許 良，塞擊拉呼，王曦燁，于佳琦，徐 寧，劉景林

（天然產(chǎn)物化學及功能分子合成內(nèi)蒙古自治區(qū)重點實驗室，內(nèi)蒙古民族大學化學化工學院 通遼 028000）

蒙藥塔日奴為大戟科植物月腺大戟（Enphorbia ebracteolata Hayata）的干燥根[1]，是蒙醫(yī)臨床上常用的藥材之一。塔日奴分布中國大陸，主產(chǎn)于河南、山東、江蘇、安徽、湖北等省。具有下瀉、消腫、消“奇哈”、殺蟲、燥“協(xié)日烏素”等功效。蒙醫(yī)臨床上用于結(jié)喉，發(fā)癥、“粘”病，黃水瘡，水腫，痛風，游痛癥，“協(xié)日烏素”病等[2]。近年來有關(guān)蒙藥塔日奴的研究報道逐漸增多，其主要原因是蒙藥塔日奴含有大量生物活性成分。其中萜類和苯乙酮類的特有成分如狼毒甲素、狼毒乙素和三帖酸具有抑制結(jié)核桿菌生長的作用[3]。臨床證實，蒙藥塔日奴乙醇提取物對浸潤型肺結(jié)核有很好的療效。中藥優(yōu)福寧（Euphomia）[4]系塔日奴（狼毒）濃縮而成的堿性糖漿膏。塔日奴中化合物Prostratin具有抗HIV病毒活性[5]。楊洪武等[6]實驗證明，塔日奴能夠抑制多種癌細胞。以塔日奴開發(fā)的E.F.膠囊具有明顯的抗腫瘤作用[7]。塔日奴對外周血白細胞和腹水腫瘤細胞的惡性增殖有較強的抑制作用，能夠促進腫瘤細胞凋亡[8]。塔日奴中某些化合物表現(xiàn)出非常高的細胞毒，在較高劑量下有致突變作用[5]。此外，塔日奴的免疫調(diào)節(jié)作用已被實驗證實[8]。

蒙藥炮制方法是歷代蒙醫(yī)學家經(jīng)過臨床用藥實踐中形成的一項制藥技術(shù)，通過炮制蒙藥，達到增效減毒之目的。蒙藥塔日奴中含有的活性成分一般都有毒性。因此，處于用藥安全考慮，在臨床上用蒙藥塔日奴之前必須進行炮制，即蒙醫(yī)臨床上用的是塔日奴的炮制品。諸多相關(guān)研究結(jié)果顯示，抗氧化是能夠達到預防衰老目的的有效途徑之一，原因在于氧化劑自由基能夠使得組織和細胞分解，通過對代謝功能的影響，進一步影響人體健康。假如某種藥物能夠消除體內(nèi)產(chǎn)生的過多的氧化自由基，那么它對體內(nèi)自由基引發(fā)的關(guān)節(jié)炎、白內(nèi)障、動脈硬化、心血管病、糖尿病、老年癡呆、癌癥等人體衰老相關(guān)疾病有預防作用。因此，近年來藥物抗氧化活性方面的研究報道日益增多[9-14]。蒙藥塔日奴的傳統(tǒng)功效之一的治“協(xié)日烏素”病和其一種藥效物質(zhì)—多糖成分的治療和預防關(guān)節(jié)炎作用相一致。為進一步闡明各種炮制方法的科學原理，同時對蒙藥塔日奴的臨床應用提供理論指導，本實驗對蒙藥塔日奴不同炮制品的化學成分以及抗氧化作用進行比較研究。

1 儀器與材料

高速離心機（上海安亭科學儀器廠，TDL-5）、透析袋（北京鼎國昌盛生物科技有限責任公司，進口分裝，36 DM）、層析柱（600 mm×16 mm）、UV-240型分光光度計（日本島津公司）、722s型可見分光光度計（上海精密科學儀器有限公司）。

DEAE-Cellulose、Sephdex G-100、硫代巴比妥酸（生化試劑，sigma公司）、氯化硝基四氮唑蘭NBT（生化試劑，sigma公司）、三羥甲基氨基甲烷（生化試劑，sigma公司）、番紅花紅T（生化試劑）、對照品苯甲酸、甘露醇和VC（抗壞血酸）分別購自上海汕頭光華化學試劑有限公司，均為分析純。其他試劑均為分析純，實驗用水為重蒸水。塔日奴藥材購自內(nèi)蒙古通遼市北方藥材市場，由內(nèi)蒙古民族大學蒙醫(yī)藥學院布和巴特爾教授鑒定。

2 實驗方法

2.1 蒙藥塔日奴藥材及其不同炮制方法

把塔日奴藥材用蒸餾水沖洗2-3次之后用超純水沖洗3-4次，晾干，置于溫度為80℃的烘干箱內(nèi)烘干，分別用以下炮制法炮制。

塔日奴白酒炮制：用60度白酒（由內(nèi)蒙古赤峰套馬桿酒業(yè)有限公司生產(chǎn)）浸泡6 h后置于水浴上煎煮，至白酒完全被吸收。固液比為：1:3。

塔日奴牛奶炮制：用牛奶（由內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)股份有限公司生產(chǎn)）把藥材浸泡6 h，60℃的水浴上煮至牛奶全部被吸收。固液比為：1:4。

塔日奴訶子湯炮制：60℃的水浴上煮訶子湯完全被吸收。固液比：1:3。

塔日奴米醋炮制：用米醋（由鎮(zhèn)江恒豐醬醋有限公司生產(chǎn)）把藥材浸泡12 h，（米醋）燜潤至醋被吸收，溫火炒干。固液比：1:4。

塔日奴酸奶炮制：60℃的水浴上煮至酸奶全部被吸收。固液比：1:4。

2.2 塔日奴及其炮制品的提取及供試品溶液的制備

本實驗選用河北省安國產(chǎn)地塔日奴藥材。分別取塔日奴生品及其不同炮制品粉末5.0 g，置圓底燒瓶中，隨后加入40 mL無水乙醇和10 mL去離子水，在95℃溫度下水浴加熱回流3 h。每次3 h，合并濾液，減壓濃縮至15-20 mL，放置室溫，加濃縮液體積的2倍無水乙醇，醇沉靜置24 h、抽濾、用乙醇、丙酮、乙醚各洗2次、干燥。用蒸餾水溶解，轉(zhuǎn)入50 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，得到濃度均為100 mg·mL-1的塔日奴生品以及塔日奴不同炮制品粗提物溶液。分別稀釋以上6種溶液，得到抗氧化試驗所需的濃度分別為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mg·mL-1的塔日奴生品以及塔日奴不同炮制品粗提物溶液。

2.3 對照品溶液的制備

分別精確稱取狼毒乙素、巖大戟內(nèi)酯B對照品2.0 mg，定容至2.00 mL容量瓶中，得1.0 mg·mL-1對照品溶液。將2種對照品溶液按不同比例混合，得到2種對照品的混合溶液，備用。

2.4 液相色譜與大氣壓化學電離質(zhì)譜的分析條件

2695HPLC-UV型高效液相色譜儀（waters，USA）,檢測條件：Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（250×4.6 mm，5 μm），柱溫30℃，二元線性梯度洗脫：流動相：（A）乙腈、（B）水.流動相梯度組成：0-30 min，10%-55%流動相A；30-60 min，55%-95%流動相A.流速0.8 mL·min-1;樣品進樣量10 μL。

質(zhì)譜分析條件：LCQTM大氣壓化學電離離子阱質(zhì)譜儀（Thermo,USA）：采用正離子模式，掃描范圍：m/z 100-400，離子阱條件：源加熱溫度300℃，鞘氣20 arb，輔助氣5 arb，金屬加熱毛細管溫度275℃，毛細管電壓15 V。

2.5 塔日奴不同炮制品提取液的清除羥自由基活性分析

2.5.1 試劑溶液的配制

2.5.1.1 0.2 mol·L-1的PBS溶液（pH=7.4）配制0.2 mol·L-1Na2HPO4溶液：稱取 35.8010 g Na2HPO4·12H2O，溶于500 mL水中；

0.2 mol·L-1KH2PO4溶液：稱取 3.1120 g KH2PO4·2H2O，溶于100 mL水中；

取405 mL 0.2 mol·L-1Na2HPO4溶液與95 mL 0.2 mol·L-1KH2PO4溶液混合，即為0.2 mol·L-1的PBS溶液（pH=7.4）。

2.5.1.2 2.0 mmol·L-1的EDTANa2-Fe(II)溶液配制

EDTA溶液（4.0 mmol·L-1）：稱取乙二胺四乙酸二鈉0.3720 g溶于250 mL水中；

硫酸亞鐵胺溶液（4.0 mmol·L-1）：稱取硫酸亞鐵胺0.3920 g溶于250 mL水中；

將以上兩種溶液按1：1的體積比進行混合，即為配成2.0 mmol·L-1的EDTANa2-Fe（II）溶液。

2.5.1.3 濃度為0.52 mg·mL-1的番紅花紅T溶液配制

稱取番紅花紅T 0.0520 g置于100 mL的容量瓶中，用超純水溶解，定容，備用。

2.5.1.4 濃度為6%的H2O2溶液

量取30%的H2O210 mL定容至50 mL的容量瓶中備用。

2.5.2 清除羥自由基活性測試方法

測試方法原理如同文獻[16]。精密量取1.5 mL濃度為0.2 mol·L-1的PBS（pH=7.4）緩沖溶液，分別加入濃度為 2.0 mmol·L-1的 EDTANa2-Fe（II）0.7 mL，濃度為0.52 mg·mL-1的番紅花紅T溶液0.2 mL，分別加入不同濃度的供試品溶液1.0 mL，分別加6%的H2O2溶液0.4 mL，用超純水定容至5.0 mL，混勻。將以上反應體系的溶液置于37℃的恒溫水浴中反應30 min，在520 nm處分別測定樣品吸光度值A?？瞻讟悠酚?.0 mL的超純水代替供試品溶液。記錄各樣品的吸光度值，并按下式計算清除羥自由基的清除率E(%)：

2.6 蒙藥塔日奴不同炮制品提取液的清除亞硝酸根作用的分析方法

2.6.1 試劑溶液的配制

2.6.1.1 50 mol.L-1NaNO2溶液

準確稱取345.0 g NaNO2，加蒸餾水定容至100 mL；

2.6.1.2 pH=3.0的檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖溶液

（1）0.1 mol·L-1的檸檬酸溶液：準確稱取檸檬酸2.101 g，加蒸餾水定容至100 mL；

（2）0.10 mol·L-1檸檬酸鈉溶液:準確稱取檸檬酸鈉2.941 g，加蒸餾水定容至100 mL；

分別?。?）號溶液18.6 mL，（2）號溶液1.4 mL，混合，即可。

2.6.1.3 0.4%對氨基苯磺酸

稱取0.40 g對氨基苯磺酸，溶于100 mL 20%的鹽酸中，避光保存。

2.6.1.4 0.2%N-1-奈基乙二胺鹽酸

稱取0.2gN-1-奈基乙二胺鹽酸，溶于100 mL水中，避光保存。

2.6.2 清除亞硝酸根作用的分析方法

方法原理見文獻[16]。精密取50 mol.L-1的NaNO2溶液2.00 mL置于10 mL容量瓶中，加入2.00 mL供試品溶液，依次加蒸餾水2.00 mL、pH=3.00的檸檬酸緩沖液5.00 mL，定容到10.00 mL，37℃水浴中放置1 h。冷卻到室溫后移取1.0 mL置于10 mL容量瓶中，加0.40%對氨基苯磺酸2.00 mL，放置5 min，隨后加0.20%N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽1.00 mL，定容至10 mL，混合均勻后放置15 min，在538 nm處測定反應體系的吸光度值。按下列公式計算清除能力：

2.7 蒙藥塔日奴及其不同炮制品提取液清除超氧陰離子自由基作用的分析

方法原理見文獻[10]。取0.1 mol.L-1PH為8.2的Tris-HCl緩沖溶液2.50 mL置于試管中，在25℃水浴上預熱10 min，隨后分別加入不同濃度的供試樣品溶液0.20 mL，0.98 mmol·L-1的NBT 0.6 mL，10 mmol·L-1的鄰苯三酚0.30 mL，混勻，在25℃水浴中反應4 min，加入8 mol.L-1的HCl 0.2 mL終止反應，并在530 nm處測定吸光度A值。用蒸餾水代替供試品溶液作空白。反應總體積3.8 mL。清除率按以下式進行計算：

A空白— —重蒸餾水代替樣品時超氧陰離子自由基體系的吸光度值；

A樣品— —加入拱式樣品時超氧陰離子自由基體系的吸光度值。

圖1 塔日奴中兩種成分的化學結(jié)構(gòu)式：（A）狼毒乙素（2,4-dihydroxy-6-methoxy-3-methylacetophenone）；（B）巖大戟內(nèi)酯B（Jolkinolide B）

圖2 對照品狼毒乙素和巖大戟內(nèi)酯B溶液的HPLC譜圖

3 實驗結(jié)果

3.1 塔日奴生品及炮制品中指標成分含量的HPLC分析

塔日奴中兩種主要成分狼毒乙素（2,4-dihydroxy-6-methoxy-3-methylacetophenone）、巖大戟內(nèi)酯 B（Jolkinolide B）的結(jié)構(gòu)式列于圖1。

狼毒乙素和巖大戟內(nèi)酯B對照品溶液的HPLC譜圖見圖2，塔日奴生品及炮制品的HPLC譜圖見圖3。

主要活性成分的含量測定結(jié)果見表1。精密吸取不同梯度濃度的巖大戟內(nèi)酯B、狼毒乙素對照品溶液，依次進樣20 μL，以相應的色譜峰面積Y為縱坐標，對照品進樣量X（μg）為橫坐標進行回歸，得到的回歸方程及線性范圍分別為：狼毒乙素：Y=5.786 7×104X-1.763 35×105，r=0.99 96，線性范圍為20-100 μg；巖大戟內(nèi)酯B：Y=1.338 6×104X-3.311 7×104，r=0.999 8，線性范圍為10-100 μg。狼毒乙素和巖大戟內(nèi)酯B加樣回收率試驗結(jié)果見表1。

本實驗得到的標準曲線在線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。塔日奴的醋蒸、酒蒸、蜜蒸、清蒸炮制品中2種有效成分狼毒乙素和巖大戟內(nèi)酯B的含量測定結(jié)果見表2。從表2得知，相對于生品不同炮制品中狼毒乙素和巖大戟內(nèi)酯B的含量均明顯減少，只有酸奶炮制品中2種指標成分的含量相對于生品明顯增加。

3.2 塔日奴生品及炮制品的大氣壓化學電離質(zhì)譜分析

塔日奴生品及炮制品的大氣壓化學電離質(zhì)譜圖（APCI-MS）見圖4，在正離子模式下的一級質(zhì)譜中，各類有效成分以質(zhì)子化的準分子離子形式存在。從譜圖可知，塔日奴未炮制品（A）、酸奶蒸品（B）、白酒蒸品（C）、清蒸品（D）、醋蒸品（E）、蜜蒸品（F）提取液APCIMS一級譜中主要分子離子峰分別為m/z 197、m/z 235、m/z 317和m/z 331，提示塔日奴炮制過程中其化學組成基本不變。

對塔日奴及其不同炮制品乙醇提取物中保留時間26.3 min的m/z 197峰以及保留時間為42.5 min的m/z 331峰進行串聯(lián)質(zhì)譜分析，其多級質(zhì)譜圖分別見圖5和圖6。根據(jù)色譜保留時間、結(jié)構(gòu)信息、對照品及參考文獻比對，鑒定質(zhì)荷比為197的化合物為狼毒乙素，質(zhì)合比為331的化合物為巖大戟內(nèi)酯B，該兩種化合物在塔日奴及其不同炮制品乙醇提取物中均存在，即塔日奴炮制過程中兩種指標成分的分子結(jié)構(gòu)不發(fā)生變化。

圖3 塔日奴及其不同炮制品的HPLC譜圖

表1 狼毒乙素和巖大戟內(nèi)酯B加樣回收率試驗結(jié)果（n=6）

根據(jù)以上分析結(jié)果，對兩種化合物可能的裂解機理見圖7和圖8。

3.3 抗氧化作用分析結(jié)果

3.3.1 清除羥自由基活性分析

分析結(jié)果見圖9。圖9顯示，以甘露醇為陽性對照，所測定的塔日奴及其不同炮制品提取液對·OH的清除能力有所不同，其清除羥自由基能力由弱到強的順序為：米醋炮制品（EC50=1.600 mg·mL-1）＜訶子湯炮制品（EC50=0.638 mg·mL-1）＜白酒炮制品（EC50=0.600 mg·mL-1）＜酸奶炮制品（EC50=0.539 mg·mL-1）＜塔日奴生品（EC50=0.378 mg·mL-1）＜牛奶炮制品（EC50=0.330 mg·mL-1）＜甘露醇（EC50=0.277 mg·mL-1）。

3.3.2 清除亞硝酸根作用的分析

以抗血酸為陽性對照，分別測定塔日奴及其五種炮制品的清除亞硝酸根自由基能力，分析結(jié)果見圖10。圖10表明，其對亞硝酸根自由基抗氧化作用由弱到強順序為：酸奶炮制品（EC50=0.037 mg·mL-1）＜白酒炮制品（EC50=0.0.036 mg·mL-1）＜米醋炮制品（EC50=0.034 mg·mL-1）＜抗血酸（EC50=0.031 mg·mL-1）＜塔日奴生品（EC50=0.031 mg·mL-1）＜訶子湯炮制品（EC50=0.028 mg·mL-1）＜牛奶炮制品（EC50=0.021 mg·mL-1）。其中有3種炮制品（牛奶炮制法＞訶子湯炮制法＞米醋炮制法）的清除亞硝酸根自由基能力較強，它們的EC50值比對照品抗血酸的EC50值小。

3.3.3 清除超氧陰離子自由基作用的分析結(jié)果

以甘露醇為陽性對照，測試塔日奴生品及其五種炮制品的清除超氧自由基能力，結(jié)果見圖11。圖11表明，對超氧自由基的抗氧化作用由弱到強順序為：白酒炮制品（EC50=13.399 mg·mL-1）＜米醋炮制品（EC50=9.763 mg·mL-1）＜塔日奴生品（EC50=7.715 mg·mL-1）＜牛奶炮制品（EC50=5.565 mg·mL-1）＜訶子湯炮制品（EC50=4.901 mg·mL-1）＜甘露醇（EC50=3.896 mg·mL-1）＜酸奶炮制品（EC50=3.808 mg·mL-1）。結(jié)果表明，酸奶炮制品的清除超氧自由基能力比對照品甘露醇的清除能力強。

4 討論

4.1 塔日奴藥理作用現(xiàn)代研究

塔日奴藥理作用現(xiàn)代研究表明，巖大戟內(nèi)酯B的抗腫瘤作用較強，而狼毒乙素的抗結(jié)核作用明顯。說明狼毒乙素、巖大戟內(nèi)酯B為蒙藥塔日奴主要的活性成分之一。因此，以兩種成分為指標，考察不同炮制方法對它們含量的影響，對闡明蒙藥塔日奴的炮制原理的進一步闡明具有一定的現(xiàn)實意義。APCI-MS-MS分析結(jié)果表明，蒙藥塔日奴經(jīng)不同方法炮制后其指標成分狼毒乙素、巖大戟內(nèi)酯B的分子結(jié)構(gòu)未發(fā)生變化；用HPLC技術(shù)對蒙藥不同炮制品的分析結(jié)果表明，炮制后蒙藥塔日奴中以兩種化合物為代表的的各有效成分含量有了一定變化。塔日奴的醋蒸、酒蒸、清蒸、蜜蒸炮制品中上述兩種有效成分的含量均較低，而本實驗首次采用的炮制法—酸奶炮制法得到的炮制品中兩種指標成分含量較高。本實驗結(jié)果提示，在臨床用藥時蒙藥塔日奴的炮制方法應首選酸奶炮制法，以便達到塔日奴有效成分的充分利用之目的。

表2 塔日奴不同炮制品中2個有效成分的含量（mg.g-1，n=5）

圖4 塔日奴及其不同炮制品的大氣壓化學電離質(zhì)譜圖

圖5 質(zhì)荷比197離子的二級（a）、三級質(zhì)譜圖（b）

圖6 質(zhì)荷比331離子的二級（a）、三級（b、c、d）質(zhì)譜圖

圖7 狼毒乙素（2,4-dihydroxy-6-methoxy-3-methylacetophenone）可能的裂解機理

圖8 巖大戟內(nèi)酯B（Jolkinolide B）可能的裂解機理

圖9 塔日奴及其5種炮制品提取液清除羥自由基比較

圖10 塔日奴及其5種炮制品提取液清除亞硝酸根自由基的比較

4.2 塔日奴生品及其五種炮制品的抗氧化作用研究

對塔日奴生品及其五種炮制品的抗氧化作用考察實驗結(jié)果表明：羥自由基抗氧化作用強弱順序為：塔日奴＞酸奶炮制品＞白酒炮制品＞訶子湯炮制品＞牛奶炮制品＞米醋炮制品；亞硝酸根抗氧化作用強弱順序為：牛奶炮制品＞訶子湯炮制品＞米醋炮制品＞塔日奴＞白酒炮制品＞酸奶炮制品；超氧自由基抗氧化作用強弱順序為：酸奶炮制品＞訶子湯炮制品＞牛奶炮制品＞塔日奴＞米醋炮制品＞白酒炮制品，即蒙藥塔日奴不同炮制品抗氧化作用有所區(qū)別。以上實驗結(jié)果顯示，蒙藥塔日奴酸奶炮制炮制品的羥自由基和超氧自由基抗氧化作用均為突出。在蒙醫(yī)臨床上治療一些體內(nèi)自由基導致的關(guān)節(jié)炎、動脈硬化、老年癡呆、糖尿病、癌癥等人體衰老相關(guān)疾病時建議用塔日奴酸奶炮制品。

圖11 塔日奴及其5種炮制品提取液對O2-的清除作用比較

蒙藥塔日奴為毒性藥物，炮制塔日奴的目的為達到減毒增效之目的。課題組用斑馬魚初期胚胎作為實驗模型，考察塔日奴及其不同炮制品毒性的實驗正在進行中。

1 國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會.中華本草.上海:上?？萍汲霭嫔?1999:4780

2 內(nèi)蒙古自治區(qū)衛(wèi)生廳編.內(nèi)蒙古蒙藥材標準.赤峰:內(nèi)蒙古科學技術(shù)出版社,1984:467

3 浮光苗,余伯陽,朱丹妮.月腺大戟化學成分的研究.中國藥科大學學報,2003,34(4):377-379

4 胡樹德,談光新,張涵慶,等.中藥優(yōu)福寧的毒性及體內(nèi)外抗結(jié)核菌活性的實驗研究.中國中醫(yī)藥科技,1998,5(1):12-13

5 吳起成,尤奮強,丁安偉,等.白狼毒化學成分和生物活性研究進展.藥學與臨床研究,2009,17(2):125-131

6 楊洪武,王崢,鄭學敏.狼毒大戟活性成分體外抑瘤研究.遼寧中醫(yī)雜志,2002,29(1):53-54

7 王崢.E.f中抗瘤有效部位的研究與開發(fā).沈陽:遼寧中醫(yī)學院碩士學位論文,2002

8 陳鳴岳.月腺大戟抗淋巴細胞性白血病機理的研究.濟南:山東大學碩士學位論文,2005

9 Shen S,Cheng H,Li X,et al.Effects of extraction methods on antioxidant activities of polysaccharides from camellia seed cake,Eur.Food Res Technol,2014,238(6):1015-1021.

10 Pan S,Wu S.Cellulase-assisted extraction and antioxidant activity of the polysaccharides from garlic.Carbohydr.Polym.2014,111(1):606-609.

11 Ye C L,Hu W L,Dai D H.Extraction of polysaccharides and the antioxidant activity from the seeds of Plantago asiatica L.Int J Biol Macromol,2011,49(9):466-470.

12 Chen H,Zhang M,Qu Z,et al.Antioxidant activities of different fractions of polysaccharide conjugates from green tea(Camellia Sinensis).Food Chem,2008,106(2):559-563.

13 Jia X,Dong L,Yang Y,et al.Preliminary structural characterization and antioxidant activities of polysaccharides extracted from Hawk tea(Litsea coreana var.lanuginosa).Carbohydr Polym,2013,95(1):195-199.

14 Wang C,Wang C,Quan Y.Extraction of polysaccharides from Phellinus nigricans mycelia and their antioxidant activities in vitro.Carbohydr Polym,2014,99(99):110-115.

15 Zhao Z Y,Xu X J,Ye Q G.Ultrasound extraction optimization of Acanthopanax senticosus polysaccharides and its antioxidant activity.Int J Biol Macromol,2013,59(4):290-294.

16 Wu C，Yu Y C，Wang L P.Study on the Inhibition of Nitroso Reaction by Microemulsion of Quercetin.Nat Prod Res Dev,2008,20:12-15