秦開烈 張自雄 許昱

硒被認(rèn)為是有效的抗癌劑，硒結(jié)合蛋白1（SBP1）是其在細(xì)胞代謝中產(chǎn)物之一，是發(fā)揮硒抗癌作用的重要中介，且在惡性腫瘤中呈現(xiàn)低表達(dá)趨勢(shì)，并可能與患者預(yù)后密切相關(guān)而成為研究的熱點(diǎn)[1]。SBP1可以存在于細(xì)胞漿和細(xì)胞核，也有報(bào)道提出在不同的細(xì)胞類型、分化程度和環(huán)境信號(hào)下SBP1定位可能有所差異[2]，這種差異甚至可能和腫瘤的惡性程度相關(guān)系。SBP1在人體各種器官組織中均有表達(dá)，包括心臟、肺、腎和腸道等等，但是引起人們關(guān)注的是一些在腫瘤細(xì)胞中的低表達(dá)趨勢(shì)。我們以恩施地區(qū)的鼻咽癌患者作為研究對(duì)象，對(duì)其病理組織標(biāo)本進(jìn)行了檢測(cè)分析，對(duì)其治療后的預(yù)后進(jìn)行了追蹤隨訪，分析結(jié)果如下。

資料與方法

1 臨床資料

選取2007～2012年在我院取材確診為低分化鱗狀細(xì)胞癌并進(jìn)行常規(guī)放化療的99例患者作為研究對(duì)象，其中男67例，女32例，年齡15～73歲，中位數(shù)為56歲。按照TNM標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)分期，如表1。

表1 99例鼻咽癌患者分級(jí)分期情況（例，%）

入組標(biāo)準(zhǔn)為：①在我院病理科取材病理檢查確診為（鼻咽部）低分化鱗狀細(xì)胞癌的患者； ②在我院腫瘤科進(jìn)行了常規(guī)的放射治療（達(dá)到直線加速器根治性劑量標(biāo)準(zhǔn)）和化療（標(biāo)準(zhǔn)方案順鉑+5-氟兩個(gè)療程及以上）；③除患鼻咽癌以外其他身體機(jī)能狀態(tài)良好；④確認(rèn)最后死因?yàn)楸茄拾┧禄虮茄拾┩砥诓l(fā)癥；⑤較好的隨訪依從性。

2 病理組織標(biāo)本檢測(cè)

查找這些鼻咽癌患者蠟封病理組織標(biāo)本，常規(guī)切片再次確認(rèn)鼻咽癌的組織標(biāo)本后進(jìn)行免疫組化檢測(cè)SBP1在標(biāo)本組織中的表達(dá)，其結(jié)果由兩位病理科副主任醫(yī)師進(jìn)行評(píng)判，并進(jìn)行定性評(píng)級(jí)，分為“0～+++”四個(gè)等級(jí)，其中“0”代表病理組織標(biāo)本基本沒(méi)有SBP1表達(dá)，即每高倍視野下未見標(biāo)記蛋白；“+”代表病理標(biāo)本組織有零星或少量SBP1表達(dá)，即每高倍視野下可見標(biāo)記蛋白細(xì)胞少于25%；“++”代表病理標(biāo)本組織有較多的SBP1表達(dá)，即每高倍視野下可見標(biāo)記蛋白細(xì)胞大于25%，但少于50%；“+++”代表病理標(biāo)本組織有大量的SBP1表達(dá)，即每高倍視野下可見標(biāo)記蛋白的細(xì)胞大于50%。最后將“0，+”定義為SBP1在組織標(biāo)本中低表達(dá)，將“++，+++”定義為SBP1在組織標(biāo)本中高表達(dá)。SBP1在鼻咽癌及鼻咽正常黏膜組織表達(dá)的典型表現(xiàn)，見圖1。

圖1 SBP1在病理組織標(biāo)本中表達(dá)水平分級(jí)比較。圖1-A代表“0”；圖1-B代表“+”；圖1-C代表“++”；圖1-D代表“+++”。

3 鼻咽癌患者治療后的追蹤隨訪

通過(guò)整理腫瘤科鼻咽癌患者的跟蹤隨訪記錄，入組病例均達(dá)到了以下隨訪要求：①入組患者每半年有一次電話隨訪記錄，直至死亡或本項(xiàng)研究開始之際；②入組患者每一年有一次入院全身體檢記錄，體檢內(nèi)容包括鼻咽部電子喉鏡檢查、鼻咽部水平位CT、頸部及全身主要臟器彩超檢查，并將復(fù)診結(jié)果記錄在案；③隨訪到鼻咽癌死亡患者能夠精確時(shí)間到月，同時(shí)明確死亡原因?yàn)楸茄拾┗蚱洳l(fā)癥；④本研究的隨訪截止日期為2016年10月。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

運(yùn)用卡方檢驗(yàn)分析鼻咽癌病理組織標(biāo)本中SBP1的表達(dá)趨勢(shì)。運(yùn)用kaplan meier方法分析評(píng)估鼻咽癌患者病理組織標(biāo)本SBP1表達(dá)與患者無(wú)轉(zhuǎn)移生存時(shí)間、無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間以及總體生存時(shí)間的相關(guān)性。運(yùn)用二元邏輯回歸分析評(píng)估SBP1表達(dá)和鼻咽癌患者分級(jí)分期的相關(guān)性。所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 21.0(IBM Corporation,Armonk,NY)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。P值＜0.05被認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1 SBP1在鼻咽癌患者鼻咽病灶組織標(biāo)本中呈現(xiàn)出低表達(dá)趨勢(shì)

利用免疫組化分析將所有鼻咽癌患者病理組織標(biāo)本99例的SBP1表達(dá)進(jìn)行病理醫(yī)師評(píng)判，表達(dá)評(píng)定為 SBP1低表達(dá) 73例，其中“0”級(jí) 58例，“+”級(jí)15例；評(píng)定為SBP1高表達(dá)26例，其中 “++”級(jí)25例，“+++”級(jí) 1 例。通過(guò)分析 χ2=71.303a，P 值為 0，具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 在鼻咽癌患者的病理組織標(biāo)本中的癌巢SBP1表達(dá)與周邊正常組織和覆蓋其上的正常黏膜對(duì)比表達(dá)顯著降低。利用免疫組化對(duì)比分析鼻咽癌的癌巢細(xì)胞與覆蓋的正常黏膜組織和正常淋巴結(jié)組織可以顯示癌細(xì)胞呈現(xiàn)SBP1的顯著低表達(dá)，典型對(duì)比見圖2。

圖2 SBP1在病理組織標(biāo)本中表達(dá)對(duì)比圖。圖2-ABD代表SBP1在周邊正常組織細(xì)胞和癌巢細(xì)胞中表達(dá)對(duì)比；圖2-C代表SBP1在覆蓋的正常黏膜細(xì)胞和其下的癌巢細(xì)胞中表達(dá)對(duì)比。

3 SBP1在鼻咽癌患者鼻咽病灶組織標(biāo)本中的表達(dá)與腫瘤的分級(jí)分期無(wú)明顯相關(guān)性。將鼻咽癌患者病理組織標(biāo)本中的SBP1表達(dá)的高低與患者的TNM及臨床的分期進(jìn)行相關(guān)性分析研究，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯的相關(guān)性，見表2，同時(shí)也說(shuō)明SBP1在組織中的表達(dá)并沒(méi)有隨著腫瘤的進(jìn)展而進(jìn)一步發(fā)生表達(dá)的下

表2 SBP1在病理組織標(biāo)本中的表達(dá)與鼻咽癌患者TNM和臨床分期的相關(guān)性

4 SBP1在鼻咽癌患者鼻咽病灶組織標(biāo)本中的表達(dá)與患者的預(yù)后具有顯著相關(guān)性。通過(guò)對(duì)入組鼻咽癌患者的跟蹤隨訪，記錄患者的無(wú)復(fù)發(fā)生存期、無(wú)轉(zhuǎn)移生存期和總生存期，并與其病理標(biāo)本中SBP1的表達(dá)進(jìn)行對(duì)比分析，其無(wú)復(fù)發(fā)生存期、無(wú)轉(zhuǎn)移生存期和總生存期存在相關(guān)性，見圖3，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖3 SBP1在病理組織標(biāo)本中的表達(dá)與患者生存狀況相關(guān)性分析圖。圖3-A，代表SBP1在病理組織標(biāo)本中的表達(dá)與患者總體生存期相關(guān)性分析圖；圖3-B，代表SBP1在病理組織標(biāo)本中的表達(dá)與患者無(wú)復(fù)發(fā)生存期相關(guān)性分析圖；圖3-C，代表SBP1在病理組織標(biāo)本中的表達(dá)與患者無(wú)轉(zhuǎn)移生存期相關(guān)性分析圖。

討論

SBP1基因差異表達(dá)在人類前列腺癌細(xì)胞中首先被發(fā)現(xiàn)，11株前列腺癌細(xì)胞中僅有4株可以檢測(cè)到SBP1 mRNA的微弱表達(dá)[3]。接下來(lái)類似的現(xiàn)象在其他惡性腫瘤細(xì)胞中也得以證實(shí)，例如在胃腺癌與周邊正常組織黏膜蛋白印跡對(duì)比中發(fā)現(xiàn)SBP1水平明顯減少[4]，而且利用組織芯片檢測(cè)觀察到正常胃黏膜組織、癌前病變組織和癌組織SBP1表達(dá)水平隨著疾病的進(jìn)展而逐步減少的現(xiàn)象[4]，同樣的結(jié)果也在食管腺癌中發(fā)現(xiàn)[5]。通過(guò)蛋白印跡、組織芯片等分析比較SBP1在腫瘤和正常組織出現(xiàn)顯著下降的還包括肺腺癌、直腸癌、食管腺癌、肝細(xì)胞癌、脂肪肉瘤和卵巢癌等[6]。致使SBP1在人類癌癥表達(dá)下降的原因仍有待于確定，一個(gè)可能的解釋是在腫瘤進(jìn)展過(guò)程中失去了SBP1基因部分。近來(lái)有學(xué)者發(fā)現(xiàn)表觀遺傳機(jī)制可能參與SBP1基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，但目前仍無(wú)法得到明確的結(jié)果[7]。然而更吸引研究者興趣的是SBP1在惡性腫瘤中的表達(dá)情況與患者預(yù)后的相關(guān)性，由此可以通過(guò)SBP1的表達(dá)水平來(lái)推斷腫瘤的惡性程度和評(píng)估總體生存時(shí)間。在診斷為胸膜間皮瘤的患者檢測(cè)到27個(gè)基因的表達(dá)與患者的生存率存在相關(guān)性，SBP1就是其中之一[8]。通過(guò)一些回顧性研究，使用蛋白印跡或組織芯片檢測(cè)腫瘤組織中SBP1的表達(dá)，與臨床隨訪的結(jié)果利用kaplan-meier進(jìn)行生存率分析，發(fā)現(xiàn)SBP1表達(dá)越低就意味著越差的總體生存時(shí)間，這些已經(jīng)在直腸癌、肺腺癌、胃癌、肝細(xì)胞癌、乳腺癌和結(jié)腸癌患者中得到了驗(yàn)證[9]，因此，SBP1表達(dá)水平下降被證明是惡性腫瘤患者預(yù)后不良的指標(biāo)之一。

在我們的研究中，99例鼻咽癌患者按照入組要求作為研究對(duì)象，并進(jìn)行了長(zhǎng)期嚴(yán)格的隨訪，同時(shí)對(duì)入組患者的病理組織標(biāo)本進(jìn)行了免疫組化分析，得出了以下結(jié)論：鼻咽癌患者組織標(biāo)本中的SBP1的表達(dá)呈現(xiàn)出下降的趨勢(shì)，主要體現(xiàn)在兩個(gè)方面，一是在入組患者病理標(biāo)本中SBP1低表達(dá)者占據(jù)絕對(duì)優(yōu)勢(shì)（73/99）；二是入組患者病理標(biāo)本中在癌巢細(xì)胞中SBP1的表達(dá)比周邊正常組織中的黏膜和淋巴結(jié)的表達(dá)要明顯減低。這與其他學(xué)者在肺腺癌、直腸癌、食管腺癌、肝細(xì)胞癌、脂肪肉瘤和卵巢癌等[6]研究中發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象保持了一致性，但是SBP1在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)下降的具體機(jī)制仍不清楚，是腫瘤發(fā)生后的伴隨表現(xiàn)還是SBP1在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中扮演了關(guān)鍵角色仍需進(jìn)一步的研究。同時(shí)SBP1的調(diào)控機(jī)制以及在硒代謝中扮演的角色研究甚少，需要進(jìn)一步的研究探索。本研究中第二個(gè)發(fā)現(xiàn)就是鼻咽癌的無(wú)復(fù)發(fā)、無(wú)轉(zhuǎn)移和總體生存期與病理組織標(biāo)本中的SBP1的表達(dá)呈現(xiàn)顯著的相關(guān)性，這一特點(diǎn)可能成為預(yù)測(cè)鼻咽癌患者預(yù)后的標(biāo)志物之一。為進(jìn)一步研究SBP1的表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性，一些研究者對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行了深入研究，SBP1表達(dá)促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散和遷移,加快細(xì)胞分化與血管入侵。相比之下，增強(qiáng)SBP1表達(dá)式可能會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡,抑制細(xì)胞增殖、遷移和腫瘤生長(zhǎng)[10，11]，這些結(jié)果在動(dòng)物身上也被驗(yàn)證。我們進(jìn)一步分析SBP1表達(dá)與鼻咽癌患者TNM分級(jí)和臨床分期之間無(wú)明顯相關(guān)性，由此也可以推測(cè)SBP1在腫瘤的發(fā)展過(guò)程中并無(wú)進(jìn)一步下調(diào)的趨勢(shì)，這一結(jié)論與其他作者在胸膜間皮瘤[8]研究并不一致，因此還需要我們利用更多的數(shù)據(jù)進(jìn)一步的研究證實(shí)。

總之,我們的研究表明鼻咽癌患者病理組織標(biāo)本中SBP1的表達(dá)與正常組織相比有顯著差異，并與鼻咽癌患者的預(yù)后密切相關(guān),這樣的結(jié)論有助于我們對(duì)鼻咽癌患者預(yù)后進(jìn)行評(píng)估。但SBP1的表達(dá)下降的調(diào)控機(jī)制仍不明確且在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用和機(jī)制也有待于進(jìn)一步闡明。

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