預(yù)防性保護(hù)作用，其可能機(jī)制是通過激活Nrf2/ARE信號通路，增加下游NQO1、G6pdx、SOD2的表達(dá)，提高組織內(nèi)GSH含量，促進(jìn)ROS的清除，減輕肝臟組織脂質(zhì)過氧化，從而對APAP引起的肝損傷起保護(hù)作用。