宋奇琦 王露蓉 農(nóng)友業(yè) 楊麗濤 李楊瑞

摘要：【目的】研究不同甘蔗品種與黑穗病菌長期互作過程中相關酶活性及內源激素含量的變化，為甘蔗應答黑穗病菌侵染的抗性機制提供理論依據(jù)?！痉椒ā窟x用抗黑穗病品種桂糖29號和感黑穗病品種崖城71-374，用浸漬法接種黑穗病菌，對照組用無菌水模擬接菌。在接菌后30、60、90和180 d取甘蔗+1位葉為樣品，分析幾丁質酶、β-1，3-葡聚糖酶和過氧化氫酶（CAT）活性及生長素（IAA）、細胞分裂素（CTK）和乙烯（ETH）含量的變化?！窘Y果】在整個侵染期間，兩個甘蔗品種葉片的幾丁質酶活性、β-1，3-葡聚糖酶活性及IAA、CTK含量呈逐步降低或波動下降趨勢，均在接種后180 d達最低值，而CAT活性整體上呈上升趨勢，在接種后180 d達最高值；其中抗性品種桂糖29號的β-1，3-葡聚糖酶活性和ETH含量在整個浸染過程均高于感病品種崖城71-374?！窘Y論】甘蔗在不同時期應答黑穗病菌脅迫的生理生化反應不同，感病品種與抗病品種的防御機制可能存在差異。

關鍵詞： 甘蔗；黑穗病菌；酶活性；內源激素

中圖分類號： S435.661 文獻標志碼：A 文章編號：2095-1191（2018）04-0650-06

Changes of related enzyme activity and endogenous hormone content in sugarcane response to smut fungus infection

SONG Qi-qi1， Pratiksha Singh1， Rajesh Kumar Singh1， WANG Lu-rong1，

NONG You-ye1， YANG Li-tao1，2*， LI Yang-rui1，2*

（1College of Agriculture， Guangxi University/State Key Laboratory for Conservation and Utilization Subtropical Agro-bioresources， Nanning 530004， China；2Sugarcane Research Center， Chinese Academy of Agricultural Sciences/Key Laboratory of Sugarcane Biotechnology and Genetic Improvement， Ministry of Agriculture/Guangxi Key Laboratory of Sugarcane Genetic Improvement，Nanning 530007， China）

Abstract：【Objective】The changes of related enzyme activities and endogenous hormone contents in different sugarcane varieties during the long term interaction with smut fungus were studied to provide theoretical basis to illustrate the resistance mechanism of sugarcane to smut fungus infection. 【Method】The smut-resistant variety GT29 and the smut-susceptible variety Yacheng 71-3744 were selected to be inoculated with smut fungus by dipping method； the control group was treated with sterile water to conduct simulated inoculation with fungus. Sugarcane +1 leaf samples were taken at 30， 60， 90 and 180 d respectively after the inoculation treatment， the changes of chitinase，β-1，3-glucanase and catalase（CAT） activities， and auxin（IAA）， cytokinin（CTK） and ethylene（ETH） contents were analyzed. 【Result】During the entire infection period， activities of chitinase and β-1，3-glucanase and contents of IAA and CTK the two sugarcane varie-ties leaves showed the trends of gradual decrease or fluctuating decrease， and they reached the lowest level 180 d after ino-culation. But the activity of CAT showed an increasing trend and reached the highest level 180 d after inoculation. β-1，3-glucanase activity and ETH content in the smut-resistant variety GT29 were always higher than those in the smut-susceptible variety Yacheng 71-3744 during the whole infection period. 【Conclusion】Physiological and biochemical responses of sugarcane to smut fungus stress are different at different growth stages，which may reflect different defense mechanisms between the susceptible variety and the resistant variety.

Key words：sugarcane； smut fungus； enzyme activity； endogenous hormone

0 引言

【研究意義】甘蔗是重要的生物能源作物，種植在包括中國在內的90多個國家。在甘蔗種植區(qū)，黑穗病已成為全球性的重要疾病，且患病率逐年提高。黑穗病感染嚴重時，可造成甘蔗生產(chǎn)20%～50%的損失（Martinez et al.，2000），但目前人們對甘蔗黑穗病菌的作用機制仍知之甚少。已有研究證明，一些酶活性和激素與植物抵御病害的能力密切相關（顧麗紅等，2008；莫鳳連等，2012）。因此，研究甘蔗感染黑穗病后酶活性和激素的變化可為揭示甘蔗與病原菌互作機制提供依據(jù)，同時為甘蔗抗性育種提供參考。【前人研究進展】幾丁質酶、β-1，3-葡聚糖酶、過氧化氫酶（CAT）均為植物抗真菌病害的相關酶。目前，已將外源幾丁質酶基因導入煙草（Broglie et al.，1991）、油菜（藍海燕等，2000）、馬鈴薯（周思軍等，2000）、西瓜（王果萍等，2003）和水稻（袁紅旭等，2009）等植物中，發(fā)現(xiàn)其可有效提高植株的抗病能力。顧麗紅等（2008）將幾丁質酶基因及β-1，3-葡聚糖酶基因同時導入甘蔗品種ROC10和ROC22中，所得植株的抗黑穗病能力有不同程度增加。莫鳳蓮等（2012）通過研究甘蔗接種黑穗病菌后內源激素含量變化，發(fā)現(xiàn)甘蔗葉片中生長素（IAA）、赤霉素（GA）、脫落酸（ABA）、水楊酸（SA）含量及IAA/ABA的變化與甘蔗抗性密切相關。蘇亞春（2014）研究發(fā)現(xiàn)，甘蔗抗性品種崖城05-179在感黑穗病初期的幾丁質酶、β-1，3-葡聚糖酶和CAT活性均高于感病品種柳城03-182，可能這些酶活性與甘蔗黑穗病抗性有一定聯(lián)系。王彥芹等（2017）利用RAN-Seq研究海島棉應答黃萎病時與激素代謝相關差異基因表達，發(fā)現(xiàn)大多基因表達產(chǎn)生變化?！颈狙芯壳腥朦c】酶和激素各具作用和特點，二者在合成和分泌上相互影響，共同調控機體抗性。目前針對甘蔗黑穗病的試驗大部分在感病初期，通過甘蔗與病原菌的長期互作來探討其應答機制的研究較少?！緮M解決的關鍵問題】測定不同抗性品種甘蔗在不同時期的相關酶活性和激素含量變化，并比較分析其差異，為探討甘蔗對黑穗病的抗性機制及甘蔗抗黑穗病育種提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

供試材料選用甘蔗品種桂糖29（GT29）和崖城71-374（Yacheng 71-374），由廣西農(nóng)業(yè)科學院甘蔗研究所提供。其中，GT29經(jīng)歷年試驗調查觀察，發(fā)現(xiàn)其新植和宿根均表現(xiàn)為高抗黑穗?。◤垬s華等，2011）；Yacheng 71-374經(jīng)鑒定為高感黑穗病品種（高軼靜等，2013）。黑穗病孢子收集于品種ROC22。

1. 2 試驗方法

于2016年4～11月在廣西大學甘蔗智能溫室大棚進行試驗。將蔗種砍成單芽段，水浴鍋中50 ℃浸種2 h后進行沙培育苗。育苗1個月后，每個品種分別挑選60株長勢一致的幼苗，用無菌水清洗后分成兩組。一組幼苗在黑穗病孢子濃度為5×106/mL懸浮液中浸泡2 h作為處理組，另一組幼苗用無菌水浸泡2 h作為對照組。將幼苗移栽至直徑36.3 cm、內高30.0 cm的塑料桶中，置于廣西大學甘蔗智能溫室內，分別在接菌后30、60、90和180 d分別取+1葉作為樣品。采集的樣品用蒸餾水清洗后擦干，去中脈，液氮冷凍，于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 3 PCR檢測

使用植物DNA提取試劑盒（北京康為世紀生物科技有限公司）從GT29和Yacheng 71-374感病及對照植株中提取基因組DNA；通過HP Fungal DNA Kit試劑盒（Omega Bio-Tek）提取黑穗病冬孢子DNA作為陽性對照，無菌水為陰性對照。用黑穗病菌檢測引物bE4（5'-CGCTCTGGTTCATCAACG-3'）和bE8（5'-TGCTGTCGATGGAAGGTGT-3'）檢測甘蔗是否感染黑穗病菌。引物bE4/bE8能擴增出黑穗病菌基因組序列上的一段特異序列，長度為459 bp（Albert and Schenck，1996）。PCR產(chǎn)物送至生工生物工程（上海）股份有限公司進行凝膠純化、克隆和測序。

1. 4 測定項目及方法

樣品采集后，分別進行幾丁質酶、β-1，3-葡聚糖酶和CAT活性及內源激素IAA、細胞分裂素（CTK）和乙烯（ETH）含量測定。酶活性和激素含量均使用植物酶聯(lián)免疫吸附劑測定（ELISA）試劑盒（武漢基因美生物科技有限公司）進行測定。所有試驗均重復3次。

1. 5 統(tǒng)計分析

使用Excel 2007對試驗數(shù)據(jù)進行整理。

2 結果與分析

2. 1 PCR檢測結果

瓊脂糖凝膠電泳檢測結果（圖1）表明，GT29和Yacheng 71-374接種黑穗病的植株與陽性對照均可擴增出459 bp左右的條帶，對照植株則無此條帶。PCR擴增的目的基因片段序列與GenBank中公布的bEast交配型基因序列相同，證實處理組甘蔗已感染黑穗病菌（GenBank登錄號為KY575283-KY575284）。

2. 2 與黑穗病菌長期互作中甘蔗抗性相關酶活性的變化

2. 2. 1 幾丁質酶活性變化 由圖2可看出，抗性品種GT29在接種黑穗病菌后30 d時的幾丁質酶活性高于對照且此時活性最高，為193.26 U/gFW，接菌后60 d幾丁質酶活性降至39.41 U/gFW，90 d 時為37.35 U/gFW，180 d時降至-205.94 U/gFW。感病品種Yacheng 71-374的表現(xiàn)與GT29相似，在接種黑穗病菌后30 d幾丁質酶活性最高（565.06 U/gFW），此后幾丁質酶活性逐步降低，接菌后180 d降至最低值（-450.23 U/gFW）。可見，接種黑穗病菌后，兩個甘蔗品種葉片的幾丁質酶活性呈逐步降低趨勢，以感病品種的酶活性下降幅度相對較大。

2. 2. 2 β-1，3-葡聚糖酶活性變化 由圖3可看出，抗性品種GT29在接種黑穗病菌后30、60和90 d的β- 1，3-葡聚糖酶活性均高于對照，在接菌后180 d時β- 1，3-葡聚糖酶活性驟降至-913.91 U/gFW。與對照相比，感病品種Yacheng 71-374的β-1，3-葡聚糖酶活性在接菌后30、60和90 d呈現(xiàn)“升—降—升”的變化趨勢，在接菌后180 d降至-1053.24 U/gFW。接菌后30～180 d，抗病品種GT29的β-1，3-葡聚糖酶活性均高于感病品種Yacheng 71-374。

2. 2. 3 CAT活性變化 如圖4所示，在接種黑穗病菌后的30、60、90和180 d，與對照相比，抗性甘蔗品種GT29的CAT活性呈“降—降—降—升”的變化趨勢，感病品種Yacheng 71-374的CAT活性呈“降— 降—升—升”的變化趨勢，二者均在接菌后180 d CAT活性達最高值，分別為10.86和41.16 U/gFW。兩個品種CAT活性的變化趨勢與幾丁質酶活性變化完全相反，推測植物在不同時期對病原菌侵染的應答不同。

2. 3 與黑穗病菌長期互作中甘蔗內源激素含量的變化

2. 3. 1 IAA含量變化 由圖5可看出，接種黑穗病菌后30、60和90 d，抗病品種GT29的IAA含量均高于對照，其中在接菌后60 d含量最高（554.39 ng/gFW），接菌后180 d，IAA含量降至最低（-271.07 ng/gFW）。感病品種Yacheng 71-374的IAA含量在接菌后30和60 d時較對照升高，在接菌后90和180 d時較對照降低，其中180 d時的含量最低（-1359.54 ng/gFW）。IAA含量變化趨勢與幾丁質酶活性變化趨勢完全相同，其在甘蔗感病后期含量降低，表明在抵御黑穗病菌侵染時，IAA含量可能與幾丁質酶的表達存在一定聯(lián)系。

2. 3. 2 CTK含量變化 由圖6可看出，在接種黑穗病菌后的30、60、90和180 d，與對照相比，抗病品種GT29的CTK含量變化趨勢為“升—升—降—降”，在接菌后30 d CTK含量最高（22.49 ng/gFW）。感病品種Yacheng 71-374的CTK含量變化趨勢為“升—升—升—降”，在接菌后60 d其CTK含量最高（7.94 ng/gFW），此后呈逐漸降低趨勢。CTK含量變化趨勢與IAA含量變化相似，但在接菌后90 d時有所不同。

2. 3. 3 ETH含量變化 由圖7可看出，在接種黑穗病菌后的30、60、90和180 d，與對照相比，抗病品種GT29的ETH含量變化趨勢為“升—降—升—升”，而感病品種Yacheng 71-374的ETH含量一直低于對照且整體上呈下降趨勢。GT29的ETH含量在不同時期均高于Yacheng 71-374。

3 討論

植物在受到病菌入侵后會啟動一系列防衛(wèi)反應來增強自身免疫力，阻止或延緩病原菌進一步侵染。本研究發(fā)現(xiàn)，在甘蔗與黑穗病菌長期互作過程中，其葉片中與抗性有關的酶活性及激素含量不斷變化，可能反映出不僅植物會啟動一系列防衛(wèi)反應，病原菌也會不斷發(fā)生相應的適應變化，是一個復雜的互作過程。

幾丁質酶可降解幼嫩菌絲細胞壁，而成熟菌絲細胞壁主要成分為幾丁質和β-1，3-葡聚糖。幾丁質酶能催化幾丁質進而抑制真菌菌絲的生長和繁殖（Adams，2004）；β-1，3-葡聚糖酶不僅可破壞病原菌細胞壁抑制真菌的生長，其水解產(chǎn)物——寡糖產(chǎn)物還可作為激發(fā)子誘導植物抗性系統(tǒng)（王廷璞等，2010）。因此，幾丁質酶與β-1，3-葡聚糖酶常共同作用來抑制真菌生長，增強植物對病原菌的抗性（陳愛葵等，2010）。在本研究中，幾丁質酶和β-1，3-葡聚糖酶活性變化相似，但在接種黑穗病菌后60和90 d時存在差異，其原因可能是黑穗病菌在不同時間生長發(fā)育情況不同，或還有其他物質參與調控，如β-1，3-葡聚糖酶易受水楊酸、乙烯、脫落酸等物質的調控（蘇亞春，2014）。甘蔗在感染黑穗病前期感病品種Yacheng 71-374的幾丁質酶活性高于抗病品種GT29。根據(jù)劉守偉等（2009）的研究結果，黃瓜在接種枯萎病后，抗性品種的幾丁質酶活性在48和72 h兩次達峰值，感病品種只在60 h時達峰值。推測抗病品種GT29的幾丁質酶活性在接種黑穗病菌后的前30 d已出現(xiàn)表達峰值，早于感病品種Yacheng 71-374。本研究重點觀察酶活性的整體變化趨勢，發(fā)現(xiàn)整個感病過程甘蔗葉片中幾丁質酶活性呈逐步降低的趨勢。

目前已證實，植物在遭受與氧化反應相關的生物或非生物脅迫時，CAT可保護植物免受或減少氧化損傷（Mhamdi et al.，2010）。本研究發(fā)現(xiàn)，兩個甘蔗品種葉片CAT活性與幾丁質酶活性的變化趨勢完全相反，CAT活性呈逐步上升趨勢。在感病前期CAT活性降低，可能是病原菌入侵后植物最初的防衛(wèi)反應是增加活性氧產(chǎn)生，造成局部細胞死亡，進而阻止病原菌進一步侵染，增加的活性氧主要為過氧化氫，對CAT活性造成競爭性抑制，與Peters等（2017）的研究結果一致。不僅植物會產(chǎn)生過氧化氫，已有研究發(fā)現(xiàn)病原菌也會在植物中釋放和積累過氧化氫。李欣（2007）通過檢測多株植物黃單胞菌菌株CAT釋放情況，發(fā)現(xiàn)幾乎所有病原菌細胞中均有過氧化氫的產(chǎn)生和積累，說明病原菌也會造成植物的氧化損傷。故推測在感病前期，植物主要通過幾丁質酶、β-1，3-葡聚糖酶和增加活性氧等來延緩病原菌侵染；在感病后期，黑穗病菌已大量繁殖，植物通過CAT等來清除病原菌造成的損傷。

本研究發(fā)現(xiàn)，甘蔗感染黑穗病后葉片的IAA含量與幾丁質酶活性變化趨勢完全相同；CTK含量除接菌后90 d時，其他時期與幾丁質酶活性變化也相同。離體研究結果表明，IAA和CTK會調控煙草幾丁質酶的表達（歐陽石文等，2002）。許多植物病原菌可自身產(chǎn)生IAA或控制植物的IAA合成，進而破壞寄主的生長和發(fā)育，植物同樣可能通過調控其他通路來保護自己（王曉莉，2008）。整體推測，隨著黑穗病菌的不斷入侵、蔓延，抑制了植物體內IAA和CTK等的合成，進而幾丁質酶活性降低，這時植物會通過增加CAT活性等來降低病原菌侵染的影響。

本研究還發(fā)現(xiàn)，抗性品種GT29的β-1，3-葡聚糖酶活性和ETH含量在整個研究時期均高于感病品種Yacheng 71-374。該結果也暗示了ETH對植物抗病有積極作用，可能是不同抗性品種在應答黑穗病侵染防御機制方面存在差異的重要生理生化基礎。盡管β-1，3-葡聚糖酶活性和ETH含量與抗病能力間存在一定相關性，但由于植物防御系統(tǒng)很復雜且有許多其他因素組成，今后此方面還需進一步研究。

4 結論

通過研究甘蔗與黑穗病菌長期互作過程中抗性相關酶活性和內源激素含量變化，發(fā)現(xiàn)幾丁質酶、β-1，3-葡聚糖酶活性及IAA和CTK含量總體上呈下降趨勢，而CAT活性呈上升趨勢。表明甘蔗在不同時期應答黑穗病菌脅迫的生理生化反應不同，感病品種與抗病品種的防御機制可能存在差異，對于其作用機制尚需進一步研究。

參考文獻：

陳愛葵，莊文宋，陳冬梅. 2010. 植物幾丁質酶及其基因工程研究進展[J]. 廣東教育學院學報，30（3）：47-53. [Chen A K，Zhuang W S，Chen D M. 2010. Advances in the research on genetic engineering of plant chitinase[J]. Journal of Guangdong Education Institute，30（3）：47-53.]

高軼靜，張革民，張榮華，宋煥忠，羅霆，段維興，賢武，廖江雄，周會，游建華. 2013. 甘蔗優(yōu)良新品種（系）的黑穗病抗性鑒定[J]. 中國糖料，（2）：25-26. [Gao Y J，Zhang G M，Zhang R H，Song H Z，Luo T，Duan W X，Xian W，Liao J X，Zhou H，You J H. 2013. Evaluation of resistance to smut disease in new sugarcane varieties and breeding lines[J]. Sugar Crops of China，（2）：25-26.]

顧麗紅，張樹珍，楊本鵬，蔡文偉，黃東杰，王文治，李嬌. 2008. 幾丁質酶和β-1，3-葡聚糖酶基因導入甘蔗[J]. 分子植物育種，6（2）：277-280. [Gu L H，Zhang S Z，Yang B P，Cai W W，Huang D J，Wang W Z，Li J. 2008. Introduction of chitin and β-1，3-glucan into sugarcane[J]. Molecular Plant Breeding，6（2）：277-280.]

藍海燕，王長海，張麗華，劉桂珍，王嵐蘭，陳正華，田穎川. 2000. 導入β-1，3-葡聚糖酶及幾丁質酶基因的轉基因可育油菜及其抗菌核病的研究[J]. 生物工程學報，16（2）：26-30. [Lan H Y，Wang C H，Zhang L H，Liu G Z，Wang L L，Chen Z H，Tian Y C. 2000. Studies on transgenic oilseed rape（Brassica napus） plants transformed with beta-1，3-glucanase and chitinase genes and its resistance to Sclerotinia sclerotiorium[J]. Chinese Journal of Biotechnology，16（2）：26-30.]

李欣. 2007. 植物病原細菌中內源過氧化氫的產(chǎn)生、功能及其在與植物互作中的作用[D]. 蘭州：蘭州大學. [Li X. 2007. Production and roles of endogenous hydrogen peroxide in

phytopathogenic bacteria and its roles in the interaction

with plant[D]. Lanzhou：Lanzhou University.]

劉守偉，吳鳳芝，馬艷玲. 2009. 枯萎病菌對不同抗性黃瓜品種幾種酶活性的影響[J]. 植物保護，35（1）：82-85. [Liu S W，Wu F Z，Ma Y L. 2009. Effects of fusarium wilt pathogen on the enzyme activity of cucumber cultivars of different resistance[J]. Plant Protection，35（1）：82-85.]

莫鳳連，楊麗濤，潘如科，宋修鵬，李楊瑞. 2012. 甘蔗黑穗病菌脅迫對甘蔗內源激素含量的影響[J]. 南方農(nóng)業(yè)學報，43（11）：1676-1681. [Mo F L，Yang L T，Pan R K，Song X P，Li Y R. 2012. Changes of endogenous hormone content in sugarcane under smut pathogen stress[J]. Journal of Southern Agriculture，43（11）：1676-1681.]

歐陽石文，趙開軍，馮蘭香. 2002. 植物中幾丁質酶的作用[J]. 生物學通報，（6）：13-14. [Ouyang S W，Zhao K J，F(xiàn)eng L X. 2002. The role of chitinase in plants[J]. Bulletin of Biology，（6）：13-14.]

蘇亞春. 2014. 甘蔗應答黑穗病菌侵染的轉錄組與蛋白組研究及抗性相關基因挖掘[D]. 福州：福建農(nóng)林大學. [Su Y C. 2014. Transcriptomics and proteomics of sugarcane response to Sporisorium scitamineum infection and mi-ning of resistance-related genes[D]. Fuzhou：Fujian Agriculture and Forestry University.]

王果萍，王景雪，孫毅，崔貴梅，孟玉平，喬燕祥. 2003. 幾丁質酶基因導入西瓜植株及其抗病性鑒定研究[J]. 植物遺傳資源學報，4（2）：104-109. [Wang G P，Wang J X，Sun Y，Cui G M，Meng Y P，Qiao Y X. 2003. Transformation of watermelon plants with chintinase gene and evaluation for fusarium wilt resistance[J]. Journal of Plant Genetic Resources，4（2）：104-109.]

王廷璞，馬靜靜，趙菲佚. 2010. β-1，3-葡聚糖酶和幾丁質酸在農(nóng)作物病蟲害防治中的研究進展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學，38（26）：14417-14419. [Wang T P，Ma J J，Zhao F Y. 2010. Research advance of β-1，3-glucanase and chitinase in controlling insect pests of crops[J]. Journal of Anhui A-gricultural Sciences，38（26）：14417-14419.]

王曉莉. 2008. 生長素信號對植物生長與系統(tǒng)性獲得抗性的調控作用[D]. 南京：南京農(nóng)業(yè)大學. [Wang X L. 2008. Effects of auxin on the coordinate regulation of plant growth and systemic acquired resistance[D]. Nanjing：Nanjing Agricultural University.]

王彥芹， 邰紅忠，練文明，盧金寶，武剛. 2017. 基于RNA-Seq的海島棉“新海17號”黃萎病菌處理的表達譜分析[J]. 分子植物育種，15（8）：2912-2920. [Wang Y Q，Tai H Z，Lian W M，Lu J B，Wu G. 2017. Expression profile ana-lysis of gossypium barbadense “Xinhai 17” under verticillium wilt stress by RNA-Seq[J]. Molecular Plant Bree-ding，15（8）：2912-2920.]

袁紅旭，許新萍，張燕娟，劉晚茍，郭建夫. 2009. 轉抗真菌基因水稻對紋枯病的抗性表達分析[J]. 植物保護學報，36（6）：504-508. [Yuan H X，Xu X P，Zhang Y J，Liu W G，Guo J F. 2009. Analysis on resistance to sheath blight of transgenic rice with extra anti-fungual genes[J]. Acta Phytophylacica Sinica，36（6）：504-508.]

張榮華，何紅，張革民，劉海斌，李楊瑞，方鋒學，宋煥忠，方位寬，閉少玲. 2011. 宿根性特強甘蔗新品種桂糖29號的選育[J]. 中國糖料，（1）：1-4. [Zhang R H，He H，Zhang G M，Liu H B，Li Y R，F(xiàn)ang F X，Song H Z，F(xiàn)ang W K，Bi S L. 2011. Breeding of new sugarcane variety Guitang 29 with high ratoon ability[J]. Sugar Crops of China，（1）：1-4.]

周思軍，李希臣，劉昭軍，劉文萍，南相日. 2000. 通過農(nóng)桿菌介導將菜豆幾丁質酶基因導入馬鈴薯[J]. 中國馬鈴薯，14（2）：70-72. [Zhou S J，Li X C，Liu Z J，Liu W P，Nan X R. 2000. Introduction of chitinase gene from kidney bean into potato by agrobacterium mediated transformation[J]. Chinese Potato，14（2）：70-72.]

Adams D J. 2004. Fungal cell wall chitinases and glucanases[J]. Microbiology，150（7）：2029-2035.

Albert H H，Schenck S. 1996. PCR amplification from a homolog of the bE mating-type gene as a sensitive assay for the presence of Ustilago scitaminea DNA[J]. Plant Disease，80（10）：1189-1192.

Broglie K，Chet I，Holliday M，Cressman R，Biddle P，Knowlton S，Mauvais J C，Broglie R. 1991. Transgenic plants with enhanced resistance to the fungal pathogen rhizoctonia solani[J]. Science，24（5035）：1194-1197.

Martinez M，Medina I，Naranjo S，Rodriguez C，Armas R，Pinon D，Vicente C，Legaz M E. 2000. Changes of some chemical parameters，involved in sucrose recovery from sugarcane juices，related to the susceptibility or resistance of sugarcane plants to smut（Ustilagoscitaminea）[J]. Indian Sugar，50（6）：341-346.

Mhamdi A，Queval G，Chaouch S，Vanderauwera S，Van Breusegem F，Noctor G. 2010. Catalase function in plants：A focus on Arabidopsis mutants as stress-mimic models[J]. Journal of Experimental Botany，61（15）：4197-4220.

Peters L P，Carvalho G，Vilhena M B，Creste S，Azevedo R A，Monteiro-Vitorello C B. 2017. Functional analysis of oxidative burst in sugarcane smut-resistant and susceptible genotypes[J]. Planta，245（4）：749-764.

（責任編輯 王 暉）