黃梅花

摘要 [目的]建立合水粉葛中氟蟲(chóng)腈、甲拌磷和克百威及其代謝物殘留（9種）的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析方法。[方法]采用改良QuEChERS方法，使用電子噴霧離子源（ESI）和選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)（SRM）模式測(cè)定，基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。[結(jié)果]9種農(nóng)藥在10～200 μg/L 具有較好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.995。加標(biāo)回收率為81.7%～119.4%，最低檢測(cè)限為0.38～5.88 μg/kg，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.5%～12.4% 。[結(jié)論]該方法適用于合水粉葛中9種農(nóng)藥的檢測(cè)。

關(guān)鍵詞 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；農(nóng)藥殘留；代謝物；合水粉葛

中圖分類號(hào) TS207.5+3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼

A 文章編號(hào) 0517-6611（2018）18-0157-03

Determination of Fipronil，Phorate and Carbofuran and Its Metabolites Residues in Heshui Pueraria thomsonii Benth by High Performance Liquid ChromatographyTandem Mass Spectrometry

HUANG Meihua （Foshan City Gaoming District Agricultural Technology Service and Popularize Center，F(xiàn)oshan，Guangdong 528500）

Abstract [Objective] The research aimed to develop a simple and rapid method for the determination of fipronil，phorate and carbofuran and its metabolites residues （9 kinds of pesticides）in Heshui Pueraria thomsonii Benth by high performance liquid chromatographytandem mass spectrometry. [Methods] The sample was prepared by the modified QuEChERS（Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged，Safe） method，extracted with electrosprary ion source （ESI），selected reaction monitoring mode （SRM） and matrix-matched external standard method were applied to sample analysis.[Result] The calibration curves of 9 pesticide residues were linear in the range of 10-200 μg/L with correlation coefficients more than 0.995. The recoveries for all compounds were 81.7%-119.4%，The limits of quantitation （LOQ） were 0.38-5.88 μg/kg，and the RSD were 4.5%-12.4%. [Conclusion]This method is suitable for the detection of the 9 kinds of pesticides in Heshui Pueraria thomsonii Benth .

Key words High performance liquid chromatographytandem mass spectrometry；Pesticide residue；Metabolite；Heshui Pueraria thomsonii Benth

合水粉葛，出產(chǎn)于廣東省佛山市高明區(qū)的粉葛代表性產(chǎn)品，因其具有獨(dú)特優(yōu)良品質(zhì)而暢銷國(guó)內(nèi)外，并于2006年獲得“國(guó)家地理標(biāo)志產(chǎn)品”稱號(hào)[1]。合水粉葛的主要成分是淀粉，此外含有約12%的黃酮類化合物，是老少皆宜的名貴滋補(bǔ)品，有“千年人參”之美譽(yù)，也是眾多粉葛食品加工廠家優(yōu)質(zhì)的原料。

到目前為止，甲拌磷、克百威、氟蟲(chóng)腈3種農(nóng)藥都是禁止在蔬菜中使用的農(nóng)藥，根據(jù)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2016）[2]，標(biāo)準(zhǔn)中列出了這3種農(nóng)藥在蔬菜中的最大殘留限量，且此殘留量包括農(nóng)藥母體和代謝物，以農(nóng)藥母體表示。然而，標(biāo)準(zhǔn)中指定的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法，如檢測(cè)甲拌磷的標(biāo)準(zhǔn)方法（GB 23200.8—2016）[3]作為氣相色譜-質(zhì)譜法，只檢測(cè)甲拌磷和甲拌磷砜，不檢測(cè)甲拌磷亞砜；氟蟲(chóng)腈的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法（SN/T 1982—2007）[4]為氣相色譜-質(zhì)譜法，可以檢測(cè)氟蟲(chóng)腈卻不能檢測(cè)其代謝物；克百威的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法（NY/T 761—2008）[5]是液相色譜法，然而，為提高檢測(cè)效率，使用液相色譜法-串聯(lián)質(zhì)譜法，但是標(biāo)準(zhǔn)方法液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GB/T 20769—2008）[6]只檢測(cè)克百威，不涉及3-羥基克百威。目前，有關(guān)甲拌磷、克百威、氟蟲(chóng)腈3種農(nóng)藥殘留量檢測(cè)的方法有氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[7]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[8]，但是這些方法不是只檢測(cè)農(nóng)藥母體本身，不檢測(cè)農(nóng)藥的代謝物，就是幾種農(nóng)藥在不同方法不同儀器中檢測(cè)，比較分散，導(dǎo)致檢測(cè)效率不高。因此，筆者采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法中正負(fù)離子切換的模式，同時(shí)檢測(cè)粉葛中甲拌磷、克百威、氟蟲(chóng)腈3種農(nóng)藥（包括母體和代謝物共9種化合物），以提高檢測(cè)效率和檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度，保障合水粉葛作為國(guó)家地理標(biāo)志產(chǎn)品的質(zhì)量安全，有益于合水粉葛的廣泛傳播，有利于更好地發(fā)展合水粉葛的出口事業(yè)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要儀器。Thermo SCIENTIFIC UltiMate 3000-TSQ ENDURA（液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀）；T10分散機(jī)（德國(guó)IKA公司）；冷凍臺(tái)式離心機(jī)ALLegraX-15R（Beckman Coulter）；MS1渦旋混勻儀（德國(guó)IKA公司）；JJ100電子天平（常熟市雙杰測(cè)試儀器廠）。

1.1.2 主要試劑。乙腈、甲酸、甲醇（色譜純，德國(guó)Merck公司）；乙酸銨（色譜純）、氯化鈉（分析純）、QuEChERS凈化管（內(nèi)含50 mg N-丙基乙二胺吸附劑（PSA）、50 mg十八烷基鍵合硅膠吸附劑（C18）、150 mg無(wú)水MgSO4，美國(guó)Agilent 公司）；0.2 μm濾膜；實(shí)驗(yàn)室用水為超純水[經(jīng)超純水器Direct-Q3（美國(guó)密理博Millipore公司）純化]。9種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均購(gòu)自農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（天津），質(zhì)量濃度為1 000 μg/mL。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。用乙腈溶液將1 000 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋至100 μg/mL的單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，并置于-20 ℃的冰箱保存，使用時(shí)用樣品空白基質(zhì)稀釋配制成不同濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，且此工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

配制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液必須將農(nóng)藥母體本身與其代謝物分開(kāi)，不配成混合溶液，以免影響后續(xù)的樣品定量分析，進(jìn)而降低檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度。該試驗(yàn)將包括代謝物在內(nèi)的9種化合物分為4組，氟蟲(chóng)腈、甲拌磷、克百威為一組，氟蟲(chóng)腈砜、甲拌磷砜、3-羥基克百威為一組，氟蟲(chóng)腈亞砜與甲拌磷亞砜為一組，氟甲腈為一組。

1.2.2 液相色譜條件。色譜柱：ZORBAX SB-C18柱（Narrow-Bore 2.1 mm×150 mm，3.5 μm）；柱溫30 ℃；流動(dòng)相A為0.1%甲酸-5 mmol/L乙酸銨水溶液（1 mL甲酸+0.385 g乙酸銨溶于超純水中，定容至1 L），流動(dòng)相B為乙腈。梯度洗脫程序：0～1.0 min，95% A；4.0 min，60% A；8.0 min，40% A；14.0 min，20% A；14.1～18.0 min，95% A，總時(shí)長(zhǎng)18 min。流速為0.30 mL/min，進(jìn)樣量為8 μL。

1.2.3 質(zhì)譜條件。離子源電子噴霧離子源（H-ESI），采用正負(fù)離子模式切換采集數(shù)據(jù)。電噴霧電壓：正離子模式3 500 V，負(fù)離子模式3 000 V；鞘氣：27 Arb，輔助氣：2 Arb，吹掃氣：0；離子傳輸管溫度270 ℃，噴針溫度300 ℃；掃描方式：選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)（Selected Reaction Monitoring，SRM）。

SRM模式的具體優(yōu)化方法是：對(duì)濃度為2 mg/L的單標(biāo)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液以Full Scan Q1模式進(jìn)行母離子掃描，每種化合物均采用正、負(fù)2種不同的離子模式優(yōu)化，選擇其中使化合物信號(hào)較強(qiáng)、較穩(wěn)定的離子模式。每種農(nóng)藥組分選擇其對(duì)應(yīng)的信號(hào)較強(qiáng)和穩(wěn)定性良好的離子為母離子。確定母離子后，進(jìn)一步優(yōu)化待測(cè)物的子離子、RF Lens電壓（射頻透鏡電壓）、CE值（碰撞能）。確定母離子與子離子后，以SRM模式對(duì)0.5 mg/L的3種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析。

1.2.4 樣品前處理方法。準(zhǔn)確稱取勻漿狀樣品10.0 g于50 mL具塞離心管中，加入10.0 mL乙腈，使用高速分散機(jī)分散1 min，轉(zhuǎn)速為12 000 r/min，加入4 g氯化鈉，再使用高速勻漿機(jī)以12 000 r/min的轉(zhuǎn)速分散1 min，使用離心機(jī)以轉(zhuǎn)速8 000 r/min離心3 min。吸取上層有機(jī)提取液1 mL于QuEChERS凈化管中，渦旋振蕩30 s，5 000 r/min離心2 min，取上清液經(jīng)0.2 μm濾膜過(guò)濾，供高效液相色譜三重串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜測(cè)定。

1.2.5 方法學(xué)考察。

1.2.5.1 線性關(guān)系考察。采用空白基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線定量，逐步稀釋配制成10、20、50、100 、200 μg/L 5個(gè)濃度點(diǎn)，經(jīng)進(jìn)樣分析后，以進(jìn)樣濃度X（μg/L）為橫坐標(biāo)、峰面積Y為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算線性回歸方程。

1.2.5.2 靈敏度考察。對(duì)加標(biāo)濃度為50 μg/L的9種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，以色譜圖中10倍信噪比（S/N=10）為方法定量限（LOQ）。

1.2.5.3 精密度與加標(biāo)回收率考察。在空白合水粉葛中以50、100、200 μg/L 3個(gè)不同濃度點(diǎn)添加9種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按 “1.2.4” 的方法進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，按 “1.2.2”和“1.2.3” 的方法進(jìn)行儀器分析，每個(gè)水平重復(fù)進(jìn)樣6次。

2 結(jié)果與分析

2.1 SRM模式優(yōu)化結(jié)果 對(duì)每種化合物分別采用正、負(fù)離子模式進(jìn)行優(yōu)化后，發(fā)現(xiàn)不同的化合物信號(hào)最強(qiáng)、最穩(wěn)定時(shí)所采取的模式不同。其中甲拌磷及其代謝物、克百威及其代謝物采取正離子掃描模式，氟蟲(chóng)腈及其代謝物采取負(fù)離子掃描模式。除此之外，不同的化合物其加或減H+、或NH4+或Na+或K+的信號(hào)和穩(wěn)定性不同，大部分化合物加或減H+信號(hào)較強(qiáng)較穩(wěn)定，少部分選擇加或減NH4+的母離子較適用于檢測(cè)。在優(yōu)化過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，在該試驗(yàn)條件下，所涉及化合物加或減H+的信號(hào)和穩(wěn)定性最好。9種化合物經(jīng)優(yōu)化后的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 線性關(guān)系考察。按 “1.2.5.1” 方法操作，計(jì)算線性回歸方程，結(jié)果表明，9種農(nóng)藥組分在10～200 μg/L有良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)均大于0.995。

2.2.2 靈敏度考察。按 “1.2.5.2” 方法操作，結(jié)果表明（表2），9種農(nóng)藥組分的定量限（LOQ）為0.38～5.88 μg/kg。

2.2.3 精密度與加標(biāo)回收率考察。按 “1.2.5.3” 方法操作，經(jīng)添加回收試驗(yàn)，9種農(nóng)藥組分中3個(gè)加標(biāo)濃度點(diǎn)的加標(biāo)回收率為81.7%～119.4%，RSD為4.5%～12.4%（表2）。從表2還可看出，該試驗(yàn)分析方法的準(zhǔn)確度、精密度、靈敏度均滿足國(guó)內(nèi)外對(duì)農(nóng)藥殘留分析測(cè)定的要求。

3 結(jié)論

該試驗(yàn)利用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定合水粉葛中氟蟲(chóng)腈、甲拌磷、克百威及其代謝物，使用QuEChERS分散固相萃取凈化管，采用選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)（SRM）方式進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，建立了同時(shí)檢測(cè)氟蟲(chóng)腈等9種農(nóng)藥組分殘留的方法，做到了既檢測(cè)農(nóng)藥母體本身又檢測(cè)代謝物，從而提高了檢測(cè)效率與準(zhǔn)確度。該方法操作簡(jiǎn)單、快速，有良好的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度，能滿足農(nóng)藥殘留分析測(cè)定的要求。

參考文獻(xiàn)

[1]國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.關(guān)于批準(zhǔn)對(duì)合水粉葛實(shí)施地理標(biāo)志產(chǎn)品保護(hù)的公告（質(zhì)檢總局2006年第56號(hào)公告）[EB/OL].（2006-04-16）[2018-01-20].http：//www.eshian.com/laws/9595.html.

[2] 中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品中農(nóng)藥最大殘留限量：GB 2763—2016[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2016.

[3] 中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)，中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.水果和蔬菜中500種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定 氣相色譜-質(zhì)譜法：GB 23200.8—2016[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2016.

[4] 中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.進(jìn)出口食品中氟蟲(chóng)腈殘留量檢測(cè)方法 氣相色譜-質(zhì)譜法：SN/T 1982—2007[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007.

[5] 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定：NY/T 761—2008[S].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2008.

[6] 中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法：GB/T 20769—2008[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

[7] 張慧麗，王建華，李馨，等.氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蔬菜中甲拌磷和克百威及其代謝物的殘留量[J].化學(xué)分析計(jì)量，2016，25（1）：10-14.

[8] 吳成，任海雷，趙志強(qiáng)，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)芹菜中氟蟲(chóng)腈及其代謝物殘留[J].福建分析測(cè)試，2016，25（5）：37-41.