周小軍 周鳳姣

鼻咽癌是中國(guó)南方高發(fā)的惡性腫瘤，其發(fā)病與遺傳、環(huán)境及EB病毒活化感染等相關(guān)，目前已將EB病毒感染者、鼻咽癌前病變者及鼻咽癌高癌家族成員作為鼻咽癌高危者[1]。腫瘤特異性生長(zhǎng)因子（Tumor specific growth factor,TSGF）是20世紀(jì) 80年代末由加拿大學(xué)者首先發(fā)現(xiàn)，它由惡性腫瘤產(chǎn)生，是腫瘤及其周邊毛細(xì)血管大量增生的物質(zhì)基礎(chǔ)，隨腫瘤的生長(zhǎng)而逐漸釋放到血液中[2]，在惡性腫瘤形成早期即可明顯升高，為惡性腫瘤血清標(biāo)志物之一，根據(jù)腫瘤發(fā)生發(fā)展規(guī)律，任何腫瘤的發(fā)生發(fā)展都是由腫瘤細(xì)胞逐步發(fā)展成肉眼可見(jiàn)的腫瘤（1～2cm大?。茄拾┑陌l(fā)生也是由多種因素共同作用并經(jīng)過(guò)漫長(zhǎng)演變而導(dǎo)致的，經(jīng)鼻咽癌高危者逐步發(fā)展為原位癌再到侵潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。那么TSGF是否在鼻咽癌高危者中有增高表現(xiàn)？不同分期的鼻咽癌，TSGF是否有特征性的規(guī)律？這些均值得研究。本項(xiàng)目選擇在鼻咽癌高發(fā)區(qū)廣東中山市進(jìn)行，報(bào)道如下。

資料與方法

1 臨床資料

病例來(lái)源于廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山醫(yī)院，從2015年2月～2016年12月的154例患者，鼻咽癌組 31例：男 24例，女 7例；年齡 24～69歲，平均（47.23±10.92）歲；臨床分期，I期 8例、Ⅱ期 6例、Ⅲ期10例、IV期7例。鼻咽癌高危者組43例：男20例，女 23例；年齡 18～68歲，平均（42.86±12.83）歲，鼻咽癌高危者包括EB病毒感染者34例、鼻咽癌前病變者5例、鼻咽癌高癌家族非患癌成員4例。慢性鼻咽炎組17例：男10例，女7例，年齡16～39歲，平均（47.59±11.75）歲；健康對(duì)照組 63 例：男 33例，女 30例，年齡 18～69歲，平均（41.00±11.85）歲。

2 鼻咽癌及鼻咽癌高危者診斷標(biāo)準(zhǔn)

鼻咽癌及鼻咽炎的診斷：常規(guī)病理確診。以2008年中國(guó)鼻咽癌臨床分期工作委員會(huì)制定的分期標(biāo)準(zhǔn)對(duì)鼻咽癌進(jìn)行臨床分期[3]。

鼻咽癌高危者包括EB病毒感染者、鼻咽癌前病變者、鼻咽癌高癌家族非患癌成員，診斷標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)下。

EB病毒感染者診斷標(biāo)準(zhǔn)：凡血清學(xué)EB病毒相關(guān)抗體（早期抗原IgA抗體、殼抗原IgA抗體、核抗原IgA抗體）檢查為陽(yáng)性者。

鼻咽癌前病變者診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照廣東中山大學(xué)腫瘤研究所等制定的標(biāo)準(zhǔn)[4]，凡是鼻咽上皮出現(xiàn)中重度異型鱗狀上皮化生或不典型增生即為癌前病變。異型細(xì)胞判斷標(biāo)準(zhǔn)為：基底細(xì)胞層數(shù)明顯增多，細(xì)胞大小不一，分化不良，核大異型，核仁明顯，核分裂易見(jiàn)，細(xì)胞核漿比例增大,排列極性混亂或消失。鼻咽上皮細(xì)胞異型性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為：異型細(xì)胞占上皮全層的1/3為輕度異型增生 (Ⅰ級(jí))，占全層的2/3為中度異型增生(Ⅱ級(jí)),占全層2/3以上而尚未達(dá)全層者,為重度異型增生(Ⅲ級(jí))。

鼻咽癌高癌家族的診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照國(guó)際遺傳性大腸癌的Amsterdam標(biāo)準(zhǔn)[5]制定，凡連續(xù)二代存在3人或3人以上的人患鼻咽癌者稱為鼻咽癌高癌家族，高癌家系成員為與鼻咽癌患者存在1/2血緣關(guān)系的成年人，年齡大于25歲小于65歲。

3 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合鼻咽癌、鼻咽炎及鼻咽癌高危者的診斷標(biāo)準(zhǔn)，愿意接受血清學(xué)檢查者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡＜16歲者，或＞70歲者；有其它惡性腫瘤病、糖尿病及免疫性疾病者。

4 TSGF的檢測(cè)方法

4.1 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本及主要試劑、儀器

收集研究對(duì)象全血標(biāo)本，室溫放置2小時(shí)1000g離心20分鐘，取上清，-80℃保存待測(cè)。人TSGF ELISA試劑盒：E-10303，上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司產(chǎn)品。酶標(biāo)儀：芬蘭（Labsystems Multiskan MS），352 型。

4.2 實(shí)驗(yàn)方法

應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中TSGF水平，操作參考說(shuō)明書，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃恒溫箱溫育60min。棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，重復(fù)洗板5次。每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中TSGF濃度。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組數(shù)據(jù)采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)間比較采用方差分析及組內(nèi)多重比較，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1 鼻咽癌及鼻咽癌高危者血清TSGF水平

TSGF在鼻咽癌組、鼻咽癌高危組、慢性鼻咽炎組、健康對(duì)照組血清水平分別為（100.86±27.74）IU/ml、（99.13±27.70）IU/ml、（98.94±27.51）IU/ml、（86.72±26.11）IU/ml。采用單因素方差分析：四組方差齊（Levene方差齊性檢驗(yàn)，Levene Statistic=1.065，P=0.366＞0.05）。四組間均值總體比較有顯著性差異（F=2.879，P=0.038<0.05）。兩兩比較經(jīng)SNK 檢驗(yàn)，鼻咽癌組、鼻咽癌高危組血清TSGF水平明顯高于健康對(duì)照組，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其余各組間比較P＞0.05，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

表1 鼻咽癌、鼻咽癌高危、慢性鼻咽炎、健康對(duì)照血清TSGF水平（IU/ml）

本組病例中，TSGF在慢性鼻咽炎也有一定的升高，其中部分慢性鼻咽炎有較高的水平，因本組鼻咽炎病例，都是內(nèi)鏡檢查見(jiàn)鼻咽部隆起表面充血，活檢后病理顯示為鼻咽炎，見(jiàn)圖1。

圖1三例慢性鼻咽炎患者鼻咽部病變圖

2 鼻咽癌不同臨床分期血清TSGF水平

TSGF在鼻咽癌Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期血清水平分別為（71.39±5.73）IU/ml、（101.47±28.26）IU/ml、（112.64±24.85）IU/ml、（117.17±22.77）IU/ml，鼻咽癌血清TSGF水平依Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期進(jìn)展呈現(xiàn)增高表現(xiàn)，pearson相關(guān)分析，相關(guān)系數(shù)為0.623，P＜0.05。采用單因素方差分析，四組方差不齊（Levene方差齊性檢驗(yàn)，Levene Statistic=5.086，P=0.006＜0.05），四組間均值總體比較有顯著性差異（F=7.120,P=0.001<0.05，welch檢驗(yàn)）。兩兩比較經(jīng) Dunnett T3進(jìn)行。鼻咽癌Ⅰ期血清TSGF水平明顯低于鼻咽癌Ⅲ期、Ⅳ期組，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其余各組間比較P＞0.05，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

表2鼻咽癌不同臨床分期血清TSGF水平（IU/ml）

討論

TSGF是20世紀(jì)80年代末由加拿大學(xué)者首先在惡性腫瘤患者血清中發(fā)現(xiàn)，是一種小分子可溶性黏多肽，是腫瘤發(fā)生過(guò)程中腫瘤產(chǎn)生的與惡性腫瘤生長(zhǎng)相關(guān)的糖類物質(zhì)、氨基酸及其代謝產(chǎn)物的統(tǒng)稱，隨腫瘤的生長(zhǎng)而逐漸釋放到血液中，能夠促進(jìn)腫瘤的形成、生長(zhǎng)和擴(kuò)散，與多種腫瘤相關(guān)[6]。

本項(xiàng)目發(fā)現(xiàn)鼻咽癌患者血清TSGF水平明顯高于健康對(duì)照組，這與既往研究[7，8]鼻咽癌患者的血清TSGF明顯升高相一致。我們同時(shí)重點(diǎn)觀察了鼻咽癌高危人群的血清TSGF，顯示其血清TSGF水平也明顯高于健康對(duì)照組(P<0.05)，略低于鼻咽癌（P>0.05），說(shuō)明在鼻咽癌高危者即已經(jīng)出現(xiàn)TSGF的升高，血清TSGF檢測(cè)可作為鼻咽癌高危人群的輔助指標(biāo)。關(guān)于此點(diǎn)，已經(jīng)有相關(guān)學(xué)者在腫瘤的高危人群作了相應(yīng)的研究，如在宮頸癌[9]的研究發(fā)現(xiàn)TSGF含量在宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變組明顯高于體檢組，在肝癌的高危人群[10]（HBsAg陽(yáng)性者）中TSGF較AFP、AFU、GGT-Ⅱ有更高的陽(yáng)性率，在食管上皮癌變[11]（食管上皮重度增生、原位癌及中、晚期癌）的血清TSGF水平明顯高于正常組（P＜0.05），隨著癌變過(guò)程，TSGF水平逐漸升高，至癌前病變達(dá)到最高值，癌變之后又呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)。這些研究結(jié)果基本與本實(shí)驗(yàn)一致。本項(xiàng)目研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)慢性鼻咽炎組中血清TSGF也有一定程度的升高，（但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異），我們觀察到這部分鼻咽炎患者均可見(jiàn)到鼻咽新生物并有充血腫脹等炎癥性表現(xiàn)，（經(jīng)活檢后才確定為鼻咽炎），因?yàn)檠装Y可出現(xiàn)血管增生，可能也引起TSGF一定程度的升高，如研究肺炎時(shí)[12]發(fā)現(xiàn)其TSGF水平在急性炎時(shí)升高。

在鼻咽癌不同臨床分期中發(fā)現(xiàn)隨著鼻咽癌臨床分期的增加，血清TSGF含量升高。說(shuō)明TSGF與腫瘤的侵潤(rùn)、擴(kuò)散及轉(zhuǎn)移有關(guān)，相似研究如在宮頸癌FIGO臨床分期的研究[13]中，也顯示血清TSGF水平與臨床分期呈正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

鼻咽癌及其高危者TSGF水平增高，表明血清TSGF對(duì)于檢測(cè)鼻咽癌及鼻咽癌高危者有一定臨床診斷價(jià)值，聯(lián)合病原學(xué)（如EB病毒）檢測(cè)，可提高診斷的準(zhǔn)確性，值得在鼻咽癌高危區(qū)進(jìn)行鼻咽癌的篩查應(yīng)用。