李恒濤，王根在，朱洪慶，林束珠，王春艷，平獻(xiàn)紅，喬玉蘭，冉貴萍，杜金龍

(1.上海市奉賢區(qū)奉城醫(yī)院兒科；2.檢驗(yàn)科，上海 201411)

隨著生活水平的提高及生活模式的改變，兒童青少年肥胖的發(fā)病率迅速上升，且發(fā)病年齡呈明顯的低齡趨勢(shì)[1]。國(guó)內(nèi)諸多研究表明，中國(guó)青少年肥胖發(fā)展速度快于歐美發(fā)達(dá)國(guó)家[2-3]。因此闡明兒童青少年肥胖的發(fā)病機(jī)制，對(duì)減少2型糖尿病、動(dòng)脈硬化、高脂血癥等多種能縮短預(yù)期壽命的疾病的發(fā)生，改善人群生活質(zhì)量意義重大。鋅-α2-糖蛋白(Zinc-alpha2-glycoprotein,ZAG)是一種新型的脂肪細(xì)胞因子，可加速體內(nèi)脂肪分解，減少脂肪堆積，具有改善肥胖的作用，在預(yù)防和治療肥胖及代謝性疾病方面日益受到關(guān)注。血漿攝食抑制因子(NUCB2/Nesfatin-1)是一種強(qiáng)有力的厭食分子，有報(bào)道顯示其抑制攝食的作用具有劑量和時(shí)間依賴的特點(diǎn)[4]。新近發(fā)現(xiàn)的肥胖抑制素(obestatin)具有促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的作用。由于ZAG、Obestatin及NUCB2/Nesfatin-1都和肥胖的發(fā)生發(fā)展具有相關(guān)性，而三者在肥胖兒童青少年血清的表達(dá)水平及其影響因素至今未見(jiàn)全面報(bào)道，本文旨在探討ZAG、NUCB2/Nesfatin-1及Obestatin在肥胖兒童青少年血清中表達(dá)水平的相關(guān)影響因素，為更好的理解兒童青少年肥胖的發(fā)病機(jī)制提供參考依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2015年2月—2017年1月在上海市奉賢區(qū)奉城醫(yī)院門(mén)診就診及奉城鎮(zhèn)中小學(xué)生體檢的單純性肥胖兒童青少年共125例作為肥胖組，年齡7～15歲，男性68例，女性57例，平均身高(145±26)cm。選擇同一時(shí)期體檢的身體質(zhì)量指數(shù)(body mass index,BMI)正常的兒童、青少年共90例作為對(duì)照組，年齡7～15歲，男性48例，女性42例，平均身高(143±24)cm。兩組入選者年齡、性別、身高比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，具有可比性。

肥胖組入選標(biāo)準(zhǔn)[5]：年齡7～15歲，BMI大于同年齡同性別2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差，排除因甲狀腺功能降低、腎上腺皮質(zhì)增生癥等引起的繼發(fā)性肥胖。無(wú)心、肝、肺、腎等重要臟器疾病，無(wú)血糖、血壓、血脂異常。檢測(cè)前1個(gè)月未服用任何藥物，無(wú)糖尿病家族史，無(wú)手術(shù)史，無(wú)外傷史。排除標(biāo)準(zhǔn)：自身免疫性疾病、甲狀腺疾病、內(nèi)分泌系統(tǒng)及代謝性疾病。所有入選對(duì)象均告知其本人及監(jiān)護(hù)人本次研究的目的，在自愿的基礎(chǔ)上書(shū)面簽署知情同意書(shū)。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1.2研究方法

人體參數(shù)測(cè)定：所有受試者的人體參數(shù)由專(zhuān)門(mén)人員測(cè)定并詳細(xì)記錄，內(nèi)容項(xiàng)包括：身高、體重、腰圍、臀圍、血壓、體內(nèi)脂肪百分比(Fat%，由TBF-410體脂分析儀測(cè)量)，計(jì)算得出BMI[BMI=體重(kg)/身高(m)2]、腰臀比(WHR，WHR=腰圍/臀圍)。

生化指標(biāo)測(cè)定：要求患者空腹10h于次日清晨采集靜脈血8mL，靜脈血分成兩份，一份測(cè)量空腹血糖(FBG)、糖化血紅蛋白(HbAlc)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)，均由日立7600自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)，采用穩(wěn)態(tài)模型計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR，HOMA-IR=FPG×FINS/22.5)。另一份經(jīng)常溫離心5min(3 000r/min)，分離血漿后于-80℃冰箱內(nèi)保存待測(cè)ZAG、NUCB2/Nesfatin-1、Obes￣tatin、空腹胰島素(FINS)。

采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)測(cè)量血清ZAG (Raybiotech公司，檢測(cè)范圍：0.1～1 000ng/mL，最低檢測(cè)限21pg/mL，批內(nèi)變異系數(shù)3.0%～4.7%，批間變異系數(shù)6.5%～6.6%)、NUCB2/Nesfatin-1(美國(guó)Phoenix Pharmaceuticals，檢測(cè)范圍：0.78～50μg/L，批內(nèi)變異系數(shù)<15%、批間變異系數(shù)<10%)、Obestatin(美國(guó)Uscnlife)、FINS(美國(guó)Thermo)，檢測(cè)方法嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1肥胖組與對(duì)照組一般臨床指標(biāo)比較

肥胖組與對(duì)照組人群一般臨床指標(biāo)比較結(jié)果顯示，兩組在年齡、性別比例、FINS、HOMA-IR方面無(wú)明顯差異，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，具有可比性。但兩組人群在BMI、Fat%、WHR、FBG、HbA1c、HDL-C、 LDL-C、TC、TG方面肥胖組明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2/t值分別為5.37、7.11、9.10、7.02、5.00、4.60、4.82、3.99、8.21，均P<0.05)，而肥胖組ZAG、NUCB2/Nesfatin-1、obestatin明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為8.00、6.68、7.19，均P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組人群一般臨床指標(biāo)比較

(續(xù)表1)

2.2 ZAG、obestatin及NUCB2/Nesfatin-1對(duì)兒童青少年肥胖的診斷價(jià)值

繪制ROC曲線顯示，ZAG對(duì)兒童青少年肥胖診斷的靈敏度、特異度分別為79.21%、82.48%，診斷的曲線下面積為0.779(95%CI：0.671～0.862)；obestatin對(duì)兒童青少年肥胖診斷的靈敏度、特異度分別為80.32%、84.62%，診斷的曲線下面積為0.792(95%CI：0.687～0.882)；NUCB2/Nesfatin-1對(duì)兒童青少年肥胖診斷的靈敏度、特異度分別為83.56%、87.82%，診斷的曲線下面積為0.814(95%CI:0.701～0.911)。說(shuō)明ZAG、obestatin及NUCB2/Nesfatin-1對(duì)兒童青少年肥胖具有較高的診斷價(jià)值，見(jiàn)圖1。

圖1 ZAG、obestatin及NUCB2/Nesfatin-1對(duì)兒童青少年肥胖診斷的ROC曲線

2.3肥胖兒童青少年血清ZAG水平影響因素的Logistic回歸分析

為研究肥胖兒童青少年血清中ZAG與各研究指標(biāo)的相關(guān)性，對(duì)肥胖組血液中ZAG水平進(jìn)行Spearman相關(guān)分析結(jié)果表明，ZAG與BMI、Fat%、FBG、LDL-C、TC、WHR呈正相關(guān)(r值分別為0.343、0.275、0.514、0.428、0.265、0.417， 均P<0.05)，與FINS、HOMA-IR呈負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.267、-0.372，均P<0.05)，與TG、HDL-C、LDL-C相關(guān)性不顯著，進(jìn)一步以ZAG為因變量，以BMI、Fat%、FBG、LDL-C、TC、WHR為自變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示BMI、WHR是肥胖兒童青少年血清ZAG水平的獨(dú)立影響因素，見(jiàn)表2。

表2 肥胖兒童青少年血清ZAG水平影響因素的Logistic回歸分析

2.4肥胖兒童青少年血清obestatin水平影響因素的Logistic回歸分析

經(jīng)Spearman相關(guān)分析結(jié)果表明，血清obestatin的水平與BMI、Fat%、WHR、TG、FINS、HOMA-IR、HDL-C呈正相關(guān)(r值分別為0.214、0.326、0.311、0.251、0.142、0.263、0.306，均P<0.05)，與HbA1c、LDL-C、TC呈負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.205、-0.362、-0.257，均P<0.05)，與FBG相關(guān)性不顯著。多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，BMI、HDL-C是肥胖兒童青少年血清obestatin水平的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，見(jiàn)表3。

表3 肥胖兒童青少年血清obestatin水平影響因素的Logistic回歸分析

2.5肥胖兒童青少年血清NUCB2/Nesfatin-1水平影響因素的Logistic回歸分析

線性相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，血清NUCB2/Nesfatin-1的水平與BMI、WHR、FBG、HbA1c、FINS、HOMA-IR呈明顯正相關(guān)(r值分別為0.202、0.275、0.313、0.355、0.237、0.379，均P<0.05)，經(jīng)Logistic回歸分析結(jié)果表明BMI和HOMA-IR是影響肥胖兒童青少年血清NUCB2/Nesfatin-1水平的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，見(jiàn)表4。

表4 肥胖兒童青少年血清NUCB2/Nesfatin-1水平影響因素的Logistic回歸分析

3討論

3.1兒童青少年肥胖的危害及其預(yù)防的重要性

兒童青少年肥胖可引發(fā)脂質(zhì)代謝紊亂、胰島素抵抗、非酒精性脂肪肝等，如果不控制，可發(fā)展為成年心血管疾病。研究表明，中重度肥胖兒童頸內(nèi)動(dòng)脈中層厚度明顯增加，已存在早期血管病變，單純性肥胖兒童不僅與高血流動(dòng)力學(xué)狀態(tài)有關(guān)，而且可增強(qiáng)腎素-血管緊張素-醛固酮(RAAS)系統(tǒng)，促進(jìn)心臟肥厚和血壓升高[6-7]，因此預(yù)防兒童青少年肥胖對(duì)于提高兒童青少年健康意義重大。

3.2 ZAG、obestatin及NUCB2/Nesfatin-1表達(dá)水平的影響因素分析

ZAG是一種新型脂肪細(xì)胞因子，它能激活解耦聯(lián)蛋白，增加產(chǎn)熱，促進(jìn)脂肪利用，其表達(dá)下調(diào)可增加肥胖個(gè)體脂肪組織的易感性，在肥胖小鼠中的研究表明ZAG表達(dá)與BMI呈負(fù)相關(guān)[8]。其在2型糖尿病患者血液中水平明顯升高，其水平與BMI、腰圍呈明顯正相關(guān)[9]。本次研究發(fā)現(xiàn)，ZAG在肥胖兒童青少年血清中的表達(dá)水平低于對(duì)照組，經(jīng)Logistic回歸分析得到 BMI、WHR是影響肥胖兒童青少年血清ZAG表達(dá)水平的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，說(shuō)明肥胖兒童青少年的BMI、WHR影響血清ZAG的水平，患者越肥胖，BMI越高，則血清ZAG水平相對(duì)正常值可能越低，對(duì)脂肪的分解和利用會(huì)進(jìn)一步降低，則會(huì)導(dǎo)致肥胖的進(jìn)一步加重。

Obestatin是一種多肽分子，可促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化，在肥胖患者中起重要作用，有研究顯示obestatin在肥胖的糖尿病患者中水平比正常組和單純肥胖組均更低，在成人單純性肥胖者體內(nèi)，BMI、HOMA-IR與obestatin呈負(fù)相關(guān)，多元回歸分析表明BMI、HOMA-IR是影響obestatin水平的獨(dú)立相關(guān)因素[10]。本次研究結(jié)果顯示obestatin水平在肥胖兒童青少年中比對(duì)照組水平明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，經(jīng)Logistic回歸分析得到BMI、HDL-C是影響血清obestatin表達(dá)水平的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。Obestatin在肥胖者體內(nèi)水平低于正常者水平，本次研究結(jié)果得到obestatin在肥胖組體內(nèi)表達(dá)水平同樣低于對(duì)照組，obestatin在肥胖者體中低水平表達(dá)可能是對(duì)身體能量正平衡的反應(yīng)，其表達(dá)低水平則抑制脂肪細(xì)胞的分解，可能參與兒童青少年肥胖的發(fā)生發(fā)展。

NUCB2/Nesfatin-1是一種飽食分子，在機(jī)體能量平衡中發(fā)揮重要作用，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明大劑量的NUCB2/Nesfatin-1能抑制攝食，從而減輕體重改善肥胖，但目前在2型糖尿病患者血漿NUCB2/Nesfatin-1的水平報(bào)道不一致，有明顯高于正常人也有低于正常人[11-12]，另有報(bào)道在成人肥胖人群中，血漿NUCB2/Nesfatin-1的水平較正常人群具有升高趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[13]。本次研究結(jié)果顯示，在肥胖兒童青少年中NUCB2/Nesfatin-1的水平明顯低于對(duì)照組。本次研究結(jié)果與成人肥胖研究結(jié)果不一致的原因可能與受試對(duì)象不同有關(guān)， NUCB2/Nesfatin-1在肥胖兒童青少年中表達(dá)水平下降，則抑制攝食的作用下調(diào)，導(dǎo)致患者更易肥胖，但目前關(guān)于其抑制攝食的調(diào)節(jié)機(jī)制尚未明確，仍有待進(jìn)一步研究。

3.3小結(jié)

綜上所述，肥胖兒童青少年血清存在ZAG、obestatin及NUCB2/Nesfatin-1的表達(dá)水平降低，并且BMI是影響三者表達(dá)水平變化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示血清ZAG、obestatin及NUCB2/Nesfatin-1可能參與了兒童青少年肥胖的發(fā)生發(fā)展，但是其具體的調(diào)節(jié)機(jī)制還需進(jìn)一步研究。