朱慧慧 白 巖

1 浙江省湖州市南潯區(qū)中醫(yī)院 浙江 湖州 313009

2 浙江農(nóng)林大學(xué) 浙江 臨安 311300

梔子來(lái)源于茜草科Rubiaceae植物梔子Gar denia j asminoides El l is的干燥成熟果實(shí)，其性寒味苦，入心、肝、肺、胃經(jīng)。目前對(duì)梔子的研究比較成熟，但對(duì)梔子花的研究卻甚少,偶有學(xué)者涉及[1]。本試驗(yàn)旨在分析不同采摘時(shí)期和炮制方法對(duì)含量測(cè)定的影響，從而確定最佳采摘時(shí)期和最佳炮制方法的最優(yōu)組合，為梔子花藥材質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器：Water s 600高效液相色譜儀；精密分析天平（FA2104N）；無(wú)級(jí)可調(diào)臺(tái)式超聲清洗器（SK8200HP）；超純水器（Mil l ipor e Simpl icit y型）；循環(huán)水式多用真空泵（SHB-IIIA河南省太康科教器材廠）。

1.2 試劑：甲醇（一級(jí)色譜純，天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司）；梔子苷對(duì)照品（純度≥98%，上海同田生物制品有限公司，序列號(hào)為4866/2010）；超純水為實(shí)驗(yàn)室自制。

1.3 材料：以不同采摘時(shí)期的梔子花和蕾作為原料，采用不同的炮制方法對(duì)原料進(jìn)行處理，粉碎，待用?；?：花盛開(kāi)，花色潔白；花2：花近開(kāi)敗，顏色發(fā)黃；蕾1：蕾長(zhǎng)約5cm，花瓣緊卷，頂部綠色；蕾2：蕾長(zhǎng)約6cm，花瓣略松，近開(kāi)放。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：色譜柱（shimpack HRC-ODS分析柱4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇∶水=30∶70（v/v）；流速：1ml/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm；進(jìn)樣量：10μl。

2.2 溶液制備：具體如下。

2.2.1 對(duì)照品溶液制備：精密稱(chēng)取梔子苷對(duì)照品2.4mg（精確到0.01mg）置10ml容量瓶中，加甲醇-水（1∶1，v/v）至刻度，搖勻，配成梔子苷含量為240μg/ml的儲(chǔ)備液。取一定量的儲(chǔ)備液，用甲醇-水（1∶1，v/v）稀釋成濃度為30、60、120、240μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，備用。

2.2.2 供試品溶液制備：將梔子花細(xì)粉過(guò)四號(hào)篩，精密稱(chēng)取1g，精確到0.0001g，置50ml容量瓶中，采用甲醇-水（1∶1，v/v）作為提取溶劑，本試驗(yàn)采用段起[2]等人在測(cè)定梔子苷時(shí)使用的方法，按照超聲提取技術(shù)進(jìn)行提取，提取時(shí)間為1h，功率為250w。再加甲醇-水同濃度的定容至50ml，搖勻。按上述方法將每種梔子花分別提取后，待用。將提取溶液分別抽濾，取濾液經(jīng)0.45μm微孔濾膜再次過(guò)濾，取1ml濾液用甲醇-水（1∶1，v/v）定容至25ml，作為梔子花供試品溶液[3]。

2.3 方法學(xué)考察：具體如下。

2.3.1 線性關(guān)系考察：精密稱(chēng)取梔子苷對(duì)照品2.4mg，精確到0.01mg，置10ml容量瓶中，加甲醇-水（1∶1，v/v）至刻度，搖勻，配成梔子苷含量為240μg/ml的儲(chǔ)備液。取一定量的儲(chǔ)備液，用甲醇-水（1∶1，v/v）稀釋成濃度為120、150、180、210、240μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別吸取不同濃度的對(duì)照品10μl，注入高效液相色譜儀，按色譜條件測(cè)定對(duì)照品峰面積，計(jì)算回歸方程。結(jié)果顯示：回歸方程為Y＝198.57x+868.13，r2=0.9973。表明梔子苷對(duì)照品溶液在0～240μg/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

圖1 梔子苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3.2 精密度試驗(yàn)：取標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按照優(yōu)化色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定結(jié)果。經(jīng)測(cè)定計(jì)算，得梔子苷平均峰面積積分值的RSD為1.2%。精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液，按照“2.1”色譜條件，分別準(zhǔn)確吸取10μl樣品液，在建立的色譜分析條件下每1h進(jìn)樣1次，共5次，分析測(cè)定梔子苷含量。測(cè)定梔子苷平均峰面積積分值的RSD為2.6%。結(jié)果表明，采用超聲方法制備的供試品溶液中梔子苷在5h內(nèi)穩(wěn)定。2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批梔子藥材，分別制備6份供試品溶液，在建立的色譜分析條件下分別進(jìn)樣10μl，分析結(jié)果。測(cè)得梔子苷平均含量為2.47%，RSD為2.8%，結(jié)果表明方法重復(fù)性較好。

2.3.5 回收率試驗(yàn)：精密稱(chēng)定已知含量梔子果藥材粉末0.1g各5份，分別精密加入濃度為0.2543mg/ml的對(duì)照品溶液10ml，再分別精密加入40ml的30%甲醇。按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，取10μl在上述色譜條件下測(cè)定梔子苷的含量，分析結(jié)果。結(jié)果表明該方法的回收率良好，見(jiàn)表1。

表1 梔子花中梔子苷含量測(cè)定加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.4 樣品測(cè)定：按“2.1”色譜條件測(cè)定，每個(gè)時(shí)期不同炮制方法的樣品進(jìn)樣3次，求其平均值，記錄數(shù)據(jù)?；?含量平均值：曬干7.4%，直接烘干9.4%，先燙后烘9.9%，先蒸后烘10.2%，炒干7.5%，總平均值8.9%；花2含量平均值：曬干6.6%，直接烘干4.1%，先燙后烘8.2%，先蒸后烘7.1%，炒干6.3%，總平均值6.5%；蕾1含量平均值：曬干3.6%，直接烘干7.4%，先燙后烘7.9%，先蒸后烘8.7%，炒干6.5%，總平均值6.8%；蕾2含量平均值：曬干4.9%，直接烘干8.2%，先燙后烘9.0%，先蒸后烘9.7%，炒干6.6%，總平均值7.7%。不同時(shí)期梔子苷含量：花1＞蕾2＞蕾1＞花2。不同炮制方法梔子苷含量：先蒸后烘＞先燙后烘＞直接烘干＞炒干＞曬干。

3 討論

3.1 不同采摘時(shí)期對(duì)梔子苷影響：梔子花在花盛開(kāi)、花色潔白時(shí)采摘，其中的梔子苷含量最高，由于梔子苷是一種次級(jí)衍生物，是由光合作用生成葡萄糖，然后經(jīng)一系列反應(yīng)生成梔子苷[4]。根據(jù)“源-庫(kù)”理論[4]，梔子在蕾期和花期，花和蕾為最重要的庫(kù)，所以光合產(chǎn)物向花和蕾運(yùn)輸?shù)牧吭诓粩嘣黾樱虼藯d子苷含量隨著花朵的盛開(kāi)也在增加。在花近開(kāi)敗時(shí)，一方面，通過(guò)雙受精已經(jīng)逐漸形成的幼梔子果成為更為強(qiáng)勢(shì)的庫(kù)，光合產(chǎn)物向幼果運(yùn)輸；另一方面，梔子苷有可能隨著花朵的開(kāi)敗而降解，因此梔子花中的梔子苷含量明顯降低。

3.2 不同炮制方法對(duì)梔子苷影響：梔子苷為環(huán)烯醚萜類(lèi)物質(zhì)，易水解，生成梔子苷元，生成的苷元很不穩(wěn)定，易發(fā)生聚合反應(yīng)[5-6]。梔子花采用先蒸后烘、先燙后烘的炮制方法，高溫使梔子花中的梔子苷水解酶破壞，經(jīng)過(guò)這樣的處理，梔子苷在烘干的過(guò)程中不易被破壞，所以先蒸后烘和先燙后烘的梔子花中梔子苷的含量較高。另外，通過(guò)短時(shí)間的蒸制，內(nèi)部水分外逸，需要烘制的時(shí)間就少，梔子苷破壞的就少，所以含量較高。而先燙后烘會(huì)使一小部分梔子苷溶于水中而丟失，所以先燙后烘的炮制方法得到的梔子花中的梔子苷含量略低于先蒸后烘的。由于直接烘干的溫度較低且時(shí)間較長(zhǎng)，酶被破壞失活的時(shí)間也較長(zhǎng)，梔子苷被酶解的時(shí)間較長(zhǎng)，所以直接烘干的梔子花中梔子苷含量較低；而炒干的溫度過(guò)高，梔子苷極易被破壞，所以炒干中梔子苷含量也較低；梔子花通過(guò)曬干得到，因?yàn)楫?dāng)時(shí)氣溫較低，又正值梅雨季節(jié)，所以需要曬干的時(shí)間較長(zhǎng)，長(zhǎng)期暴露在空氣中可能會(huì)使梔子苷大量水解和丟失，導(dǎo)致此種方法得到的梔子花中梔子苷含量最低。

3.3 梔子果與梔子花中梔子苷含量比較：本次試驗(yàn)測(cè)出，梔子花中梔子苷的含量在4%～10%之間，而段起[2]等人測(cè)出梔子果實(shí)中梔子苷的含量只有2%～4%之間，可以看出梔子花中梔子苷的含量明顯較高。在以往用藥習(xí)慣中只以梔子果實(shí)入藥，通過(guò)本次試驗(yàn)可以看出梔子花中的梔子苷含量更高，在今后可以多關(guān)注梔子花的開(kāi)發(fā)與利用。根據(jù)“源-庫(kù)”理論，梔子通過(guò)疏花，還可以提高梔子果的外觀形狀和內(nèi)在品質(zhì)，如大小、顏色以及成分含量等。疏下來(lái)的梔子花也可以進(jìn)行再利用。為梔子藥材質(zhì)量控制提供一定的依據(jù)。

此次試驗(yàn)證明梔子花中含有梔子苷成分，在花盛開(kāi)，花色潔白時(shí)采摘，并采用先蒸后烘的炮制方法梔子苷含量最高，且梔子花中的梔子苷含量要高于梔子果實(shí)中的。