豆 玲,豆思遠(yuǎn)

(甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅 蘭州 730046)

布魯氏菌病(布病) 是一種由布氏桿菌引起的人畜共患傳染病，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為 B類傳染病，是國(guó)際貿(mào)易檢疫中必檢的傳染病。近幾年來(lái)，隨著養(yǎng)牛(尤其是奶牛) 業(yè)的發(fā)展，牛及其制品調(diào)運(yùn)越來(lái)越頻繁，致使奶牛布魯氏菌病疫情在一些地方有所抬頭。加強(qiáng)布魯氏菌病的監(jiān)測(cè)，撲殺陽(yáng)性牛是控制奶牛布魯氏菌病的關(guān)鍵措施之一。

根據(jù) GB/T18646-2002國(guó)標(biāo)中規(guī)定，虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBT)、試管凝集試驗(yàn)(SAT) 和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)等經(jīng)典試驗(yàn)方法為我國(guó)動(dòng)物布病的診斷技術(shù)。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，新的快速方便的檢測(cè)技術(shù)不斷出現(xiàn)，酶聯(lián)免疫試驗(yàn)(ELISA)是近幾年研制出來(lái)的一種快速檢測(cè)技術(shù)，是OIE規(guī)定的在國(guó)際貿(mào)易中指定的檢測(cè)診斷方法之一。

對(duì)選用的抗原與ELISA試劑盒質(zhì)控進(jìn)行質(zhì)控，再利用虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBT)、試管凝集試驗(yàn)(SAT)和抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA試驗(yàn)三種方法，分別對(duì)甘肅地區(qū)某奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)1167份血清進(jìn)行了檢測(cè)，并將這3種方法進(jìn)行了比較，并對(duì)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試劑

虎紅平板凝集試驗(yàn)、試管凝集試驗(yàn)所用抗原及對(duì)照，均購(gòu)自青島易邦生物工程有限公司。布魯氏菌抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒購(gòu)自瑞典Svanova公司。

1.2 被檢樣品

在甘肅省河西地區(qū)隨機(jī)抽取4個(gè)奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)，采集樣品共計(jì)1 167份。

1.3 方法

RBT、SAT依據(jù)GB/T18646-2002國(guó)標(biāo)中的規(guī)定的方法操作和判定結(jié)果，布魯氏菌抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 布病試劑質(zhì)量控制

包括抗原質(zhì)控與ELISA試劑盒質(zhì)控

1.5 數(shù)據(jù)分析

結(jié)果數(shù)據(jù)采用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，用X2檢驗(yàn)比較不同方法的陽(yáng)性檢出率，P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 抗原與ELISA試劑盒質(zhì)控

虎紅抗原質(zhì)控選擇國(guó)標(biāo)等同陽(yáng)性血清，用生理鹽水稀釋：1/25，1/40，1/45，1/55，1/100。經(jīng)三次重復(fù)試驗(yàn)，稀釋度為1/45時(shí)反應(yīng)陽(yáng)性，1/55時(shí)反應(yīng)陰性。ELISA試劑盒質(zhì)控選擇ANSES中列出合格批次，國(guó)標(biāo)等同陽(yáng)性血清，稀釋度：1/16，1/64。每個(gè)稀釋度做20個(gè)重復(fù)，每個(gè)試劑盒選2塊板。稀釋度為1/16時(shí)反應(yīng)陽(yáng)性，1/64時(shí)反應(yīng)陰性。

2.2 三種檢測(cè)方法結(jié)果比較

通過(guò)表1可知，利用抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA試驗(yàn)檢出陽(yáng)性樣品數(shù)量最多，虎紅平板凝集試驗(yàn)次之，試管凝集試驗(yàn)最少。2次重復(fù)試驗(yàn)，均使用同一批次的試劑并在相同環(huán)境條件下進(jìn)行。抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA試驗(yàn)、RBT與SAT檢出陽(yáng)性率分別為7.80%、4.11%、2.66%。對(duì)上述三種檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行兩兩比較?？贵w競(jìng)爭(zhēng)ELISA試驗(yàn)與虎紅平板試驗(yàn)、試管凝集試驗(yàn)相比，抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA陽(yáng)性檢出率較高(P<0.05)。虎紅平板試驗(yàn)與試管凝集試驗(yàn)相互比較，檢出陽(yáng)性率率均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，結(jié)果見(jiàn)表 2。

表1 三種檢測(cè)方法結(jié)果比較

2.3 試驗(yàn)敏感性與符合率比較

由表3可知，試管凝集試驗(yàn)檢出的31份陽(yáng)性樣品中，虎紅平板凝集試驗(yàn)和抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA試驗(yàn)也均為陽(yáng)性，符合率為100%?；⒓t平板凝集試驗(yàn)檢出的48份陽(yáng)性樣品，抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA試驗(yàn)均為陽(yáng)性，符合率為100%，但抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA試驗(yàn)檢出的91份陽(yáng)性樣品，與虎紅平板凝集試驗(yàn)符合率為52.7%，與試管凝集試驗(yàn)符合率為34%，說(shuō)明抗體競(jìng)爭(zhēng)ELISA更為敏感，可能存在假陽(yáng)性。

表2 三種檢測(cè)方法陽(yáng)性檢出率比較

表3 三種檢測(cè)方法敏感性與符合率比較

3 分析與討論

2015年，人間布病全國(guó)甲、乙傳染病發(fā)病順位第7位，全國(guó)劃分為四個(gè)區(qū)域，甘肅屬一類區(qū)，2014-2015年增加910例，變化幅度65.33%，發(fā)病率3.478%。人間布病近幾年雖然得到了有效控制，但是國(guó)家缺乏經(jīng)濟(jì)和社會(huì)資源，缺乏安全、有效、廣泛應(yīng)用的人用苗，這就意味著當(dāng)前的措施微乎其微，只能通過(guò)個(gè)人衛(wèi)生、安全操作、保護(hù)環(huán)境和食品安全來(lái)最小化布病的風(fēng)險(xiǎn)。布病檢測(cè)對(duì)所選抗原和試劑盒進(jìn)行質(zhì)量控制，才能保證結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠性。目前布病診斷有多種方法，但是新型的診斷技術(shù)對(duì)于實(shí)驗(yàn)室條件及環(huán)境有特殊要求，在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室推行還具有很大的局限性。

布病診斷技術(shù)按照國(guó)標(biāo)規(guī)定，虎紅平板凝集試驗(yàn)適用于家畜布病的初篩，注意抗原須在2～8℃保存，避免冷凍，使用前充分混勻，整個(gè)實(shí)驗(yàn)必須按照操作規(guī)程進(jìn)行，避免使用血漿，血清溶血，杜絕假陽(yáng)性。試管凝集試驗(yàn)適用于診斷布病，ELISA可用于檢測(cè)單個(gè)或混合血清樣品，乳樣。敏感性、特異性高，但特異性小于CFT，可用于高通量檢測(cè)，但是該方法尚未列入我國(guó)布病監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

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