徐維國 崔蓉 岳崇梅 吳君華 李丹 謝佳俊

〔摘要〕 目的 研究慢性阻塞性肺病（COPD）患者β2-腎上腺素受體（β2-AR）編碼區(qū)16、27位點基因多態(tài)性與復方薤白膠囊療效的相關性。方法 選擇2015年1月至2018年1月本院收治的COPD患者210例，均進行基因突變類型測序和復方薤白膠囊治療，分別于治療前、治療第3天和第7天進行第1秒用力呼氣量（FEV1）檢測，并于治療前、治療第7天和第14天進行圣喬治呼吸問卷（SGRQ）調(diào)查及慢性阻塞性肺疾病評估測試（CAT）。結(jié)果 210例患者根據(jù)基因型分為野生型純合子組97例、野生型與突變型基因雜合子組83例、突變型基因純合子或雜合子組30例。治療第3天和第7天，3組FEV1水平均顯著升高且組間有差異（P<0.05），其中野生型純合子組>野生型與突變型基因雜合子組>突變型基因純合子或雜合子組（P<0.05）。治療第7天和第14天，3組SGRQ評分及CAT評分均顯著降低且組間有差異（P<0.05），其中野生型純合子組低于野生型與突變型基因雜合子組及突變型基因純合子或雜合子組（P<0.05）。結(jié)論 β2-AR基因多態(tài)性會影響復方薤白膠囊療效。

〔關鍵詞〕 慢性阻塞性肺病;β2-腎上腺素受體;基因多態(tài)性;復方薤白膠囊

〔中圖分類號〕R256.1;R563.1? ? ? ?〔文獻標志碼〕B? ? ? ?〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2018.12.020

慢性阻塞性肺?。╟hronic obstructive pulmonary disease，COPD）是慢性加重性呼吸系統(tǒng)性疾病，隨著生活環(huán)境的改變，其患病人數(shù)逐年上升，相關調(diào)查顯示，COPD在中老年人群中發(fā)病率可達到8%以上[1-2]。COPD重要特征是不完全可逆性氣流受限，慢性咳嗽、咳痰、氣短、喘息、呼吸困難等是其主要臨床表現(xiàn)[3]。目前臨床對COPD以藥物治療為主，復方薤白膠囊具有止咳平喘、祛痰抗炎之效[4]，是COPD治療較為常用藥物，但是其療效并不相近。β2-腎上腺素受體（β2-AR）是介導兒茶酚胺作用的一類組織受體，研究表明，其與COPD發(fā)生及發(fā)展相關[5]。為探討β2-AR基因多態(tài)性與復方薤白膠囊療效的相關性，本研究對210例COPD患者進行β2-AR基因多態(tài)性分析，具體報道如下。

1 資料與方法

1.1? 一般資料

將2015年1月至2018年1月本院收治的210例COPD患者作為研究對象，納入標準：（1）符合中華醫(yī)學會呼吸病學分會慢性阻塞性肺疾病學組制定的COPD診治指南[6];（2）患者出現(xiàn)咳嗽、咳痰、胸悶、喘息、呼吸困難等癥狀;（3）肺功能測定結(jié)果顯示混合性通氣功能障礙;（4）患者及家屬均簽署知情同意書。排除標準：（1）合并嚴重心、肝、腎功能不全;（2）對相關藥物過敏者;（3）哮喘;（4）合并彌漫性支氣管炎癥;（5）合并放射性或過敏性肺炎;（6）拒絕參與本次研究。210例患者中男116例，女94例，年齡35～70（52.24±5.62）歲，病程0.7～7（3.77±1.42）年。

1.2? 方法

1.2.1? PCR檢測? （1）提取DNA：抽取患者外周靜脈血2 mL，以水飽和酚/氯仿法提取染色體DNA，DNA濃度為0.2～0.3 g/μL。（2）PCR反應：引物根據(jù)相關文獻[7]設計，以等位基因特異性聚合酶鏈反應檢測β2-AR編碼區(qū)16、27位點基因（分別為Arg16Gly、Gln27Glu），Arg16Gly多態(tài)性擴增引物序列為正鏈Arg16：5-CTT CTT GCT GGC ACC CAA TA-3，Gly16：5-CTT CTT GCT GGC ACC CAA TG-3，反鏈：5-CCA ATT TAG GAG GAT GTA AAC TTC-3;Gln27Glu多態(tài)性擴增引物序列為正鏈Gln27：5-GGA CCA CGA CGT CAC GCA GC-3，Glu27：5-GGA CCA CGA CGT CAC GCA GG-3，反鏈：5-ACA ATC CAC ACC ATC AGA AT-3。（3）PCR產(chǎn)物測序：反應總體系50 μL （DNA模板1 μL），于94 ℃環(huán)境下預變性5 min，再于94 ℃環(huán)境下變性2 min，16位點和27位點分別于55 ℃和52 ℃退火1 min，27位點72 ℃延伸1 min，循環(huán)35次，最后1次72 ℃延伸10 min。

1.2.2? β2-AR基因多態(tài)性檢測? 等位基因特異性聚合酶鏈反應產(chǎn)物+1%瓊脂糖凝膠，電泳槽中進行電泳，電泳儀為ECP3000三恒電泳儀，以全自動紫外與可見分析裝置觀察分析，根據(jù)電泳帶判斷基因型。

1.2.3? 治療方法? 所有患者均給予復方薤白膠囊（江蘇省中醫(yī)院藥材科制劑部，批號：370202A，0.35 g/粒）口服，2.1 g/次，3次/d，連續(xù)服用14 d，治療期間不再使用其他止咳平喘藥物。

1.3? 觀察指標

（1）分別于治療前、治療第3天和第7天，采用意大利科時邁PFT1肺功能儀檢測第1秒用力呼氣量（FEV1）。（2）分別于治療前、治療第7天和第14天，對患者進行圣喬治呼吸問卷（SGRQ）[8]調(diào)查，一共包含54個條目與3個分問卷，分值范圍為0～100分，分數(shù)越高表示對患者生活影響越嚴重。（3）分別于治療前、治療第7天和第14天，對患者進行慢性阻塞性肺疾病評估測試（CAT）[9]，一共包含8個問題，各問題評分0～5分，總分值范圍0～40分，分數(shù)越高表示患者健康狀態(tài)越差。

1.4? 統(tǒng)計學分析

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0軟件。計數(shù)資料以%表示，χ2檢驗;計量資料采用“x±s”表示，兩兩比較行t檢驗，多組間比較行F檢驗;P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1? β2-AR基因多態(tài)性檢測結(jié)果

210例患者根據(jù)基因型分為野生型純合子組、野生型與突變型基因雜合子組、突變型基因純合子或雜合子組，例數(shù)分別為97例、83例、30例。3組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表1。

2.2? 3組患者不同時間點FEV1水平比較

治療前3組FEV1水平差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;治療第3天和第7天，3組FEV1水平均顯著升高且組間有差異，其中野生型純合子組高于野生型與突變型基因雜合子組和突變型基因純合子或雜合子組，突變型基因雜合子組高于突變型基因純合子或雜合子組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

2.3? 3組患者不同時間點SGRQ評分比較

治療前3組SGRQ評分差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;治療第7天和第14天，3組SGRQ評分均顯著降低且組間有差異，其中野生型純合子組低于野生型與突變型基因雜合子組和突變型基因純合子或雜合子組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表3。

2.4? 3組患者不同時間點CAT評分比較

治療前3組CAT評分差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）;治療第7天和第14天，3組CAT評分均顯著降低且組間有差異，其中野生型純合子組低于野生型與突變型基因雜合子組和突變型基因純合子或雜合子組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表4。

3 討論

COPD在中醫(yī)中并無對應稱呼，根據(jù)其癥狀表現(xiàn)，一般將之歸為“喘證”“肺脹”“痹證”等范疇[10]。患者咳嗽、哮喘、痰飲不退，遷延積重，導致陽氣虧損，臟腑虧虛，氣化失司，痰濁內(nèi)生郁于肺，遏阻胸陽。復方薤白膠囊藥物成分為薤白、瓜蔞、姜半夏、黃連，其中薤白化痰通陽，瓜蔞鎮(zhèn)咳祛痰、解熱利尿，姜半夏降逆止嘔、化痰平喘，黃連清熱燥濕、瀉火解毒，合方共奏鎮(zhèn)咳祛痰、清熱解毒之效。曾亮等[11]研究表示復方薤白膠囊能夠明顯減輕COPD模型大鼠支氣管壁和平滑肌增厚，抑制氣道重塑，延緩COPD發(fā)展。本次結(jié)果中所有患者治療后FEV1水平均顯著升高，SGRQ評分和CAT評分均顯著降低，表明復方薤白膠囊對COPD患者具有一定治療效果，可以改善患者肺功能，減輕疾病對生活造成的不良影響，提高機體健康水平。

研究表明，COPD為環(huán)境與遺傳因素共同作用的多基因疾病，且對相關影響基因進行分析，發(fā)現(xiàn)β2-AR基因改變會影響支氣管和血管反應性[12-13]。β2-AR基因完整序列最早是由Kobika等[14]測出，該基因無內(nèi)含子，由7個疏水殘基組成跨膜結(jié)構(gòu)，總共包含413個氨基酸。上世紀九十年代，Reishaus等[15]對β2-AR基因進行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其編碼區(qū)存在多種堿基突變點，其中突變頻率最高的兩個位點是16和27位點。史有奎等[16]研究表示，β2-AR編碼區(qū)16、27位點基因多態(tài)性可影響COPD患者肺功能。本次研究對210例患者進行外周靜脈血β2-AR編碼區(qū)16、27位點基因多態(tài)性檢測，并根據(jù)基因型將其分為野生型純合子組、野生型與突變型基因雜合子組、突變型基因純合子或雜合子組。3組FEV1水平檢測結(jié)果顯示，治療第3天和第7天時，野生型純合子組>野生型與突變型基因雜合子組>突變型基因純合子或雜合子組，表示不同β2-AR編碼區(qū)16、27位點基因型復方薤白膠囊治療效果不一，肺功能改善程度不同。并且治療第7天和第14天時，野生型純合子組SGRQ評分和CAT評分均低于野生型與突變型基因雜合子組與突變型基因純合子或雜合子組，說明帶有突變型基因組復方薤白膠囊治療效果會受到影響。

綜上，本次研究從基因?qū)哟谓沂玖薈OPD患者外周靜脈血β2-AR基因多態(tài)性，多角度評價了復方薤白膠囊對COPD患者治療效果，并得出了β2-AR基因多態(tài)性會影響復方薤白膠囊療效的結(jié)論，臨床可通過分析COPD患者β2-AR基因多態(tài)性來評估復方薤白膠囊療效。但本次研究亦存在不足，未探討患者體內(nèi)復方薤白膠囊濃度和其在體內(nèi)產(chǎn)生的活性代謝產(chǎn)物對效果的影響，且僅研究16和27位點基因多態(tài)性，未分析β2-AR其它位點基因多態(tài)性對復方薤白膠囊療效的影響，因此還需擴大樣本量再進行更加深入的研究。

參考文獻：

[1] 陳學昂，李素云，王明航，等.慢性阻塞性肺疾病急性加重期預后響因素的研究進展[J].中華中醫(yī)藥學刊，2017，35（4）：799-802.

[2] 姚? 莉，劉? 維，李保蘭.出院計劃服務對110例慢性阻塞性肺疾病患者生命質(zhì)量的影響[J].重慶醫(yī)學，2015，44（22）：3162-3163.

[3] 劉秀麗，尹金植，李艷秋，等.COPD繼發(fā)肺動脈高壓的診治進展[J]. 中國老年學雜志，2014，34（15）：4417-4419.

[4] 袁永豐，曾? 亮.復方薤白膠囊對慢性阻塞性肺疾病大鼠模型氣道重塑作用的研究[J].中國中醫(yī)急癥，2015，24（6）：967-968.

[5] 劉笑然，黃鑫炎，林耿鵬，等.COPD患者early-EPCs β2-腎上腺素受體的表達及其對細胞遷移的影響[J].中國病理生理雜志，2014， 30（7）：1196-1203.

[6] 中華醫(yī)學會呼吸病學分會慢性阻塞性肺疾病學組. 慢性阻塞性肺疾病診治指南（2007年修訂版）[J].中華結(jié)核和呼吸雜志， 2007，46（1）：8-17.

[7] Ho L I， Harn H J， Chen C J， et al. Polymorphism of the beta（2）-adrenoceptor in COPD in Chinese subjects[J]. Chest， 2001， 120（5）：1493.

[8] 張鋒英，俞? 烽，杭晶卿，等.社區(qū)呼吸康復對穩(wěn)定期慢性阻塞性肺疾病患者療效的影響[J].中華物理醫(yī)學與康復雜志，2014，36（1）：47-51.

[9] 姜軼飛，楊? 猛，莫偉強.慢性阻塞性肺疾病評估測試評分對AECOPD患者的臨床評估價值[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2017， 24（2）：174-176.

[10] 丁元華.健脾補肺法治療慢性阻塞性肺疾病穩(wěn)定期的臨床療效觀察[J].實用臨床醫(yī)藥雜志，2016，20（13）：117-118.

[11] 曾? 亮，陳井亞，袁永豐，等.復方薤白膠囊對COPD模型大鼠MMP-9和TIMP-1表達的影響[J].南京中醫(yī)藥大學學報，2015，31（4）：357-359.

[12] 馮? 瑩，鄭? 翔，方志成.慢性阻塞性肺疾病的遺傳學研究進展[J]. 廣東醫(yī)學，2016，37（17）：2685-2687.

[13] 王? 成，楊皚嵐，李? 華，等.云南漢族老年人群β_2-AR基因Gln27Glu多態(tài)性與COPD合并原發(fā)性高血壓相關性的初步研究[J].實用醫(yī)學雜志，2012，28（7）：1100-1103.

[14] SUN B， HERTING E， CURSTEST T， et al. Exogenous surfactant improves lung compliance and oxygenation in adult rats with meconium aspiration[J]. Journal of Applied Physiology， 1994，77（4）：1961-71.

[15] AUTEN R L， NOTTER R H， KENDIG J W， et al. Surfactant treatment of full-term newborns with respiratory failure[J]. Pediatrics， 1991， 87（1）：101-107.

[16] 史有奎，馬? 娟，袁洲杰，等.β2-AR多態(tài)性與慢性阻塞性肺疾病的關系[J].山東醫(yī)藥，2008，48（13）：9-11.