吳 英 ，鄭 直 ，劉 麗 ，趙立志

（1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，四川 瀘州 646000； 2.四川省瀘州市人民醫(yī)院，四川 瀘州 646000）

癲癇（Epilepsy）是腦部神經(jīng)元高度同步化異常放電所致的一組中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失常綜合征，發(fā)病率為5‰～8‰。70% ～80%的患者服用抗癲癇藥物后可控制發(fā)作，但約30%患者對抗癲癇藥物耐藥[1]。中藥制劑蛭龍活血通瘀膠囊在前期動物及臨床實驗研究中，已證實具有保護腦細胞、改善神經(jīng)功能、減少神經(jīng)細胞凋亡、改善血液流變性等作用[2－4]。本研究中通過觀察氯化鋰－匹羅卡品（毛果蕓香堿）致癇大鼠腦組織中海馬區(qū)細胞因子的變化，探討蛭龍活血通瘀膠囊抗癲癇的機制。

1 材料與方法

1.1 主要藥物及試劑

蛭龍活血通瘀膠囊（西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院制劑室，批號為川藥Z20070528）；丙戊酸鈉片（湖南省湘中制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H43020874，規(guī)格為每片0.2 g）；鹽酸匹羅卡品（上海邁瑞爾化學(xué)技術(shù)有限公司，批號為1538902CAS，規(guī)格為每瓶5 g）；氯化鋰（北京智杰方遠科技有限公司，批號為B00199301，規(guī)格為每瓶100 g）；硫酸阿托品（遂成藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H41021257，規(guī)格為每瓶 0.5 mg）。酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒（上海邦奕生物科技有限公司）。

1.2 實驗動物與分組

成年健康雄性SD大鼠48只，體質(zhì)量200～250 g，由西南醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號為SYXK（川）2013－063，室溫、普通飼料喂養(yǎng)。隨機分為對照組、癲癇組、蛭龍活血組、丙戊酸鈉組，各12只。

1.3 造模方法

氯化鋰及匹羅卡品溶于生理鹽水，質(zhì)量濃度分別為42.39 g／L和10 g／L。癲癇模型大鼠首日腹腔注射氯化鋰（127 mg／kg），24 h后予以腹腔注射匹羅卡品（30 mg／kg），匹羅卡品注射前 30 min，予硫酸阿托品（1 mg／kg）腹腔注射，以減輕匹羅卡品的不良反應(yīng)。對照組：僅腹腔注射等量生理鹽水。蛭龍活血組：蛭龍活血通瘀膠囊溶于生理鹽水中，制備成100 g／L的母液，使用時按照0.8 mg／（kg·d）劑量腹腔注射給藥，大鼠癲癇發(fā)作開始后2 h予以第1次給藥，每24 h重復(fù)腹腔注射等量藥物1次，連續(xù)給藥3次。丙戊酸鈉組：將200 mg丙戊酸鈉加蒸餾水溶解至質(zhì)量濃度為20 g／L[5]，大鼠癲癇發(fā)作開始后2 h第1次腹腔注射給藥，每24 h重復(fù)腹腔注射等量藥物1次，連續(xù)給藥3次。根據(jù)Racine分級標(biāo)準(zhǔn)[6]，密切觀察發(fā)作情況，造模成功標(biāo)準(zhǔn)為發(fā)作達Ⅳ～Ⅴ級。若大鼠在造模過程中死亡，則按隨機原則補足數(shù)量。

1.4 行為觀察及指標(biāo)檢測方法

行為學(xué)觀察：造模成功后使用視頻監(jiān)測錄像記錄存活癲癇大鼠行為，用苦味酸分別標(biāo)記大鼠以區(qū)別。于癲癇發(fā)作開始至第3次治療結(jié)束，觀察大鼠癲癇發(fā)作的時間、形式、級別、持續(xù)時間及次數(shù)。

腦電圖變化：將大鼠連接電極，置透明玻璃籠，籠子放置于屏蔽室，以避免噪聲、靜電及電磁信號的干擾，記錄并分析腦電波形。

炎性因子：癲癇后72 h，用水合氯醛深度麻醉大鼠至對疼痛刺激無反應(yīng)，0℃生理鹽水50mL心臟灌注至流出液清涼，斷頭處死。取大鼠海馬組織加入蛋白裂解液，勻漿收集上清液，腫瘤壞死因子－α（TNF－α）、白細胞介素1b（IL－1b）檢測嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書步驟操作。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析。計量資料以中位數(shù)±四分位數(shù)間距表示，采用秩和檢驗，等級資料的統(tǒng)計分析采用非參數(shù)秩和檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

結(jié)果見表1和表2。

表1 各組大鼠癲癇發(fā)作程度比較（只，n＝12）

表2 各組大鼠海馬組織中炎性因子水平比較（± s，pg／mL，n ＝12）

表2 各組大鼠海馬組織中炎性因子水平比較（± s，pg／mL，n ＝12）

注：與對照組比較，▲P＜0.01，★P＜0.05；與癲癇組比較，●P ＜0.05。

組別對照組癲癇組蛭龍活血組丙戊酸鈉組TNF－α 679.86±25.92 759.73±22.53▲718.83±23.01★●721.14±22.87★●IL－1b 269.48±31.61 425.23±31.03▲351.04±28.46★●349.31±29.03★●

3 討論

目前，越來越多的證據(jù)支持炎癥和免疫反應(yīng)在癲癇產(chǎn)生的病理生理機制中起重要作用，且癲癇持續(xù)狀態(tài)所致腦損傷引起的炎性反應(yīng)應(yīng)答與癲癇復(fù)發(fā)有密切關(guān)系[7－9]。炎性反應(yīng)在腦組織癲癇病灶形成中的作用，已在顳葉癲癇耐藥和灰質(zhì)發(fā)育異常有關(guān)的癲癇患者中體現(xiàn)[10－14]。動物研究證實，炎性介質(zhì)包括細胞因子、補體因子等參與癲癇發(fā)作，且干預(yù)這些分子或其相應(yīng)的受體可減輕癲癇發(fā)作的頻率和程度[15]。Gomes等[16]研究發(fā)現(xiàn)，長春西汀和卡馬西平的抗癲癇機制可能與減少大鼠海馬組織內(nèi)IL－1b和TNF－α表達有關(guān)。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，蛭龍活血通瘀膠囊預(yù)處理癲癇大鼠可減少癲癇發(fā)作次數(shù)和發(fā)作程度，對控制癲癇發(fā)作有較好的療效。肖倩等[17]研究發(fā)現(xiàn)，炎性因子IL－1b和TNF－α水平在癲癇發(fā)作后6 h內(nèi)快速升高。本研究中ELISA檢測結(jié)果也顯示，蛭龍活血組大鼠海馬組織中TNF－α和IL－1b表達量較癲癇組明顯下降。

綜上所述，蛭龍活血通瘀膠囊可能通過抑制炎性因子TNF－α和IL－1b的產(chǎn)生，抑制神經(jīng)元變性、興奮性增高及血腦屏障破壞，從而控制癲癇發(fā)作。