北京北大維信生物科技有限公司（100094）石海清 周守岫 王曉峰

《中國藥典》2015年版四部規(guī)定洛伐他汀含量測定（高效液相色譜法）的測定方法，適用于本公司紅曲的洛伐他汀含量測定，此產品的含量測定前，樣品使用超聲波樣品處理方法進行處理；用使用因子（影響樣品處理質量的過程變量：溫度、超聲水位、樣品裝載量、樣品）設計試驗，對紅曲樣品洛伐他汀含量測定中在超聲水槽中的位置進行調查，確定影響樣品處理的因素，并通過驗證確定該方法中超聲波樣品處理的影響因素和最佳條件，以保證樣品處理方法用于洛伐他汀含量測定時，能夠有效地控制上樣前樣品的質量，從而確定本公司實驗室的樣品處理的影響因素及樣品處理的最佳條件。

1 風險評估

1.1 為了保證本實驗室紅曲樣品洛伐他汀含量測定（高效液相色譜法）超聲波處理方法的處理質量，規(guī)避或將風險控制在可接受范圍內，進行風險評估。紅曲樣品處理方法為超聲處理1小時。

1.2 以風險得分RPN為評估原則。使用FMEA法進行風險評價的原則，以風險得分RPN為評估依據。RPN由可能性得分、嚴重性得分、可檢測性得分相乘得到，即：風險得分RPN=可能性得分×嚴重性得分×可檢測性得分。風險得分（RPN）分值越高，風險越大；分值越低，風險越小。風險按高低分為：高級風險H：風險得分12～27，此風險必須降低。中級風險M：風險得分8～9，此風險必須降低至盡可能低。低級風險L：風險得分3～6，此風險必須降低至盡可能低。微小風險S：風險得分1～2，通?？梢越邮艿娘L險。見附表1。

通過風險分析，需對該方法進行方法學驗證。通過系統(tǒng)地調查影響樣品處理質量的過程變量，確定影響樣品處理質量的過程條件，有針對性地進行設備改進，并將樣品處理條件實現最優(yōu)化，以增強樣品處理的的可靠性、質量和重現性。

2 儀器設備、試驗用具和試劑試液

儀器設備：高效液相色譜儀、超聲波清洗器、電子天平、離心機。試驗用具：移液管、容量瓶。試劑試液：洛伐他汀對照品、甲醇、中性氧化鋁。

3 對照品與供試品制備

3.1 對照品溶液的制備 精密稱取洛伐他汀對照品10mg，置50ml量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含洛伐他汀40μg）。對照品溶液需制備2份平行溶液。

3.2 供試品溶液的制備 取供試品，混勻，研細，精密稱定，紅曲1.0g，置15ml具塞離心管中，精密加75%乙醇10ml，密塞，搖勻，稱定重量，超聲處理（60分鐘，功率250W，頻率28kHz）取出，放冷，再稱定重量，用75%乙醇補充減失的重量（減失重量小于0.05g不需要補重），搖勻，離心（10分鐘，2000轉/分鐘）。精密量取上清液3ml，置25ml量瓶中定容，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.3 測定 對照品溶液與供試品溶液進樣量均為10μl，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。

3.4 計算公式 計算公式1：對照品響應因子F=Cr /Ar；計算公式2：對照品平均響應因子；計算公式3：對照品響應因子的相對偏差；計算公式4：含量Cx=(供試品峰面積Ax×/稱樣量m)×10×25/3000。

4 驗證過程

4.1 紅曲樣品洛伐他汀含量測定 測定方法：使用一般全因子設計（1/2）對紅曲樣品洛伐他汀含量測定中影響樣品處理質量的過程變量：溫度、超聲水位、樣品裝載量、樣品在超聲水槽中的位置進行調查，每種過程變量使用2～3個設置條件，由此形成正交實驗表。按實驗表列明的條件進行同一個紅曲樣品處理并進行洛伐他汀含量測定，測定結果使用MINITAB（版本17）進行方差分析，確定影響樣品處理質量的過程條件。樣品洛伐他汀含量測定結果見附表2。

4.2 結果處理方法與數據分析標準

4.2.1 結果處理 對洛伐他汀含量測定結果使用MINITAB（版本17）進行方差分析，以對樣品處理條件中對結果影響顯著的條件應進行篩選。篩選出結果影響顯著的因子進一步篩選條件。篩選出結果影響顯著的連續(xù)因子條件作為因子進行一般全因子設計（2個重復），利用響應優(yōu)化挑選洛伐他汀含量測定結果最高的一組條件相應水平作為相應樣品的最佳樣品處理條件。

4.2.2 結論及判定 符合“結果處理”中優(yōu)選條件的樣品處理方法建議作為樣品處理條件?！敖Y果處理”中與優(yōu)選條件的洛伐他汀含量均值相差2.0%之內的條件對樣品測定影響很小，亦可判定為符合要求的樣品處理條件。如上述2項均不能篩選出滿足的樣品處理條件，應改變影響因素的種類和水平重新驗證。

4.2.3 數據分析 對方案形成的正交實驗表，測定結果使用MINITAB（版本17）進行方差分析，確定影響樣品處理質量的過程條件，詳見附表3。

4.2.4 從檢驗結果可以看出，紅曲（干）洛伐他汀含量測定結果不受溫度、水位、樣品裝載、樣品位置影響（P值大于顯著性水平0.05）。

綜上，通過檢測結果可見，紅曲（干）洛伐他汀含量測定洛伐他汀含量測定的溫度、水位、樣品裝載、樣品位置條件如附表4。

附表1 風險失效模式分析評估表及風險應對措施

附表2 紅曲樣品洛伐他汀含量測定正交實驗表

附表3 樣品洛伐他汀含量測定結果分析匯總

附表4 洛伐他汀含量測定條件列表