金 亮 畢力格 李漢青 范曉紅 斯慶格

(內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010065)

牛膽汁是?？苿游稂S牛或水牛的膽汁。牛膽汁的藥用，始載于漢代的《神農(nóng)本草經(jīng)》一書，列為中品。本品味苦性寒，具有清肝明目，利膽通腸，解毒消腫之功效，廣泛用于治療肝熱目赤腫痛，小兒驚風，癰腫瘡毒及便秘及消渴等疾病。牛膽粉(干燥膽汁)也為蒙藥藥材，具有平息協(xié)日、愈傷、解毒、明目之功效。蒙醫(yī)臨床用于協(xié)日病、配毒癥療效顯著[1]。牛膽汁中含有多種膽酸類化學成分，其中包括鵝去氧膽酸、熊去氧膽酸及豬去氧膽酸。

蓽茇來源為胡椒科植物蓽茇Piper Longum L.的干燥近成熟或成熟果穗，味辛，性溫。蒙醫(yī)用來調(diào)理胃火，祛巴達干、赫依，調(diào)理體素、滋補強壯、止痛。蓽茇含有酰胺類生物堿、揮發(fā)油、脂類等成分，蓽茇生物堿類分別為胡椒堿、幾內(nèi)亞胡椒堿、胡椒次堿、胡椒新堿、墻草堿、胡椒環(huán)堿等。蓽茇主要具有調(diào)血脂、解熱抗炎、鎮(zhèn)痛、抗血小板聚集、改善動脈粥樣硬化、降血壓、抗菌、鎮(zhèn)靜、抗氧化、降血脂等作用[2]。

蓽茇與牛膽粉配伍是經(jīng)處方優(yōu)化形成。本文對此制成滴丸，以便適應醫(yī)藥市場需求。

1 儀器與材料

聚乙二醇4000、聚乙二醇6000(PEG4000、PEG 6000，天津市大茂化學試劑廠)DY-201-100硅油、DY-201-350硅油(山東大易化工有限公司)，液體石蠟(上海大場化工廠)。

TDSJ-A型臺式多功能實驗滴丸劑(北京正大綠洲制藥有限公司)，Sartorius BT25S電子天平，d=0.01mg，(賽多利斯科學儀器(北京)有限公司)

2 方法

稱取600g牛膽粉，放入三角瓶中，加入1.2L的95%乙醇，封蓋，放入超聲波中提取，超聲波溫度30℃，時間30min，功率70%，每次提取1h，提取3次，每次超聲提取結(jié)束后，提取液上加適量乙酸乙酯放置30min沉淀，等提取液沉淀后過濾，最后合并過濾液，回收濃縮，冷凍干燥得496g牛膽粉備用。

496g牛膽粉凍干粉加適量40%乙醇超聲溶解，將層析柱里處理好的樹脂1kg，緩慢加入40%乙醇牛膽粉溶液，吸附解析洗脫，收集60%和80%乙醇洗脫液，過濾，濃縮，冷凍干燥得產(chǎn)品。60%乙醇洗脫液凍干粉29.897g，80%乙醇洗脫液凍干粉21.182g。

蓽茇有效部位的提取受乙醇濃度、溶劑用量、提取次數(shù)、提取時間等因素影響，本實驗采用水-乙醇為提取溶劑，選用乙醇濃度(為體積百分比)為因素A(35～95%)，提取時間為因素B(1～3h)，提取次數(shù)為因素C(1～3次)，溶劑用量為因素D(6～10倍)。提取方法用L9(34)正交表安排實驗方案，平行2次實驗。計算100g藥材提取胡椒堿量為評價指標，最佳提取工藝：65%乙醇，提取2h，提取次數(shù)為3次，溶劑用量為6倍。提取液50～65℃下減壓濃縮，至無醇味，濃縮物冷凍干燥，-40℃或-86℃超低溫預凍，冷凍干燥時間為24～30h，得到蓽茇提取物。

選擇幾種合適的樹脂進行動態(tài)吸附實驗研究。分別稱取處理好的、HPD-100、HPD-750、HPD-722、SIP1300、X-5型號的大孔吸附樹脂各100g，分別裝柱，精密量取蓽茇提取物20%～40%乙醇溶液，上樣，控制流速3～8mL/min，預吸附10～40min，然后3～5BV純凈水洗去顏色，再用20～95%乙醇梯度洗脫，收集各部位洗脫液，50～65℃下減壓濃縮，至無醇味，濃縮物冷凍干燥，-40℃或-86℃超低溫預凍，冷凍干燥時間為24～30h，得到各洗脫部位。紫外分光光度法測樹脂中各洗脫部位蓽茇總生物堿含量，HPLC法檢測各洗脫部位胡椒堿含量。

稱取D001大孔吸附樹脂2kg，濕法裝柱，加95%乙醇浸泡24h以上，95%乙醇洗至出口洗滌液在試管中加3倍量水不顯渾濁為止，后用清水充分淋洗至無明顯乙醇氣味。使其液面高于樹脂層約10cm處，用3BV的3%～5%HCl以4～6BV/h的流速通過樹脂柱，并浸泡2～4h，而后用水以同樣流速洗至流出液呈中性。用相同體積的3%～5%的NaOH以4～6BV/h的流速通過樹脂柱，并浸泡2～4h，而后用水以同樣流速洗至流出液呈中性，備用。柱高43cm，直徑9cm，柱體積2734mL。稱取蓽茇提取物1365g，20%～40%乙醇溶解，紫外分光光度法測定蓽茇總生物堿含量3.1mg/mL，上樣流速50mL/min。預吸附30min，然后5BV40%乙醇洗去顏色，再用80%乙醇洗脫10BV，收集洗脫液， 50～65℃下減壓濃縮，至無醇味，冷凍干燥，-40℃或-86℃超低溫預凍，冷凍干燥時間為24～30h，得到蓽茇有效部位42.2g。

樣品測定：取樹脂60%、70%和80%洗脫部位凍干粉，平行3份，精密稱定，流動相溶解，注入色譜儀，測定，根據(jù)標準曲線求出胡椒堿含量，計算蓽茇生物堿有效部位中蓽茇總生物堿和胡椒堿百分含量，各樹脂洗脫部位蓽茇總生物堿含量為蓽茇總生物堿百分含量為50%～95%，胡椒堿百分含量為50%～90%。

按照牛膽粉和蓽茇復方提取物凍干粉(50:1～1:50)與聚乙二醇質(zhì)量比1:2～8，將復方提取物凍干粉加入熔融的聚乙二醇(PEG6000)中，攪拌至混合均勻，得混合物。放置80℃水浴鍋上溶解，以滴速25～50滴/min、滴距8～12cm，將熔融的混合物滴入冷凝液中，所述冷凝液為二甲基硅油運動粘度為100～350mm2/s，4～15℃冷凝成丸，收集滴丸，干燥，既得牛膽粉和蓽茇蒙藥組方配伍的滴丸。

3 牛膽粉和蓽茇蒙藥組方配伍藥效實驗

3.1 對大鼠膽汁分泌的影響：采用膽道插管法，取體重為180～200g雄性大鼠16只，隨機分為兩組，即空白對照組和給藥組，每組8只雄性大鼠，空白組灌胃給予生理鹽水羧甲基纖維素鈉混懸液，給藥組灌胃給予100mg/kg的牛膽粉和蓽茇凍干粉，給藥后30min，用20%烏拉坦麻醉，手術(shù)，插膽管，收集2h的膽汁分泌量。

實驗結(jié)果說明，牛膽粉和蓽茇凍干粉能明顯增加大鼠膽汁的分泌量，見表1。

表1 牛膽粉和蓽茇凍干粉對大鼠膽汁分泌的影響

3.2 對小鼠血清膽固醇的影響：采用高鐵一硫酸顯色法，取體重18～22g小鼠16只，隨機分為兩組，即空白對照組和給藥組，各組8只小鼠，空白組灌胃給予生理鹽水羧甲基纖維素鈉混懸液，給藥組灌胃給予300mg/kg的牛膽粉和蓽凍干粉，連續(xù)給藥4d。于最后一次給藥后5h，摘除眼球取血，制備血清后，測定其膽固醇濃度。實驗結(jié)果表明，給藥組與空白對照組之間有顯著差異，說明牛膽粉和蓽茇配伍凍干粉對血清膽固醇有明顯降低作用，見表2。

4 結(jié)論

牛膽粉(干燥膽汁)具有平息協(xié)日、愈傷、解毒、明目之功效。蒙醫(yī)臨床用于協(xié)日病、配毒癥療效顯著。蒙醫(yī)把蓽茇定位為醫(yī)治巴達干病類藥物，認為其能祛巴達干、赫依、調(diào)理胃火、滋補強壯、祛寒溫胃、利肺下氣、祛痰、平喘?！稛o誤蒙藥志》中記載漢蓽茇最大最好，鮮時味甘，性寒、重、柔，干品柔辣，消化后味甘，治龍病、培根病，哮喘，咳嗽。蓽茇不僅有多種功效，也被作為香料或食品添加劑使用，主要因為其含有多種化學成分，至今報道有324個化合物。文獻報道，蓽茇酰胺類生物堿化合物是其主要藥效成分，胡椒堿為蓽茇生物堿含量較高的成分之一，是蓽茇生物堿中具有代表性的活性成分，目前含有蓽茇的蒙藥制劑多以胡椒堿為指控評價指標。

本文牛膽粉和蓽茇提取純化工藝合理簡單易操作，準確可行、分離度好、重現(xiàn)性好，適合于牛膽粉和蓽茇及其制劑的質(zhì)量控制。

牛膽粉和蓽茇凍干粉滴丸制備工藝簡單，滴丸的成型性和質(zhì)量受滴速、滴距、藥液及冷凝液溫度等多種因素的影響,因此,優(yōu)選滴丸制備工藝時，難于用某一個指標來衡量。

藥效實驗結(jié)果表明，牛膽粉和蓽茇滴丸對大鼠有顯著地利膽作用，能明顯增加膽汁的分泌量；牛膽粉和蓽茇滴丸對小鼠血清膽固醇濃度實驗結(jié)果表明，給藥組與空白對照組之間有顯著差異，說明牛膽粉和蓽茇配伍滴丸對小鼠血清膽固醇有明顯降低作用。

[1]白萬富，鞠愛華，楊乾，等.牛膽汁的化學成分及臨床應用的研究進展[J].中華中醫(yī)藥雜志，2008，23(2)：149.

[2]包雪梅,那生桑,陸景坤.蓽茇有效部位群調(diào)血脂作用研究[J].中國中藥雜志,2013,38(6):909-913.