郭明鑫 馬德翊 李文靜 洪博

中圖分類號(hào) R284.1；R969.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2018）20-2752-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.20.04

摘 要 目的：建立測(cè)定大鼠血漿中莪術(shù)油多效應(yīng)成分質(zhì)量濃度的方法，并進(jìn)行整合藥動(dòng)學(xué)研究。方法：16只大鼠單次灌胃莪術(shù)油提取液1.0 g/kg（按生藥量計(jì)），分別于給藥后0、0.17、0.5、1、2、2.5、3、4、6、8、10、12、24 h自眼眶取血300～400 μL，采用氣質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定大鼠血漿中α-蒎烯、1，8-桉葉油素、龍腦、β-欖香烯、莪術(shù)醇、吉馬酮、莪術(shù)二酮的質(zhì)量濃度。色譜柱為DB-5毛細(xì)管柱，載氣為氦氣，進(jìn)樣口溫度為270 ℃，柱溫采用程序升溫，流速為1.2 mL/min，分流比為20 ∶ 1，進(jìn)樣量為1 μL；離子源為電噴霧離子源，以選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式進(jìn)行正離子掃描，掃描范圍為m/z 20～500。采用DAS 2.0軟件計(jì)算上述各效應(yīng)成分的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，并以其AUC0-∞在AUC0-∞總和中所占的比例自定義權(quán)重系數(shù)，估算莪術(shù)油多效應(yīng)成分在大鼠體內(nèi)的整合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果：α-蒎烯、1，8-桉葉油素、龍腦、β-欖香烯、莪術(shù)醇、吉馬酮、莪術(shù)二酮血藥濃度的線性范圍分別為2.71～173.54、7.76～496.88、3.37～215.72、21.68～1 387.50、40.21～2 573.44、24.84～3 179.69、47.78～3 057.81 ng/mL（r>0.99），定量下限分別為2.71、7.76、3.37、21.68、40.21、24.84、47.78 ng/mL，精密度、準(zhǔn)確度、基質(zhì)效應(yīng)等均符合生物樣品定量分析的相關(guān)要求。α-蒎烯、1，8-桉葉油素、龍腦、β-欖香烯、莪術(shù)醇、吉馬酮、莪術(shù)二酮的cmax分別為（34.72±9.97）、（99.86±5.54）、（16.10±3.37）、（248.98±86.19）、（673.75±104.15）、（2 353.64±637.83）、（2 420.04±708.51）ng/mL；tmax分別為（2.33±0.29）、（0.67±0.29）、（1.33±0.58）、（1.83±0.76）、（0.83±0.29）、（0.89±0.18）、（1.17±0.76）h；t1/2分別為（8.64±1.46）、（8.98±1.63）、（12.43±2.88）、（19.86±4.05）、（15.63±5.50）、（14.17±4.13）、（7.14±0.67）h；AUC0-t分別為（189.78±89.10）、（454.74±82.43）、（100.55±8.27）、（1 067.37±216.55）、（3 154.16±405.94）、（16 501.24±663.88）、（12 524.92±3 222.10）ng·h/mL；AUC0-∞分別為（229.57±93.50）、（524.32±81.67）、（146.28±10.74）、（2 092.70±416.18）、（5 388.65±661.86）、（28 198.87±4 102.62）、（14 139.35±3 109.19）ng·h/mL。整合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)cmax為1 880.94 ng/mL，tmax為0.50 h，t1/2為11.22 h，AUC0-t為13 050.89 ng·h/mL，AUC0-∞為19 015.21 ng·h/mL。結(jié)論：該方法可用于大鼠血漿中莪術(shù)油多效應(yīng)成分血藥濃度的檢測(cè)；整合后的莪術(shù)油藥動(dòng)學(xué)參數(shù)與單一效應(yīng)成分的差異較大，可為表征其整體藥動(dòng)學(xué)特征提供參考。

關(guān)鍵詞 氣質(zhì)聯(lián)用法；中藥；莪術(shù)油；效應(yīng)成分；整合藥動(dòng)學(xué)

ABSTRACT OBJECTIVE： To develop the determination method for plasma concentration of effective components in essential oil from Curcuma phaeocaulis， and to study its integrated pharmacokinetics. METHODS： Sixteen rats were given the extract of essential oil from C. phaeocaulis 1.0 g/kg （by crude drug） intragastrically； blood samples 300-400 μL from orbit were collected 0， 0.17， 0.5， 1， 2， 2.5， 3， 4， 6， 8， 10， 12， 24 h after medication. The plasma concentration of α-pinene， 1，8-cineole， borneol， β-elemene， curcumol， germacrone and curdione in rats were determined by GC-MS. The determination was performed on DB-5 capillary column， using helium as carrier gas， at the flow rate of 1.2 mL/min. The injector temperature was 270 ℃， by temperature programming， and split ratio was 20 ∶ 1. The sample size was 1 μL. The ion source was electrospray ion source. The selective reaction monitoring mode was used for the positive ion scanning in the range of m/z 20-500. Pharmacokinetic parameters of above effective components were calculated by using DAS 2.0 software. The weight coefficients were customized according to the proportion of AUC0-∞ in the sum of AUC0-∞. The integrated pharmacokinetic parameters of multiple effective components in essential oil from C. phaeocaulis were calculated. RESULTS： The linear range of α-pinene， 1，8-cineole， borneol， β-elemene， curcumol， germacrone， and curdione were 2.71-173.54， 7.76-496.88， 3.37-215.72， 21.68-1 387.50， 40.21-2 573.44， 24.84-3 179.69， 47.78-3 057.81 ng/mL， respectively （r>0.99）. The lower limits of quantitation were 2.71， 7.76， 3.37， 21.68， 40.21， 24.84， 47.78 ng/mL， respectively. The precision， accuracy and matrix effects were in line with related requirements of quantitative analysis of biological samples. The pharmacokinetic parameters of α-pinene， 1，8-cineole， borneol， β-elemene， curcumol， germacrone， and curdione were as follows that cmax were （34.72±9.97）， （99.86±5.54）， （16.10±3.37），（248.98±86.19）， （673.75±104.15）， （2 353.64±637.83）， （2 420.04±708.51）ng/mL； tmax were （2.33±0.29）， （0.67±0.29）， （1.33±0.58）， （1.83±0.76）， （0.83±0.29）， （0.89±0.18）， （1.17±0.76）h； t1/2 were （8.64±1.46）， （8.98±1.63）， （12.43±2.88）， （19.86±4.05）， （15.63±5.50）， （14.17±4.13）， （7.14±0.67）h； AUC0-t were （189.78±89.10）， （454.74±82.43）， （100.55±8.27）， （1 067.37±216.55）， （3 154.16±405.94）， （16 501.24±663.88）， （12 524.92±3 222.10）ng·h/mL； AUC0-∞ were （229.57±93.50）， （524.32±81.67）， （146.28±10.74）， （2 092.70±416.18）， （5 388.65±661.86）， （28 198.87±4 102.62）， （14 139.35±3 109.19）ng·h/mL， respectively. After integration， the pharmacokinetic parameters were as follows that cmax was 1 880.94 ng/mL； tmax was 0.50 h； t1/2 was 11.22 h； AUC0-t was 13 050.89 ng·h/mL； AUC0-∞ was 19 015.21 ng·h/mL. CONCLUSIONS： The method can be used for the detection of plasma concentration of effective components in rats； pharmacokinetic parameters of essential oil from C. phaeocaulis after integration are greatly different from single effective component， which can provide reference for characterization of its overall pharmacokinetics.

KEYWORDS GC-MS； Traditional Chinese medicine； Curcuma phaeocaulis； Effective component； Integrated pharmacokinetics

中藥藥動(dòng)學(xué)的研究由于受到提取及分析技術(shù)等因素的影響，常以某單一或簡(jiǎn)單的幾個(gè)主要成分為對(duì)象。這種方式通常無(wú)法準(zhǔn)確反映中藥多組分整體作用的體內(nèi)過(guò)程，用以闡明中藥及其方劑的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)特征具有很大的局限性[1-3]。因此，如何全面地反映中藥有效部位或方劑在機(jī)體內(nèi)的整體藥動(dòng)學(xué)特征、建立符合中醫(yī)藥自身規(guī)律及特點(diǎn)的藥動(dòng)學(xué)研究方法，是中藥現(xiàn)代化研究亟需解決的關(guān)鍵問(wèn)題之一[4]。

莪術(shù)為姜科姜黃屬植物蓬莪術(shù)（Curcuma phaeocaulis Val.）、廣西莪術(shù)（C. kwangsiensis S. G. Lee et C. F. Liang）和溫郁金（C. wenyujin Y. H. Chen et C. Ling）的干燥根莖，主產(chǎn)于廣西、四川、浙江等地。相關(guān)研究顯示，莪術(shù)中主要含有揮發(fā)油（即莪術(shù)油，1%～2.5%）和姜黃素兩大類成分[5]。莪術(shù)油的化學(xué)成分以單萜和倍半萜類化合物為主，具有抗炎、調(diào)節(jié)血脂、抗氧化等藥理作用[6-8]。其中，吉馬酮和莪術(shù)二酮具有明顯的抗腫瘤活性[9]，莪術(shù)醇具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌等作用[10]，是莪術(shù)油中的主要效應(yīng)成分。近年來(lái)，對(duì)莪術(shù)油的研究多集中在其化學(xué)成分及藥理作用上，且藥動(dòng)學(xué)研究也多局限于莪術(shù)醇、吉馬酮、莪術(shù)二酮等幾個(gè)單體成分上，尚無(wú)莪術(shù)油整體藥動(dòng)學(xué)行為研究的相關(guān)報(bào)道。為此，本研究以莪術(shù)油為對(duì)象，在鑒定及分析其主要效應(yīng)成分及其藥動(dòng)學(xué)特征的基礎(chǔ)上[11-12]，對(duì)莪術(shù)油多效應(yīng)成分在大鼠體內(nèi)的整合藥動(dòng)學(xué)進(jìn)行探討，以期為莪術(shù)油的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制研究提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

7890型氣質(zhì)聯(lián)用（GC-MS）儀，配有7693型自動(dòng)進(jìn)樣器和5977A型檢測(cè)器（美國(guó)Agilent公司）；TGL16M型低溫高速離心機(jī)（湖南邁達(dá)儀器有限公司）；XH-D型渦旋混合器（上海利聞科學(xué)儀器有限公司）；KQ-200KDB型高功率數(shù)控超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 藥材、藥品與試劑

莪術(shù)藥材（批號(hào)：20121005）購(gòu)自廣西健生堂中藥材有限公司，經(jīng)齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院郭麗娜教授鑒定為姜科姜黃素植物蓬莪術(shù)（C. phaeocaulis Val.）的干燥根莖。

α-蒎烯對(duì)照品（批號(hào)：101561026，純度：98%）、1，8-桉葉油素對(duì)照品（批號(hào)：12-2006，純度：99%）、龍腦對(duì)照品（批號(hào)：03-2008，純度：98%）、吉馬酮對(duì)照品（批號(hào)：111665-201204，純度：99.8%）、莪術(shù)二酮對(duì)照品（批號(hào)：111800-201001，純度：99.2%）均購(gòu)自上海博頓生物化工有限公司；β-欖香烯對(duì)照品（批號(hào)：100268-200401，純度：99%）、莪術(shù)醇對(duì)照品（批號(hào)：100185-200506，純度：99%）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

1.3 動(dòng)物

清潔Ⅱ級(jí)Wistar大鼠16只，雌雄各半，2月齡，體質(zhì)量（250±20）g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供[使用合格證號(hào)：SCXK（京）2007-0001]。實(shí)驗(yàn)前禁食12 h。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究方案符合齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)標(biāo)準(zhǔn)（批文號(hào)：201714）。

2 方法與結(jié)果

2.1 莪術(shù)油提取液制備

取干燥莪術(shù)藥材12.5 g，使用揮發(fā)油提取器以500 mL水提取4 h，收集揮發(fā)油；將水提液濾過(guò)后，濃縮至100 mL。取所得揮發(fā)油1 mL，與聚山梨酯80 0.5 mL、濃縮的水提液100 mL混合，得質(zhì)量濃度為0.125 g/mL（以生藥量計(jì)）的莪術(shù)油提取液。

2.2 給藥與樣品采集

所有大鼠禁食12 h后，均單次灌胃“2.1”項(xiàng)下莪術(shù)油提取液1.0 g/kg[按生藥量計(jì)，以水為溶劑。由“2.1”項(xiàng)可知，莪術(shù)油提取液質(zhì)量濃度為0.125 g/mL，每只大鼠灌胃2 mL，按照《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》（第3版）[13]中人與大鼠的換算系數(shù)0.018計(jì)算，最終確定給藥劑量為1.0 g/kg]。于給藥后0、0.17、0.5、1、2、2.5、3、4、6、8、10、12、24 h自眼眶取血300～400 μL，置于含肝素的1.5 mL EP管中，于4 ℃下以轉(zhuǎn)速10 000 r/min離心10 min，取上層血漿，備用。

2.3 色譜與質(zhì)譜條件

2.3.1 色譜條件 色譜柱：DB-5毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；載氣：氦氣（純度為99.99%）；進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度分別為270 ℃和280 ℃；流速：1.2 mL/min；分流比：20 ∶ 1；進(jìn)樣量：1 μL。柱溫采用程序升溫（50 ℃維持1 min；以5 ℃/min的速度升至120 ℃，并維持1 min；以5 ℃/min的速度升至150 ℃，并維持5 min；以3 ℃/min的速度升至200 ℃，并維持1 min）；總分離時(shí)間：33 min；溶劑延遲時(shí)間：10 min。

2.3.2 質(zhì)譜條件 離子源：電噴霧離子源；干燥氣：氮?dú)猓兌葹?9.99%）；流速：1.2 mL/min；裂解器電壓：70 eV；以選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)（SRM）模式掃描，正離子方式檢測(cè)，掃描范圍：m/z 20～500。各待測(cè)物的特征離子——α-蒎烯：m/z 137、122、106、94、78，1，8-桉葉油素：m/z 155、140、109、82、44，龍腦：m/z 155、140、122、111、96，β-欖香烯：m/z 205、148、108、94、82，莪術(shù)醇：m/z 237、136、122、108、94，吉馬酮：m/z 219、176、136、108、92，莪術(shù)二酮：m/z 237、181、168、110、70。

2.4 混合對(duì)照品溶液的制備

精密稱取“1.2”項(xiàng)下待測(cè)物對(duì)照品各適量，分置于不同的棕色量瓶中，加入甲醇，超聲（功率：250 W，頻率：40 kHz）溶解，得α-蒎烯、1，8-桉葉油素、龍腦、β-欖香烯、莪術(shù)醇、吉馬酮、莪術(shù)二酮質(zhì)量濃度分別為17.77、3.18、22.09、2.22、16.47、20.35、19.57 mg/mL的貯備液；采用逐級(jí)稀釋法以甲醇為溶劑進(jìn)一步將上述貯備液稀釋，得質(zhì)量濃度分別為8 676.7、24 843.84、10 786、69 375、128 672、158 984、305 781 ng/mL的母液；取上述母液各1 mL至同一10 mL量瓶中，用甲醇稀釋并定容，混勻，得各待測(cè)物質(zhì)量濃度分別為867.7、2 484.4、1 078.6、6 937.5、12 867.2、15 898.4、30 578.1 ng/mL的混合對(duì)照品溶液，備用。

2.5 血漿樣品的處理

取血漿樣品100 μL至1.5 mL EP管中，加入正己烷-乙酸乙酯混合溶液（1 ∶ 1，V/V，下同）100 μL，渦旋1 min后，于4 ℃下以轉(zhuǎn)速12 000 r/min離心10 min，將上清液轉(zhuǎn)移至1.5 mL進(jìn)樣瓶中，備測(cè)。

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 專屬性 取空白血漿、混合質(zhì)控樣品（高質(zhì)量濃度）以及大鼠灌胃2 h后的血漿樣品，按照“2.5”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖（見(jiàn)圖1）。結(jié)果，α-蒎烯、1，8-桉葉油素、龍腦、β-欖香烯、莪術(shù)醇、吉馬酮、莪術(shù)二酮的保留時(shí)間分別為6.64、9.23、13.05、19.70、26.18、30.01、30.90 min；各待測(cè)物色譜峰峰形良好，血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾其測(cè)定，表明本方法專屬性良好。

2.6.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與定量下限（LLOQ）的考察 取大鼠空白血漿100 μL，分別加入各待測(cè)物對(duì)照品貯備液適量，配制成α-蒎烯質(zhì)量濃度分別為2.71、5.42、10.84、21.69、43.38、86.77、173.54 ng/mL，1，8-桉葉油素質(zhì)量濃度分別為7.76、15.53、31.05、62.11、124.22、248.44、496.88 ng/mL，龍腦質(zhì)量濃度分別為3.37、6.74、13.48、26.96、53.93、107.86、215.72 ng/mL，β-欖香烯質(zhì)量濃度分別為21.68、43.36、86.72、173.44、346.88、693.75、1 387.50 ng/mL，莪術(shù)醇質(zhì)量濃度分別為40.21、80.42、160.84、321.68、643.36、1 286.72、2 573.44 ng/mL，吉馬酮質(zhì)量濃度分別為24.84、49.68、99.36、198.73、397.46、794.92、1 589.84、3 179.69 ng/mL，莪術(shù)二酮質(zhì)量濃度分別為47.78、95.56、191.11、382.23、764.45、1 528.91、3 057.81 ng/mL的系列血漿樣品，按“2.5”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。以各待測(cè)物的峰面積（y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（x，ng/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果，各成分血藥濃度在其線性范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好（r>0.99），LLOQ分別為2.71、7.76、3.37、21.68、40.21、24.84、47.78 ng/mL，符合生物樣品定量分析的相關(guān)要求[14]，詳見(jiàn)表1。

2.6.3 精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn) 取大鼠空白血漿100 μL，依次加入“2.4”項(xiàng)下各待測(cè)物母液適量，得α-蒎烯低、中、高質(zhì)量濃度（5.42、21.69、86.77 ng/mL，下同），1，8-桉葉油素低、中、高質(zhì)量濃度（15.53、62.11、248.44 ng/mL，下同），龍腦低、中、高質(zhì)量濃度（6.74、26.96、107.86 ng/mL，下同），β-欖香烯低、中、高質(zhì)量濃度（43.36、173.44、693.75 ng/mL，下同），莪術(shù)醇低、中、高質(zhì)量濃度（80.42、321.68、1 286.72 ng/mL，下同），吉馬酮低、中、高質(zhì)量濃度（49.68、198.73、1 589.84 ng/mL，下同），莪術(shù)二酮低、中、高質(zhì)量濃度（95.56、382.23、1 528.91 ng/mL，下同）的混合質(zhì)控樣品，每個(gè)質(zhì)量濃度平行配制6份，按“2.5”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣分析，考察日內(nèi)精密度；連續(xù)測(cè)定3 d，考察日間精密度；以實(shí)測(cè)值與理論值的比值（即方法回收率）考察準(zhǔn)確度。結(jié)果，各混合質(zhì)控樣品日內(nèi)、日間RSD<10%，方法回收率較高，符合生物樣品定量分析的相關(guān)要求[14]，詳見(jiàn)表2。

2.6.4 基質(zhì)效應(yīng)與提取回收率試驗(yàn) 按“2.6.3”項(xiàng)下方法分別配制7個(gè)待測(cè)物低、中、高質(zhì)量濃度的混合質(zhì)控樣品各6份，按“2.5”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣分析，得色譜峰峰面積（A1）。按“2.5”項(xiàng)下方法處理空白血漿后，加入各待測(cè)物對(duì)照品貯備液各適量，使最終質(zhì)量濃度與混合質(zhì)控樣品對(duì)應(yīng)，進(jìn)樣分析，得色譜峰峰面積（A2）。取混合對(duì)照品溶液適量，以正己烷-乙酸乙酯混合溶液稀釋，使最終質(zhì)量濃度與混合質(zhì)控樣品對(duì)應(yīng)，進(jìn)樣分析，得色譜峰峰面積（A3）。基質(zhì)效應(yīng)=A2/A3×100%，提取回收率=A1/A3×100%。結(jié)果，基質(zhì)效應(yīng)、提取回收率均符合生物樣品定量分析的相關(guān)要求[14]，詳見(jiàn)表3。

2.6.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.6.3”項(xiàng)下方法分別配制7個(gè)待測(cè)物低、中、高質(zhì)量濃度的混合質(zhì)控樣品各3份，分別考察其室溫放置24 h、反復(fù)凍融3次（-20～25 ℃）的穩(wěn)定性。結(jié)果，各樣品實(shí)測(cè)值的RSD均小于10%（n=3），表明其在上述條件下穩(wěn)定。

2.7 莪術(shù)油整合藥動(dòng)學(xué)研究

16只大鼠單次灌胃莪術(shù)油提取液1.0 g/kg后，按“2.2”項(xiàng)下方法采樣，按“2.5”項(xiàng)下方法處理后，再按“2.3”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，測(cè)定莪術(shù)油中7個(gè)待測(cè)物的血藥濃度，并繪制平均藥-時(shí)曲線（見(jiàn)圖2A～圖2G），使用DAS 2.0軟件計(jì)算各待測(cè)物的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（見(jiàn)表4）。根據(jù)7種待測(cè)物的藥-時(shí)曲線下面積（AUC0-∞）在其總AUC0-∞中所占比例自定義各自的權(quán)重系數(shù)（ωj，見(jiàn)表4）。將各時(shí)間點(diǎn)下各待測(cè)物的血藥濃度賦以對(duì)應(yīng)的權(quán)重系數(shù)，計(jì)算莪術(shù)油的整合血藥濃度，進(jìn)一步進(jìn)行其整合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的計(jì)算[15]。整合后的平均藥-時(shí)曲線見(jiàn)圖2H，整合后的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表4。結(jié)果，整合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)與各待測(cè)物的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)相比較，差異均較大，提示任何單一成分的藥動(dòng)學(xué)行為均不能用于表征莪術(shù)油的整體藥動(dòng)學(xué)行為。

3 討論

3.1 整合藥動(dòng)學(xué)

現(xiàn)有研究普遍采用的單一成分血藥濃度檢測(cè)及其藥動(dòng)學(xué)研究無(wú)法體現(xiàn)中藥體內(nèi)代謝的整體性，亦無(wú)法闡明單一成分與中藥整體的相關(guān)性，而中藥多組分整合藥動(dòng)學(xué)可將中藥中的各個(gè)主要效應(yīng)成分的藥-時(shí)曲線整合為一條能夠表征其整體體內(nèi)代謝特征的藥-時(shí)曲線，以該方法描述中藥的體內(nèi)過(guò)程更為合理且更具優(yōu)越性[16]。

3.2 大鼠給藥劑量的選擇

在急性毒性實(shí)驗(yàn)中，研究者多采用灌胃法[17]，此法劑量準(zhǔn)確，灌胃的體積一般為1 mL/100 g。本研究根據(jù)大鼠的體質(zhì)量（250 g左右）估算給藥體積約為2 mL，再根據(jù)體表面積換算系數(shù)（0.018）、按成人劑量（9～12 g）換算得大鼠的給藥劑量為1.0 g/kg[13]。

3.3 實(shí)驗(yàn)方法的篩選

本課題組曾采用GC法對(duì)莪術(shù)油中的主要成分進(jìn)行含量測(cè)定，但體外試驗(yàn)結(jié)果顯示，莪術(shù)油成分在腸道內(nèi)吸收較差，血漿中藥物濃度較低，GC法無(wú)法對(duì)體內(nèi)藥物含量進(jìn)行準(zhǔn)確地定量分析[18]。因此，需要更加靈敏的檢測(cè)方法來(lái)進(jìn)行測(cè)定。本研究經(jīng)過(guò)多次條件篩選，最終確定了進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度、程序升溫等色譜與質(zhì)譜條件，建立了測(cè)定大鼠血漿中莪術(shù)油效應(yīng)成分濃度的GC-MS法。方法學(xué)考察結(jié)果顯示，該方法所得色譜圖的峰形良好，各待測(cè)物色譜峰均基線分離，且未受血漿內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，具有靈敏度高、檢測(cè)速度快的特點(diǎn)，可用于大量生物樣品的定量分析；同時(shí)，由于靈敏度的提高，本研究對(duì)大鼠血樣的采集量也有所減少，符合生物樣品定量分析的相關(guān)要求[14]。

3.4 結(jié)果分析

單一化合物的藥動(dòng)學(xué)研究結(jié)果顯示，α-蒎烯、1，8-桉葉油素、龍腦、β-欖香烯、莪術(shù)醇、吉馬酮、莪術(shù)二酮在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（如cmax、tmax、t1/2、AUC0-t、AUC0-∞）差異較大，其中α-蒎烯與吉馬酮、莪術(shù)二酮的AUC相差近百倍，提示任何單一成分的藥動(dòng)學(xué)行為均很難準(zhǔn)確反映莪術(shù)油的整體藥動(dòng)學(xué)行為。為此，本研究以各成分AUC0-∞與所有成分AUC0-∞之和的比值為ωj[4]，計(jì)算整合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果顯示整合前，各單體化合物藥動(dòng)學(xué)參數(shù)cmax、tmax、t1/2、AUC0-t、AUC0-∞分別為（34.72±9.97）～（2 420.04±708.51）ng/mL、（0.67±0.29）～（2.33±0.29）h、（7.14±0.67）～（19.86±4.05）h、（100.55±8.27）～（16 501.24±663.88）ng·h/mL、（146.28±10.74）～（28 198.87±4 102.62）ng·h/mL；整合后，莪術(shù)油整體藥動(dòng)學(xué)參數(shù)cmax、tmax、t1/2、AUC0-t、AUC0-∞分別為1 880.94 ng/mL、0.50 h、11.22 h、13 050.89 ng·h/mL、19 015.21 ng·h/mL，與整合前差異較大。整合后的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)充分兼顧了α-蒎烯、1，8-桉葉油素、龍腦、β-欖香烯、莪術(shù)醇、吉馬酮、莪術(shù)二酮的特性，且以莪術(shù)醇、莪術(shù)二酮和吉馬酮對(duì)其結(jié)果的貢獻(xiàn)較大（ωj較大）；同時(shí)，整合后的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)更能代表莪術(shù)油的整體藥動(dòng)學(xué)行為，避免了單一成分對(duì)其體內(nèi)代謝過(guò)程的片面闡述[19]。

綜上所述，本研究建立的GC-MS法可用于莪術(shù)油多效應(yīng)成分血藥濃度的檢測(cè)及藥動(dòng)學(xué)研究；整合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)可一定程度上更全面地表征莪術(shù)油在體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程。但本研究所得結(jié)果只能用于表征莪術(shù)油在大鼠體內(nèi)的整體藥動(dòng)學(xué)特征，考慮到中藥藥效的多重性與復(fù)雜性，仍需對(duì)其整合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)與整體藥效作用的相關(guān)性進(jìn)行進(jìn)一步分析。

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（收稿日期：2018-03-20 修回日期：2018-08-14）

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