龔 萍, 楊 宇, 楊永平, 王麗霞, 鄧 兵, 凌明湖, 陳 星, 葉勝強(qiáng)*

(1. 武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所，湖北 武漢 430208；2. 武漢市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，湖北 武漢 430016)

畜禽舍內(nèi)的空氣質(zhì)量是對畜禽生存、生長、發(fā)育、繁殖和生產(chǎn)均有重要影響的生態(tài)環(huán)境因子之一[1]，影響畜禽舍內(nèi)空氣質(zhì)量的因素主要包括畜禽舍內(nèi)的有害氣體(如NH3、H2S、CO2等)、病原微生物、粉塵等。目前，我國許多畜禽養(yǎng)殖場呼吸道疾病、生殖系統(tǒng)疾病等增多，畜禽的生產(chǎn)性能也有下降的趨勢，這些狀況與畜禽舍內(nèi)的空氣質(zhì)量不良有著很大的關(guān)系[2-3]。隨著畜牧業(yè)集約化、規(guī)?；l(fā)展，畜禽舍內(nèi)的空氣質(zhì)量已成為影響畜禽健康狀態(tài)與生產(chǎn)性能的主要問題之一。要保持畜禽正常的生存、生長和生產(chǎn)狀態(tài)，必須采取有效措施，為畜禽提供良好的環(huán)境?？莶菅挎邨U菌(Bacillussubtilis)是一種綠色、無污染的新型飼料添加劑，能調(diào)節(jié)或維持腸道微生態(tài)平衡，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，促進(jìn)動(dòng)物生長，具有耐胃酸、耐高溫、穩(wěn)定性強(qiáng)等優(yōu)勢[4]，是益生菌中應(yīng)用最為廣泛的菌種之一。目前，有關(guān)枯草芽孢桿菌應(yīng)用于動(dòng)物生產(chǎn)中的研究報(bào)道已經(jīng)很多[5-6]，但大多集中在其對畜禽生產(chǎn)性能等動(dòng)物機(jī)體本身的影響方面，而對其在養(yǎng)殖環(huán)境中的應(yīng)用卻鮮見報(bào)道。本試驗(yàn)以實(shí)驗(yàn)室前期分離篩選出的枯草芽孢桿菌作為益生菌添加到飼料中，并以能有效改善鴨舍養(yǎng)殖環(huán)境的商品化復(fù)合芽孢桿菌為陽性對照，研究其對鴨舍內(nèi)有害氣體含量、微生物數(shù)量的影響，旨在為肉鴨的健康養(yǎng)殖及益生菌在控制鴨舍內(nèi)空氣質(zhì)量中的應(yīng)用提供適用的參考和科學(xué)的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

枯草芽孢桿菌由實(shí)驗(yàn)室分離篩選并制備(活菌數(shù)為1×109CFU/g)；復(fù)合芽孢桿菌(含有枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌，活菌數(shù)為3×1010CFU/g)，由某公司提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取2周齡體重相近健康櫻桃谷肉鴨600只，隨機(jī)分為3組，每組隔為一個(gè)獨(dú)立區(qū)域，每組內(nèi)隔成4個(gè)獨(dú)立小欄，每個(gè)小欄50只。1組為對照組，飼喂基礎(chǔ)日糧(空白對照)，2～3組在基礎(chǔ)日糧中分別添加2 g/kg枯草芽孢桿菌(試驗(yàn)組)和1 g/kg復(fù)合芽孢桿菌(陽性對照)，試驗(yàn)期4周?；A(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air dry basis)

注：每千克預(yù)混料中含：維生素A 8 000 IU，維生素D33 000 IU，維生素E 25 IU，維生素K3 4 mg，維生素B12.5 mg，維生素B25 mg，維生素B65 mg，維生素B120.01 mg，煙酸50 mg，泛酸20 mg，葉酸1 mg，生物素0.03 mg，氯化膽堿500 mg，銅10 mg，鐵30 mg，鋅79.35 mg，錳63.6 mg，碘0.5mg，硒0.2 mg。

Notes:Premix supplied per kilogram of: VA 8 000 IU, VD33 000 IU, VE 25 IU, VK34 mg, VB12.5 mg, VB25 mg, VB65 mg, VB120.01 mg, Nicotinic acid 50 mg, Pantothenic acid 20 mg, Folic acid 1 mg, Biotin 0.03 mg, Choline chloride 500 mg, Cu 10 mg, Fe 30 mg, Zn 79.35 mg, Mn 63.6 mg, I 0.5mg, Se 0.2 mg.

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在武漢市農(nóng)科院試驗(yàn)鴨場進(jìn)行，采用發(fā)酵床網(wǎng)上養(yǎng)殖模式，自由采食和飲水，其他飼養(yǎng)管理措施、免疫程序按鴨場常規(guī)管理程序進(jìn)行。試驗(yàn)鴨飼養(yǎng)至42日齡結(jié)束。

1.4 指標(biāo)檢測

1.4.1 鴨舍空氣中有害氣體含量的檢測 于試驗(yàn)的第7 d、14 d、21 d、28 d上午10:00，在每個(gè)試驗(yàn)組的每個(gè)重復(fù)組各取5個(gè)點(diǎn)，按照四角及對角線交點(diǎn)的方式分布采樣點(diǎn)，并避開通風(fēng)口。采樣時(shí)，記錄室內(nèi)溫濕度與天氣狀態(tài)。分別采用Honeywell霍尼韋爾硫化氫檢測儀、BW氨氣檢測儀測定NH3(檢測限1.52～380 mg/m3)和H2S(檢測限1.52～152 mg/m3)含量。

1.4.2 鴨舍空氣中微生物數(shù)量的檢測 于試驗(yàn)的第7 d、14 d、21 d、28 d上午10:30，在每個(gè)試驗(yàn)組的每個(gè)重復(fù)組各取5個(gè)點(diǎn)，采用自然沉降法收集空氣中的微生物。按照四角及對角線交點(diǎn)的方式分布采樣點(diǎn)，在采樣點(diǎn)分別放置營養(yǎng)瓊脂平板、沙氏瓊脂平板、伊紅美藍(lán)平板、SS培養(yǎng)基平板和B-P培養(yǎng)基平板(培養(yǎng)基均購自青島海博生物技術(shù)有限公司)，依次測定菌落總數(shù)、真菌總數(shù)、大腸桿菌、“沙門+志賀”氏菌和金黃色葡萄球菌數(shù)量。按照奧氏公式計(jì)算菌落總數(shù)：每立方米菌落數(shù)(CFU/m3)=50000×每皿菌落數(shù)/(培養(yǎng)皿面積(cm2)×采樣時(shí)間(min))。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2007和SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 枯草芽孢桿菌對鴨舍空氣中有害氣體含量的影響

在發(fā)酵床網(wǎng)上養(yǎng)殖模式下，各試驗(yàn)組鴨舍空氣中NH3檢測結(jié)果見表2。由表2可見，H2S檢測值均小于1.52 mg/m3，各組間差異不顯著(P>0.05)，未列出。由表2可看出，在櫻桃谷肉鴨15～42日齡時(shí)間段，各組鴨舍中NH3含量均隨著日齡的增大而逐漸增多；與對照組相比，試驗(yàn)2組、3組舍內(nèi)NH3含量分別降低了7.19%、6.24%，但差異均不顯著(P>0.05)。

表2 枯草芽孢桿菌對鴨舍空氣中NH3含量的影響Table 2 Effects of the Bacillus subtilis on the concentration of NH3 in duck house

2.2 枯草芽孢桿菌對鴨舍空氣中微生物數(shù)量的影響

各試驗(yàn)組鴨舍空氣中微生物檢測結(jié)果見表3。由表3可看出，在櫻桃谷肉鴨21～42日齡時(shí)間段，對照組鴨舍中微生物含量隨著日齡的增大整體呈現(xiàn)上升趨勢。2組、3組的細(xì)菌總數(shù)在第1、2、3、4周均極顯著低于對照組，2組在第4周顯著低于3組；真菌總數(shù)在所有檢測時(shí)間點(diǎn)三組之間均差異不顯著(P>0.05)；2組、3組的大腸桿菌數(shù)在第2、3、4周極顯著低于對照組，2組與3組間差異不顯著；2組、3組的“沙門+志賀”氏菌數(shù)在第1、3、4周極顯著低于對照組，在第2周顯著低于對照組，2組與3組間差異不顯著；2組、3組的金黃色葡萄球菌數(shù)在第2周顯著低于對照組，在第3、4周極顯著低于對照組，2組在第4周極顯著低于3組?？傮w來看，與對照組相比，2組、3組的細(xì)菌總數(shù)分別降低36.57%(P<0.01)、33.66%(P<0.01)，大腸桿菌數(shù)分別降低29.02%(P<0.01)、26.86%(P<0.01)，“沙門+志賀”氏菌數(shù)分別降低39.47%(P<0.01)、44.74%(P<0.01)，金黃色葡萄球菌數(shù)分別降低29.79%(P<0.01)、25.96%(P<0.01)，真菌總數(shù)分別降低6.36%(P>0.05)、7.27%(P>0.05)。

表3 枯草芽孢桿菌對鴨舍空氣中微生物數(shù)量的影響Table 3 Effects of the Bacillus subtilis on the concentration of microorganism in duck house

注：同行不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)；不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。

Note: In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and different capital letter superscripts mean extremely significant difference (P<0.01).

3 討 論

3.1 枯草芽孢桿菌對鴨舍空氣中有害氣體含量的影響

畜禽養(yǎng)殖環(huán)境中有害氣體含量是評價(jià)畜禽舍環(huán)境質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。鴨舍內(nèi)的有害氣體主要包括NH3、H2S等，會(huì)對肉鴨的健康、生產(chǎn)性能以及養(yǎng)殖效益造成嚴(yán)重影響。當(dāng)舍內(nèi)NH3、H2S濃度升高時(shí)，可使畜禽的氣管和支氣管上皮的纖毛發(fā)生萎縮或脫落而失去其正常的功能，破壞有效抵御病原微生物入侵的第一道防線，使細(xì)菌、病毒等病原微生物有機(jī)可乘，而導(dǎo)致畜禽疾病的發(fā)生[7-8]。陳登科等[9]研究發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加乳酸菌與芽孢桿菌的復(fù)合微生態(tài)制劑可降低鴨舍內(nèi)NH3、H2S和CO2的濃度；朱振等[10]在櫻桃谷肉鴨日糧中添加枯草芽孢桿菌與地衣芽孢桿菌的復(fù)合微生態(tài)制劑，1 000 g/t添加組可顯著降低舍內(nèi)NH3濃度，維持良好的舍內(nèi)空氣質(zhì)量，促進(jìn)肉鴨健康生長。本試驗(yàn)采用發(fā)酵床網(wǎng)上養(yǎng)殖模式，具有較好的舍內(nèi)環(huán)境控制效果，H2S濃度未達(dá)到最小檢測值，均小于1.52 mg/m3，低于我國對禽舍中H2S含量不得超過10 mg/m3為限的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[11]；日糧中添加枯草芽孢桿菌、復(fù)合芽孢桿菌后，舍內(nèi)NH3含量與對照組相比差異不顯著(P>0.05)，但呈現(xiàn)降低的趨勢，且平均NH3濃度均低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[11]。表明在日糧中添加枯草芽孢桿菌可一定程度上降低NH3對肉鴨的應(yīng)激作用，改善鴨舍內(nèi)空氣質(zhì)量。

3.2 枯草芽孢桿菌對鴨舍空氣中微生物數(shù)量的影響

畜禽舍內(nèi)的病原微生物可直接影響動(dòng)物疫病的發(fā)生與傳播，是影響畜禽生產(chǎn)性能的重要環(huán)境因素之一，已成為評估畜禽健康風(fēng)險(xiǎn)的重要指標(biāo)[12-13]。畜禽舍空氣中的微生物主要包括致病微生物、條件性致病微生物和非致病微生物[14]。其中部分極少量的致病微生物可直接導(dǎo)致畜禽的呼吸道感染，一定含量的選擇性致病微生物在適宜的條件下可能致病，非致病微生物在高濃度下也可能導(dǎo)致機(jī)體免疫負(fù)荷過重、對疫苗的免疫應(yīng)答力下降、抗病力降低和易感性增強(qiáng)等，進(jìn)而對機(jī)體產(chǎn)生威脅[15-16]。已有的研究證實(shí)，利用復(fù)合微生物制劑能夠有效降低環(huán)境微生物含量，改善環(huán)境質(zhì)量。高杰[17]將枯草芽孢桿菌與地衣芽孢桿菌聯(lián)合使用添加到日糧中，可顯著降低肉雞舍內(nèi)需氧菌總量和金黃色葡萄球菌含量；仝永娟等[18]在肉雞舍中噴灑解淀粉芽孢桿菌和蘇云金芽孢桿菌，可有效抑制舍內(nèi)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的生長；應(yīng)詩家等[19]在蛋鴨“地面平養(yǎng)+水池”養(yǎng)殖模式中聯(lián)合使用枯草芽孢桿菌(添加到日糧中)和光合細(xì)菌(添加到水池中)，顯著降低了養(yǎng)殖環(huán)境載鴨水體中的大腸桿菌和“沙門+志賀”氏菌數(shù)量。與本試驗(yàn)研究結(jié)果一致，在飼糧中添加枯草芽孢桿菌，可顯著降低鴨舍環(huán)境中的細(xì)菌總數(shù)、大腸桿菌、“沙門+志賀”氏菌及金黃色葡萄球菌數(shù)量，且與商品化益生菌的效果一致；試驗(yàn)中添加的枯草芽孢桿菌活菌數(shù)低于復(fù)合芽孢桿菌活菌數(shù)，但兩者效果基本相當(dāng)，且部分指標(biāo)甚至優(yōu)于復(fù)合芽孢桿菌，這可能由于復(fù)合芽孢桿菌存在張日俊[20]提出的市售微生態(tài)制劑常見質(zhì)量問題，如用法用量不確切、活菌量標(biāo)示值與實(shí)際值不相符等，但在本試驗(yàn)中均能顯著降低舍內(nèi)微生物數(shù)量，改善舍內(nèi)生態(tài)環(huán)境質(zhì)量，進(jìn)而減少對肉鴨健康潛在的威脅，提高生產(chǎn)性能。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，日糧中添加枯草芽孢桿菌可在一定程度上降低舍內(nèi)NH3含量，顯著降低舍內(nèi)細(xì)菌總數(shù)、大腸桿菌、“沙門+志賀”氏菌及金黃色葡萄球菌的數(shù)量，改善舍內(nèi)生態(tài)環(huán)境質(zhì)量。

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