劉光耀

胰腺癌是目前治療效果最差的惡性腫瘤之一，亟需一種早期診療新方法[1]。人含TCP1伴侶蛋白亞基2(chaperonin containing TCP1 subunit 2，CCT2)是熱休克蛋白60在真核細(xì)胞中的一個(gè)亞型，參與多種細(xì)胞的代謝，在許多惡性腫瘤組織中高表達(dá)，和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后緊密相關(guān)[2-5]。半乳糖凝集素3(Galectin-3)為一種β半乳糖苷結(jié)合蛋白，參與細(xì)胞諸多的生理功能。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)Galectin-3與惡性腫瘤關(guān)系密切[6-9]。本研究檢測胰腺導(dǎo)管腺癌組織、癌旁組織、良性病變及正常胰腺組織CCT2和Galectin-3的表達(dá)，分析其臨床病理學(xué)意義，探討其與胰腺導(dǎo)管腺癌患者預(yù)后的關(guān)系。

資料與方法

一、一般資料

收集2002年1月至2012年12月間中南大學(xué)湘雅第二醫(yī)院肝膽外科和湘雅第三醫(yī)院普外科行胰腺導(dǎo)管腺癌手術(shù)切除的140例患者資料，通過電話或信件回訪及登門回訪，剔除失訪、術(shù)前和術(shù)后行輔助化療者，共106例納入本研究。同期收集距癌組織≥2 cm處癌旁組織35例、胰腺良性病變組織55例(慢性胰腺炎20例、腺瘤20例、上皮內(nèi)瘤變15例)、正常胰腺組織13例作為對(duì)照。記錄胰腺導(dǎo)管腺癌患者的性別、年齡及腫瘤最大徑、分化程度、TNM分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和周圍組織浸潤。隨訪2年，生存時(shí)間>2年者作為刪失病例納入統(tǒng)計(jì)。

二、CCT2和Galectin-3蛋白表達(dá)檢測

采用EnVision免疫組織化學(xué)法檢測CCT2和Galectin-3蛋白表達(dá)。兔抗人CCT2和Galectin-3多克隆抗體購自美國Abgent 公司，EnVisionTM檢測試劑盒購自美國Dako實(shí)驗(yàn)室，嚴(yán)格按說明書操作。以一抗試劑盒中乳腺癌陽性切片作為染色的陽性對(duì)照,以磷酸鹽緩沖液(pH7.4)替代一抗作為染色的陰性對(duì)照。細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞膜中出現(xiàn)黃色至棕黃色顆粒定為CCT2和Galectin-3陽性細(xì)胞。隨機(jī)觀察10個(gè)高倍鏡視野的陽性細(xì)胞,根據(jù)染色強(qiáng)度給予0～3分(無，0分；弱，1分；中，2分；強(qiáng)，3分)，根據(jù)陽性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比給予0～4分(<5%，0分；5%～10%，1分；11%～20%，2分；21%～50%，3分；>50%，4分)，兩者之和為總評(píng)分。總評(píng)分值0～2分為陰性，≥3分為陽性。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)以百分率表示，各變量組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher′s確切概率法；單因素生存分析采用Kaplan-Meier法，生存期差別采用Log-Rank時(shí)序檢驗(yàn)；多因素分析采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、胰腺良惡性病變及正常胰腺組織CCT2和Galectin-3蛋白表達(dá)

106例胰腺導(dǎo)管腺癌組織CCT2、Galectin-3陽性表達(dá)率分別為54.7%(58例)和50.9%(54例)，35例癌旁組織CCT2、Galectin-3陽性表達(dá)率分別為25.7%(9例)和28.6%(10例)，55例胰腺良性病變組織CCT2、Galectin-3陽性表達(dá)率分別為23.6%(13例)和20.0%(11例)， 13例正常胰腺組織均無CCT2、Galectin-3表達(dá)(圖1、2)。胰腺導(dǎo)管腺癌組織CCT2、Galectin-3陽性表達(dá)率顯著高于癌旁、慢性胰腺炎、腺瘤、上皮內(nèi)瘤變及正常胰腺組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均<0.05)。癌旁組織和良性病變組織CCT2、Galectin-3陽性表達(dá)的導(dǎo)管上皮均呈輕至重度非典型增生或Ⅱ、Ⅲ級(jí)上皮內(nèi)瘤變。

圖1 腺癌(1A)、腺瘤(1B)、慢性胰腺炎(1C)組織CCT2蛋白表達(dá)(免疫組化染色 ×200)

圖2 腺癌(2A)、癌旁(2B)、上皮內(nèi)瘤變(2C)組織Galectin-3蛋白表達(dá)(免疫組化染色 ×200)

良性病例中慢性胰腺炎、腺瘤及上皮內(nèi)瘤變的CCT2陽性表達(dá)率分別為20.0%(4/20)、25.0%(5/20)和26.7%(4/15)；Galectin-3陽性表達(dá)率分別為15.0%(3/20)、25.0%(5/20)和20.0%(3/15)，組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、胰腺導(dǎo)管腺癌組織CCT2和Galectin-3表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNMⅢ+Ⅳ期的胰腺導(dǎo)管腺癌患者的CCT2、Galactin-3陽性表達(dá)率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNMⅠ+Ⅱ期患者，周圍組織器官浸潤的胰腺導(dǎo)管腺癌CCT2陽性表達(dá)率顯著高于未浸潤周圍組織器官者，低分化腺癌Galactin-3陽性表達(dá)率顯著高于高分化者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而患者年齡、性別及腫瘤最大徑與CCT2、Galectin-3陽性表達(dá)無明顯相關(guān)性(表1)。

58例胰腺導(dǎo)管腺癌CCT2陽性中40例Galectin-3陽性，48例CCT2陰性中39例Galectin-3陰性，CCT2與Galectin-3表達(dá)顯著相關(guān)(χ2=16.646，P=0.000)。

三、影響胰腺導(dǎo)管腺癌患者生存因素的單因素及多因素分析

106例胰腺導(dǎo)管腺癌患者的生存期為2～24個(gè)月，平均(9.4±0.7)個(gè)月，術(shù)后1、2年生存率分別為 27.3%(29例)、 2.8%(3例)。腫瘤分化程度低、腫瘤直徑大、TNM分期晚、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及周圍組織浸潤、CCT2及Galactin-3 陽性患者的平均生存期均顯著短于分化程度高、腫瘤直徑小、TNM分期早、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及周圍組織浸潤、CCT2及Galactin-3陰性患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2，圖3)。Cox多因素分析結(jié)果顯示，腫瘤分化程度低、腫瘤最大徑≥5 cm、TNMⅢ或Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及周圍組織浸潤、CCT2和Galectin-3表達(dá)陽性為影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(表3)。

討 論

近些年胰腺癌發(fā)生率逐年升高，大多數(shù)患者確診時(shí)已到晚期。目前臨床上常用的腫瘤標(biāo)志物敏感性和特異性均不能滿足早期胰腺癌的診斷，因此亟需尋找一種新的腫瘤標(biāo)志物[1]。CCT2作為一種分子伴侶，參與多種細(xì)胞代謝，在蛋白質(zhì)合成中參與多種蛋白(如肌動(dòng)蛋白和微管蛋白)的折疊以及真核細(xì)胞中蛋白質(zhì)的裝配[10]。近年研究發(fā)現(xiàn)，CCT2在肝細(xì)胞癌、結(jié)腸癌、肝外膽管癌、膽囊癌、胃癌表達(dá)水平明顯高于其良性病變，而正常組織表達(dá)陰性。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，CCT2的表達(dá)水平與腫瘤的分化程度、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)[2-5]。Galectin-3主要存在于細(xì)胞質(zhì)中，參與腫瘤發(fā)生和發(fā)展的各個(gè)方面，包括促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、黏附、分化、轉(zhuǎn)移及新生血管生成等[6-9]。惡性腫瘤患者血清Galectin-3水平明顯升高，且發(fā)生轉(zhuǎn)移患者的血清Galectin-3水平又往往高于未發(fā)生轉(zhuǎn)移者[11]。

表1 胰腺導(dǎo)管腺癌組織CCT2、Galectin-3陽性表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

表2 影響胰腺導(dǎo)管腺癌患者生存的單因素分析

圖3 CCT2陽性與陰性(3A)、Galectin-3陽性與陰性(3B)患者的生存曲線

表3 影響胰腺導(dǎo)管腺癌患者預(yù)后的多因素分析

本研究結(jié)果顯示，胰腺癌組織CCT2、Galactin-3高表達(dá)，其表達(dá)量顯著高于匹配的癌旁組織、胰腺良性病變和正常胰腺組織。胰腺癌組織CCT2、Galactin-3表達(dá)量與腫瘤的分化、浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，且癌旁組織和良性病變CCT2、Galectin-3陽性表達(dá)的導(dǎo)管上皮均呈輕至重度非典型增生或Ⅱ、Ⅲ級(jí)上皮內(nèi)瘤變，提示CCT2和Galectin-3可能參與了胰腺腺瘤從輕度非典型增生到惡變這一過程。此外，CCT2和Galectin-3表達(dá)陽性與患者術(shù)后生存期呈負(fù)相關(guān)，是胰腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

然而，CCT2和Galectin-3的特異性不強(qiáng)，尚不能作為胰腺癌的特異性腫瘤標(biāo)志物，但是否可以作為監(jiān)測腫瘤的進(jìn)展或轉(zhuǎn)移、判斷手術(shù)或化療藥物療效的指標(biāo)有待進(jìn)一步研究。