林雪芬 陳裕光 溫武金 洪阿體

深圳市寶安第二集團(tuán)總醫(yī)院內(nèi)二科，廣東深圳 518104

嗜酸粒細(xì)胞性支氣管炎（eosinophilic bronchitis，EB）是一種以嗜酸性粒細(xì)胞為主的多種炎性細(xì)胞浸潤(rùn)為特征的慢性氣道炎癥疾病[1]，臨床表現(xiàn)以刺激性干咳為主，細(xì)胞學(xué)檢查顯示患者痰液嗜酸性粒細(xì)胞增高且合并病理性痰液增多。一項(xiàng)前瞻性研究表明[2]，EB占我國(guó)慢性咳嗽病因的22%，僅次于咳嗽變異性哮喘（cough variant asthma，CVA）和上氣道咳嗽綜合征。MUC5AC是氣道黏液中最重要的黏痰白，表達(dá)于正常氣道上皮的杯狀細(xì)胞內(nèi)，具有保護(hù)和潤(rùn)滑上皮，防御外來刺激物及阻止病原菌入侵等作用[3]。研究顯示[4]，EB與CVA均具有相似的嗜酸粒細(xì)胞性氣道炎癥，但EB患者病理性痰液增多的比例與黏痰白水平的類型及機(jī)制尚不清楚。本研究旨在通過觀察EB和CVA患者誘導(dǎo)痰中氣道黏痰白MUC5AC、MAC5B及炎癥因子的表達(dá)水平，分析EB缺乏黏液高分泌的機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

表1 三組患者一般資料比較

表2 三組患者黏蛋白水平與炎癥介質(zhì)比較（±s）

表2 三組患者黏蛋白水平與炎癥介質(zhì)比較（±s）

注：與其他兩組比較，*P＜0.05

組別 n MUC5AC（μg/mL） MUC5B（μg/mL） LTC4（pg/mL） PGE2（pg/mL）EB組 20 16.4±6.9 2.7±0.4 311.8±88.5 424.7±127.2*CVA組 20 25.7±8.6* 1.3±0.7* 701.6±163.4* 152.6±65.4對(duì)照組 20 13.7±5.2 2.4±0.4 89.3±15.2 122.4±19.2 F 16.000 40.247 165.798 79.871 P 0.000 0.000 0.000 0.000

1 資料與方法

1.1 一般資料

我院2016年10月～2017年4月門診嗜酸粒細(xì)胞性支氣管炎病例20例，符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)制定的《咳嗽診斷與治療指南（2015）》的EB診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，男14例，女6例，年齡21～52歲，平均（43.4±3.9）歲?？人宰儺愋韵颊?0例，符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)哮喘學(xué)組制定的《咳嗽變異性哮喘防治指南（2016年版）》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，且處于緩解期的輕、中度患者，男13例，女7例，年齡24～58歲，平均（43.2±4.7）歲。健康對(duì)照組，體格檢查正常，血常規(guī)、胸部X片正常、肺功能正常，非吸煙者，無過敏體質(zhì)或慢性呼吸系統(tǒng)疾病。三組患者在性別、年齡等一般資料上比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。

1.2 方法

（1）EB、CVA及健康體檢者于入組后第一天行肺功能檢測(cè)，高滲鹽水霧化誘導(dǎo)痰，而后進(jìn)行痰細(xì)胞分類及上清黏蛋白與炎癥介質(zhì)測(cè)定；（2）誘導(dǎo)痰及痰液處理方法：首先給予受試者沙丁胺醇?xì)忪F劑（山東京衛(wèi)制藥有限公司，H37022817，200撳，0.10mg/撳）400μg吸入，10min后清水漱口，擤鼻；而后行3%濃度高滲鹽水霧化吸入20min，漱口，將唾液吐干凈后，囑患者用力深咳，咳出痰液至消毒器皿中，而后繼續(xù)霧化至結(jié)束。痰標(biāo)本處理：用平口鑷取出痰液中粘稠部分，放入EP管中，加入4倍體積的0.1%DTT，漩渦震蕩1min，充分混勻后，37℃水浴10min，采用200目篩網(wǎng)過濾雜質(zhì)，2500r/min離心10min，取上清液放置于-80℃恒溫箱內(nèi)待檢。制作細(xì)胞涂片，HE染色，光鏡下進(jìn)行400個(gè)上皮細(xì)胞分類；采用ELISA法測(cè)定痰液中MUC5AC、 MUC5B及炎癥介質(zhì)白三烯C4（leukotrienes C4，LTC4）、前列腺素 E2（prostaglandin E2，PGE2），黏蛋白試劑盒購(gòu)自美國(guó)CUSABIO 公司，炎癥介質(zhì)試劑盒購(gòu)自CVAyman 公司，嚴(yán)格按照操作規(guī)范進(jìn)行；（3）肺功能檢測(cè)：嚴(yán)格按照中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)肺功能專業(yè)組制定的《肺功能檢查指南》[7]進(jìn)行肺功能檢測(cè)，采用德國(guó) Jaeger Mastercope 肺功能儀進(jìn)行支氣管激發(fā)試驗(yàn)，由同一操作技師進(jìn)行。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

黏蛋白MUC5AC、MUC5B；炎癥介質(zhì)LTC4、PGE2；痰細(xì)胞分類：細(xì)胞總數(shù)（total cell count，TCC）、嗜中性粒細(xì)胞比例（neutrophils，Neu）、嗜酸性粒細(xì)胞比例（eosinophils，EOS）、淋巴細(xì)胞比例（lymphocytes，Lym）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS19.0版對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（±s）表示，多組間比較采用方差分析，組間比較采用LSD檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson線性分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組患者黏蛋白水平與炎癥介質(zhì)比較

CVA組MUC5AC水平明顯高于EB組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；CVA組MUC5B水平明顯低于EB組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；CVA組LTC4水平明顯高于其他兩組，EB組PGE2水平明顯高其他兩組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

2.2 三組患者誘導(dǎo)痰細(xì)胞學(xué)分類比較

CVA組細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比、嗜酸粒細(xì)胞百分比明顯高于其他兩組，EB組細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比、嗜酸粒細(xì)胞百分比明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 三組患者誘導(dǎo)痰細(xì)胞學(xué)分類比較（±s）

表3 三組患者誘導(dǎo)痰細(xì)胞學(xué)分類比較（±s）

注：與其他兩組比較，#P＜0.05，與對(duì)照組比較，*P＜0.05

組別 n TCC（106/g） Neu（%） EOS（%） Lym（%）EB組 20 2.7±0.8 27.4±12.8* 14.7±10.9* 1.3±1.1 CVA組 20 3.3±0.9# 37.1±18.7# 48.5±21.1# 1.2±0.7對(duì)照組 20 1.7±0.4 13.8±3.3 0.3±0.1 1.7±0.9 F 24.348 15.673 65.121 1.673 P 0.000 0.000 0.000 0.197

2.3 相關(guān)性分析

MUC5AC水平與EOS、LTC4呈正相關(guān)（r=0.771，0.864，P＜0.01）；MUC5B水平與PGE2呈正相關(guān)（r=0.692，P ＜ 0.05）。

3 討論

慢性氣道炎癥中氣道黏液水平升高是一項(xiàng)重要的病例特征[8]。在正常人群中，氣道黏液是重要的防御屏障，能夠抵御外界病原菌入侵和中和過敏原作用[9]。當(dāng)氣道內(nèi)黏液水平過度升高時(shí)，會(huì)引發(fā)氣道呈高反應(yīng)狀態(tài)，加重氣道炎癥，影響患者生命健康。氣道黏液主要由氣道杯狀細(xì)胞和黏膜下腺體合成的黏蛋白、水和電解質(zhì)組成，黏蛋白的主要組成成分是MUC5AC與MUC5B，研究顯示[10]，在CVA患者中MUC5AC水平明顯增高，且有證據(jù)顯示其與哮喘嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，但尚無確切報(bào)道證實(shí)MUC5B與哮喘嚴(yán)重程度存在相關(guān)性；另外，EB與CVA均具有相似的嗜酸粒細(xì)胞性氣道炎癥，但EB患者病理性痰液增多的比例與黏痰白水平的類型及機(jī)制尚不清楚。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明[11]，在人工建立小鼠哮喘模型中，小鼠受到抗原激發(fā)后，MUC5B水平可無變化或輕度升高。研究EB與CVA患者中誘導(dǎo)痰黏蛋白水平差異及分析其影響機(jī)制對(duì)于更加針對(duì)性的治療慢性氣道炎癥具有重要意義。

本研究結(jié)果提示，CVA組MUC5AC水平明顯高于EB組和對(duì)照組，MUC5B水平明顯低于EB組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），進(jìn)一步證實(shí)了MUC5AC在誘導(dǎo)痰黏液高分泌中的作用，但從表2看，EB組MUC5AC高于對(duì)照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），羅煒等[12]調(diào)查問卷發(fā)現(xiàn)，近10%的EB患者存在一定程度的黏液高分泌現(xiàn)象，這在一定程度上解釋了本研究的結(jié)果。三組炎癥因子對(duì)比結(jié)果提示，CVA組LTC4水平明顯高于其他兩組，EB組PGE2水平明顯高其他兩組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；相關(guān)性分析也得出MUC5AC水平與 EOS、LTC4呈正相關(guān)（r=0.771，0.864，P＜0.01）；MUC5B水平與PGE2呈正相關(guān)（r=0.692，P＜0.05）；證實(shí)嗜酸性粒細(xì)胞在氣道炎癥的高黏液分泌中扮演著重要角色，至于炎癥因子與黏蛋白的關(guān)系，國(guó)內(nèi)研究表明[13-14]，采用PCR技術(shù)誘導(dǎo)痰細(xì)胞因子mMRNA表達(dá)，發(fā)現(xiàn)CVA和EB患者誘導(dǎo)痰細(xì)胞IL-5、IL-4、IL-10表達(dá)無差異，但EB組誘導(dǎo)痰中前列腺素E2（PGE2）水平顯著高于CVA組，與本研究結(jié)果一致；另外王嬌莉等[15]在研究EB與CVA患者氣道炎癥細(xì)胞與炎癥介質(zhì)的特征中發(fā)現(xiàn)EB組患者誘導(dǎo)痰中PGE 2水平明顯高于CVA組，另外，EB 患者誘導(dǎo)痰中LTC 4 水平無明顯增高，其認(rèn)為這可以部分解釋EB患者無氣道高反應(yīng)的原因。

綜上所述，EB和CVA患者誘導(dǎo)痰黏蛋白水平存在明顯差異，而炎癥因子比例失衡與嗜酸粒細(xì)胞比例不同可能是引起EB缺乏黏液高分泌的機(jī)制。但本研究樣本量有限，對(duì)于嗜酸性細(xì)胞在調(diào)節(jié)黏蛋白水平的機(jī)制方面有待進(jìn)一步研究。

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