包長龍

(內蒙古通遼市食品藥品檢驗所，內蒙古 通遼 028000)

波仁-12(保腎散)的處方由鹿茸、紫河車、杜仲、龜甲(制)、關黃柏、麥冬、冬蟲夏草、巴戟天、鎖陽、黨參、千年健、續(xù)斷等12味單藥組成的散劑。主要用于各種腎病及早期尿毒癥[1]。本試驗對波仁-12(保腎散)中關黃柏藥材中所含的藥用成分鹽酸小檗堿利用HPLC法進行含量測定，結果，測定準確，方法可行，可作為波仁-12(保腎散)的質量控制方法。

1 儀器和試劑

1.1 儀器：島津LC-10AT型高效液相色譜儀(日本產)，SPD-VP紫外檢測器，CLASS-VP色譜工作站，TP-300超聲波清洗機，色譜柱：shim-pack VP-ODS C18柱(250×4.6mm，粒度5μm)。

1.2 試劑與試藥： 甲醇、乙腈(色譜純，天津天大化學試劑廠)；水為試驗用高純水。其它試劑均為分析純。鹽酸小檗堿對照品(編號：110713-201212，供含量測定用，純度98.1%計)：由中國食品藥品檢定研究院提供；供試品由內蒙古通遼市科左中旗蒙醫(yī)院提供。批號為: 20081106、20090205、20090508。

2 方法學考察

2.1 色譜條件： 流動相：乙腈-0.05%磷酸二氫鉀溶液(氫氧化鈉試液調節(jié)PH值至5.0)(30:70)為流動相；流速1.0mL/min；柱溫25℃；檢測波長為346nm；進樣量：10μL[2]。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備： 精密稱取鹽酸小檗堿對照品13.12mg(實際為13.12mg×98.1%=12.87mg)，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1mL含鹽酸小檗堿25.74μg)。

2.2.2 供試品溶液的制備： 精密稱取本品約2g，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸-甲醇(1:100)溶液25mL，稱重，密塞，加熱回流30分鐘，放冷，再稱重，用鹽酸-甲醇(1:100)溶液補足減失的重量，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 線性關系考察 ： 精密量取上述對照品溶液各1、3、5、7、9、10mL，分別置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。各精密吸取10μl進樣，按上述色譜條件測定，記錄譜圖及峰面積值，以進樣量(W:μg)為縱坐標，以峰面積值(A)為橫坐標，繪制標準曲線，結果鹽酸小檗堿在0.05148～0.5148μg范圍內呈良好的線性關系，回歸方程為：Y=4.2E+6X-8620.7，r=1.0000。

2.4 精密度試驗 ： 精密量取鹽酸小檗堿對照品溶液(25.74μg /mL)10μL，連續(xù)進5次，測定對照品溶液峰面積，結果峰面積平均值為1065205，RSD為0.72%。

2.5 穩(wěn)定性試驗： 精密量取同一批供試品溶液10μl，每間隔0、4、8、14h注入色譜儀中，測定記錄峰面積值，結果平均峰面積值為1061875，RSD為2.0%，表明供試品溶液在1h內穩(wěn)定性良好。

2.6 重現性實驗： 取同一批號為20081106供試品溶液6份，研細，精密稱取約2g，按上述色譜條件測定每份樣品含量。按外標法計算含量。結果平均含量(mg/g)為0.312，RSD為1.4%，表明本試驗重現性良好。

2.7 加樣回收率試驗： 加樣回收試驗：精密稱取含量為0.32mg/g的供試品6份，各約1.0g，精密加入用甲醇配制的濃度為0.1287mg/mL的鹽酸小檗堿對照品溶液3mL，再精密加入甲醇22mL，分別按含量測定項下的方法測定每份供試品含量，計算回收率，結果見表1。

表1 鹽酸小檗堿加樣回收試驗結果

3 樣品含量測定

樣品含量測定 取3批供試品(批號為20081106、20090205、20090508)按供試品2.2.2 項下的方法處理并測定，3批樣品的測定，結果見表2。該條件下鹽酸小檗堿的保留時間為15.8min。

表2 樣品中鹽酸小檗堿含量測定結果

4 陰性對照試驗

取按處方量并以相同工藝制備的陰性樣品(關黃柏藥材為陰性)，操作同樣品分析項下方法，測得結果為：陰性對照品色譜圖中在與鹽酸小檗堿對照品色譜相對應的保留時間處無色譜峰出現，表明其它組分對波仁-12中鹽酸小檗堿的測定無干擾,對照品樣品和陰性樣品色譜峰見圖1、2、3。

5 討論

5.1 檢測波長的選擇：用紫外分光光度儀測定鹽酸小檗堿的吸收光譜，其最大吸收波長在346nm處，與文獻值一致[3,4]，故確定測定波長為346nm。

5.2 系統(tǒng)適用性試驗： 理論塔板數：N≥2000；拖尾因子：1.48。檢測過程中系統(tǒng)比較穩(wěn)定。

5.3 樣品測定試驗： 樣品測定試驗中RSD≤2.0。波仁-12中鹽酸小檗堿的含量較低，影響檢測的靈敏度，使得RSD值為偏高。

5.4 本操作法簡便、靈敏、準確、專屬性強，故認為可作控制波仁-12(保腎散)的檢測方法。

[1]內蒙古食品藥品監(jiān)督管理局.內蒙古蒙藥制劑規(guī)范(第一冊)[M].呼和浩特：人民出版社2007：168.

[2]國家藥典委員會.中國藥典一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[3]黃海衛(wèi).川黃柏中鹽酸小檗堿的含量測定研究[J].湖南中醫(yī)藥導報,2003,9(4)：86-87.

[4]馮果.香連丸中鹽酸小檗堿的含量測定[J].貴陽中醫(yī)學院學報.2011,33(4):7-9.