雷 偉，鄧艷芳，姜 民，白 剛

（南開大學(xué)藥學(xué)院 天津 300350）

缺血性心臟病是最嚴(yán)重的心血管疾病之一，在全世界都有較高的發(fā)病率和死亡率[1]。心肌缺血是指心肌耗氧量和冠狀動脈供血、供氧之間不平衡而導(dǎo)致的缺血性心臟病[2]。目前治療心肌缺血的藥物主要包括以下幾大類：亞硝酸酯和硝酸酯類、Ca2+拮抗劑類、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（ACE）抑制劑、β-受體阻滯劑和心肌代謝藥[3]。由于以上成分單一的化藥會出現(xiàn)嚴(yán)重的耐藥性，不良反應(yīng)如頭痛、頭暈、面紅、低血壓等和嚴(yán)格的使用禁忌，使得人們將發(fā)現(xiàn)抗心肌缺血疾病治療藥物的目光投向了多成分、多靶點和多條生物代謝途徑協(xié)同發(fā)揮作用的中藥。

速效救心丸是由川芎、冰片組成的中藥復(fù)方，臨床上它被廣泛應(yīng)用于心腦血管疾病。近30年的臨床應(yīng)用中，速效救心丸被廣泛用來治療冠心病、心絞痛、心肌梗死等疾病，并獲得了很好的療效，且無明顯副作用和藥物抵抗[4-6]。速效救心丸中研究較為廣泛的化學(xué)成分有藁本內(nèi)酯、洋川芎內(nèi)酯I、川芎嗪、阿魏酸等。藁本內(nèi)酯是川芎揮發(fā)油中的主要成分，也是速效救心丸的主要成分；前人對其研究顯示藁本內(nèi)酯能夠抑制由氯化鈣和去甲腎上腺素酒石酸導(dǎo)致的離體腹主動脈收縮，暗示藁本內(nèi)酯的作用類似于鈣離子拮抗劑維拉帕米[7]，藥代學(xué)研究顯示藁本內(nèi)酯在體內(nèi)主要經(jīng)歷氧化、還原、水解的I相代謝和與氨基酸、葡糖苷酸、谷胱甘肽等結(jié)合的Ⅱ相代謝反應(yīng)[8]。川芎嗪作為重要的生物堿類成分能夠激活PI3K/AKT通路[9]，減少缺血導(dǎo)致的心肌細(xì)胞電功能紊亂。阿魏酸作為重要的酚酸類成分，能夠增強(qiáng)內(nèi)皮生長因子和血小板源生長因子的表達(dá)，上調(diào)低氧誘導(dǎo)因子mRNA和蛋白的表達(dá)等[10]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)速效救心丸能夠有效改善心肌缺血，增加冠脈血流，減少心肌梗死面積等。但由于其化學(xué)成分復(fù)雜、結(jié)構(gòu)多樣，以及缺乏合適的分析方法，使得速效救心丸分子網(wǎng)絡(luò)層面的研究仍未見報道。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是從整體層面上來研究藥物與機(jī)體之間的相互作用關(guān)系，通過網(wǎng)絡(luò)分析方法系統(tǒng)整合并可視化多成分與多靶點之間的相互作用；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)遵循勒夏列特原理，即認(rèn)為生物體的健康狀態(tài)是一個平衡體系，疾病會使這個平衡體系發(fā)生偏移，而藥物能使這個平衡體系的改變減弱(1)任郭珉.基于文本挖掘的藥用植物數(shù)據(jù)庫的建立及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析D.北京:北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文,2014.；這種思想與中醫(yī)藥“整體觀”的傳統(tǒng)理論相吻合，因此網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)在系統(tǒng)生物整體角度闡明中藥發(fā)揮作用的潛在機(jī)制方面得到了廣泛的應(yīng)用，已經(jīng)初步完成了對茵陳蒿湯、四物湯、清肺消炎丸等的機(jī)制預(yù)測[11-13]。

本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究技術(shù)挖掘速效救心丸主要活性成分的作用靶點，構(gòu)建成分-靶點網(wǎng)絡(luò)，并通過蛋白互作分析預(yù)測靶點之間的相互作用關(guān)系，從分子網(wǎng)絡(luò)層面系統(tǒng)地闡明速效救心丸對心肌缺血疾病的多成分、多靶點、多生物途徑的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 化合物信息

化合物信息：1.龍腦（C10H8O），2.咖啡酸（C9H8O4），3.藁本內(nèi)酯（C12H14O2），4.丁基苯酞（C12H14O2），5.川芎嗪（C8H12N2），6.川芎內(nèi)酯G（C12H16O3），7.川芎內(nèi)酯F（C12H14O3），8.川芎內(nèi)酯 D（C12H14O4），9.川芎內(nèi)酯 C（C12H12O3），10.川芎內(nèi)酯A（C12H16O2），11.川芎內(nèi)酯I（C12H16O4），12.川芎內(nèi)酯E（C12H12O3），13.阿魏酸（C10H10O4），14.4,7-二羥基-4丁基苯酞（C12H14O4），15.3-丁基-4-羥基苯酞（C12H14O3），16.丁烯苯酞（C12H12O2），17.原兒茶酸（C7H6O4），18.香草酸（C8H8O4），19.蛇床內(nèi)酯（C12H18O2），20.阿魏酰奎寧酸（C17H20O9），21.二聚藁本內(nèi)酯（C24H28O4），22.二聚藁本內(nèi)酯（C24H30O4）。以上化合物的化學(xué)信息引自美國化學(xué)文摘數(shù)據(jù)庫（Chemical Abstract Service，CAS），并將每個化合物的結(jié)構(gòu)使用ChemBioOffice 2010軟件轉(zhuǎn)化成PharmMapper可識別的.sdf格式。

1.2 化合物吸收能力預(yù)測

對速效救心丸中鑒定的化合物進(jìn)行吸收性質(zhì)的計算預(yù)測，采用五原則、TPSA和旋轉(zhuǎn)鍵數(shù)的方法進(jìn)行。

（1）五原則：1997年Lipinski對2287藥物分子的結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行了分析，這2287個分子基本上通過了一期臨床的實驗。分析結(jié)構(gòu)表明，如果一個藥物分子具有好的吸收和穿透特性，應(yīng)符合下面的規(guī)則：①氫鍵給體（連接在N和O上的氫原子數(shù)）數(shù)目小于5；②氫鍵受體（N和O的數(shù)目）數(shù)目小于10；③相對分子質(zhì)量小于500；④脂水分配系數(shù)小于5。

化合物同時不符合四個限制條件的任意兩個，其吸收不好預(yù)測準(zhǔn)確率可達(dá)90%以上，若同時不符合三個條件，預(yù)測結(jié)果就會相當(dāng)可靠。

藥物分子量由ChemBioOffice 2010軟件（Cambridge-Soft Corporation）計算，ClogP由CloP 4.0 program軟件（BioByte Corporation，Claremont，CA）計算，氫鍵給體、氫鍵供體、TPSA和旋轉(zhuǎn)鍵數(shù)由互聯(lián)網(wǎng)Molinspiration Property Calculation Services計算

1.3 潛在作用靶點反向預(yù)測

以藥物小分子為探針，搜索活性小分子的潛在蛋白靶點，據(jù)此預(yù)測藥物小分子的活性，此為“反向藥效團(tuán)匹配方法”[14]。將化合物.sdf文件上傳至PharmMapper數(shù)據(jù)庫（http://59.78.96.61/pharmmapper/），選擇允許化合物存在構(gòu)象變化，最大構(gòu)象數(shù)設(shè)在100，選擇靶點集限定于人，產(chǎn)生虛擬篩選結(jié)果。在Uniprot數(shù)據(jù)庫中，將PharmMapper得到的蛋白名稱使用UniprotKB搜索功能轉(zhuǎn)化為蛋白標(biāo)準(zhǔn)名稱。

1.4 代謝通路預(yù)測

通常認(rèn)為，藥物靶點富集的通路，即是藥物能夠干擾和調(diào)控的代謝通路，我們使用MAS 3.0（http://bioinfo.capitalbio.com/mas3/）生物分子功能注釋平臺對靶點蛋白進(jìn)行GO富集分析和KEGG通路注釋分析。對于篩選出的代謝通路，人為選擇p值小于0.01，即相關(guān)性較大的代謝通路，進(jìn)行后續(xù)分析。

1.5 活性成分-靶點-通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

采用Cytoscape軟件的Merge功能對速效救心丸的活性成分、靶點蛋白、富集通路進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)模型構(gòu)建[15]?；钚猿煞帧悬c蛋白、代謝通路以不同顏色和形狀的節(jié)點表示，活性成分與其作用靶點蛋白之間用邊連接起來，靶點蛋白與其富集的通路之間也用邊連接，當(dāng)某一活性成分、代謝通路作用于相同的靶點蛋白時，活性成分和代謝通路也可連接起來。

1.6 蛋白互作分析

將速效救心丸中吸收較好的化合物靶點蛋白輸入String 9.1（http://String-db.org/）數(shù)據(jù)庫中，進(jìn)行蛋白相互作用信息的收集。選取蛋白相互作用得分值大于0.7的蛋白互作關(guān)系，將獲得數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape軟件，進(jìn)行功能模塊分析。

蛋白質(zhì)通過彼此之間相互作用結(jié)合成一個集合體來完成生物學(xué)功能，這些緊密聯(lián)系的結(jié)合體即為功能模塊[16]。MCODE算法是一種基于圖論的聚類算法，它能夠在大規(guī)模蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)中檢測出稠密連通區(qū)域即功能模塊，并對模塊中蛋白的關(guān)聯(lián)程度進(jìn)行打分[17]。本實驗采用MCODE算法對速效救心丸的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行模塊識別，將識別模塊大小的K-core設(shè)為3，即識別出的功能模塊至少含有4條邊。利用Cytoscape中的BinGO插件對識別出的不同功能模塊進(jìn)行功能注釋，其中顯著性選擇0.05。通過分析蛋白互作關(guān)系，有利于從系統(tǒng)層面研究速效救心丸的藥效機(jī)制。

2 結(jié)果

2.1 化合物吸收能力分析

血清藥物化學(xué)的觀點認(rèn)為，藥物中被吸收入血的成分才有可能被血液輸送到作用器官或部位來發(fā)揮藥效，因此化合物能否被人體有效吸收是決定其是否發(fā)揮藥效的重要標(biāo)準(zhǔn)。速效救心丸中，能夠被有效檢測到的化合物有22種，將這些化合物通過五原則、TPSA和旋轉(zhuǎn)鍵數(shù)篩選方法進(jìn)行篩選，共預(yù)測到19個吸收較好的化合物，結(jié)果如表1。

2.2 速效救心丸成分-靶點-代謝通路網(wǎng)絡(luò)

將19個吸收較好的化合物結(jié)構(gòu)信息投入到PharmMapper數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行反向靶點預(yù)測，將PharmMapper返回的靶點蛋白與Pubmed數(shù)據(jù)庫文獻(xiàn)檢索的結(jié)果進(jìn)行整合。19個化合物對應(yīng)的靶點蛋白依據(jù)匹配度（fit value）進(jìn)行篩選，共得到71個相關(guān)性較大的靶點蛋白，將對應(yīng)的靶點蛋白標(biāo)準(zhǔn)名稱投入Mas 3.0中，進(jìn)行代謝通路預(yù)測，篩選出與心肌缺血相關(guān)的代謝通路53條，建立活性成分-靶點-代謝通路網(wǎng)絡(luò)如圖1、表2。從網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究結(jié)果顯示，速效救心丸中19個主要成分涉及的代謝通路有MAPK信號通路、氨基酸代謝、VEGF信號通路、PPAR代謝通路等。

2.3 蛋白互作分析

心肌缺血疾病是復(fù)雜疾病，其發(fā)生發(fā)展必定涉及到許多具有生物功能的蛋白與蛋白之間的相互作用，因此研究速效救心丸的靶點蛋白與蛋白之間互作分析有助于揭示速效救心丸改善心肌缺血疾病的潛在機(jī)制。借助String 9.1（http://String-db.org/）數(shù)據(jù)庫，對速效救心丸的靶點蛋白進(jìn)行互作分析結(jié)果如圖2。蛋白質(zhì)通過彼此之間相互作用結(jié)合成一個集合體來完成生物學(xué)功能，這些緊密聯(lián)系的結(jié)合體即為功能模塊。識別功能模塊借助的是MCODE算法，它是一種基于圖論的聚類算法，它能夠在大規(guī)模蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)中檢測出稠密連通的功能模塊，并對模塊中蛋白的關(guān)聯(lián)程度進(jìn)行打分。借助MCODE算法和BinGo分析對速效救心丸蛋白互作網(wǎng)絡(luò)中的功能模塊進(jìn)行識別和解讀，有利于從系統(tǒng)層面研究速效救心丸的藥效機(jī)制（圖3，表3）。從蛋白互作網(wǎng)絡(luò)中識別出5個主要的功能模塊，分別與脂質(zhì)和固醇荷爾蒙的相關(guān)代謝、谷胱甘肽和氨基酸的相關(guān)代謝、炎癥反應(yīng)和免疫功能、心肌功能和能量供應(yīng)及血壓調(diào)節(jié)等方面相關(guān)。蛋白互作分析結(jié)果顯示速效救心丸中主要化學(xué)成分通過調(diào)節(jié)心臟能量供應(yīng)、脂質(zhì)紊亂、免疫反應(yīng)等發(fā)揮了改善心肌缺血疾病的作用。

表1 化合物吸收能力預(yù)測

圖1 “成分-靶點-通路”藥理學(xué)網(wǎng)絡(luò)” 化學(xué)成分，靶點蛋白，代謝通路

圖2 19個成分對應(yīng)靶點蛋白的蛋白互作分析網(wǎng)絡(luò)

表2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)“成分-靶點-通路”表格

圖3 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)中識別的主要功能模塊

3 討論

脂質(zhì)是人體內(nèi)大量存在的代謝物，它參與了人體中許多重要的生物學(xué)過程：血小板激活、細(xì)胞信號傳導(dǎo)、細(xì)胞骨架形成等[18,19]。伴有冠脈硬化的冠心病中，脂質(zhì)代謝的紊亂也與炎癥、氧化應(yīng)激、巨噬細(xì)胞凋亡密切相關(guān)[20]；隨年齡增大發(fā)生的線粒體功能紊亂和異常的線粒體脂肪酸氧化密不可分，與此同時異常的線粒體脂肪酸氧化也增加了冠心病的發(fā)生風(fēng)險[21]。除了脂質(zhì)代謝與冠心病相關(guān)外，固醇荷爾蒙代謝也與冠心病關(guān)系密切。硫酸化的腎上腺激素DHEAS對胰島素敏感性和脂質(zhì)代謝發(fā)揮了直接作用關(guān)系，并且降低的DHEA和DHEAS血清濃度預(yù)示了增加的冠心病風(fēng)險[22]；基于UPLC-QTOF/MS的代謝組學(xué)試驗中，Cer(t18:0/16:0)、Cer(d18:0/12:0)、Cer(d18:0/14:0)等固醇荷爾蒙可以作為潛在的生物標(biāo)志物來區(qū)分健康者與穩(wěn)定心絞痛患者、急性冠心病患者[23]。因此，脂質(zhì)代謝和固醇荷爾蒙相關(guān)代謝是冠心病發(fā)生、發(fā)展過程中的重要代謝通路，積極控制脂質(zhì)代謝和固醇荷爾蒙代謝的紊亂能夠有效改善冠心病。前人研究顯示，速效救心丸能夠降低ApoE敲除小鼠的血清甘油三酯的水平，并能夠穩(wěn)定動脈粥樣硬化的斑塊[24]。我們的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究顯示，MCODE算法識別的功能模塊1包括了脂質(zhì)代謝(GO:0071396、GO:0033993)和固醇荷爾蒙代謝(GO:0043401、GO:0071383、GO:0048545)，因此我們推測速效救心丸可以通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和固醇荷爾蒙類代謝發(fā)揮其改善冠心病的作用。

表3 代謝通路Go功能富集分析

氨基酸代謝在冠心病發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，它的變化與機(jī)體的氧化應(yīng)激、能量供應(yīng)等密切相關(guān)。氨基酸是重要的能量先導(dǎo)體，它能夠增加體內(nèi)ATP的形成并在心肌缺血疾病中，對心肌細(xì)胞發(fā)揮能量供給作用[25,26]。組氨酸既是自由基清除劑，作為組胺的前體又是機(jī)體的能量供應(yīng)；纈氨酸、色氨酸、異亮氨酸等都可以作為心臟的能量替代供應(yīng)者[26]。心肌缺血會破壞心肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，增加心肌細(xì)胞蛋白水解[27]，因此調(diào)節(jié)氨基酸相關(guān)代謝有助于心肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)重建并有助于補(bǔ)充和修復(fù)胞內(nèi)蛋白。在冠心病患者心肌缺血的狀態(tài)下，藥物對氨基酸代謝的改善，能夠增加對心肌的能量供應(yīng)，維持心肌細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)和功能。本研究的功能模塊2將速效救心丸的功能富集在氨基酸相關(guān)代謝通路（GO:0006575、GO:0043603、GO:1901564），功能模塊4包括AMP相關(guān)代謝（GO:0046033）、糖類代謝（GO:1901136）等都與能量供應(yīng)相關(guān)。這說明速效救心丸可以通過改善冠心病患者的氨基酸和糖代謝等來改善心肌的能量供應(yīng)，維持心肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能。功能模塊2還包括谷胱甘肽相關(guān)代謝（GO:0006749），谷胱甘肽是體內(nèi)重要的抗氧化劑[28]，速效救心丸對谷胱甘肽代謝過程的調(diào)節(jié)能夠改善機(jī)體的氧化應(yīng)激，減少自由基對機(jī)體的損傷，與此同時它還能夠通過干擾嘌呤代謝（GO:0006163、GO:0006198）來直接減少自由基的產(chǎn)生。有研究報道川芎嗪能夠直接清除超氧陰離子，并抑制誘導(dǎo)性NO的產(chǎn)生[29]，這一研究驗證了我們基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的推測。

在冠心病的發(fā)生、發(fā)展過程中伴隨著免疫炎癥反應(yīng)，有研究顯示在早發(fā)性冠心病患者體內(nèi)，IL-18、IL-6、IL-10、TNF-α的基因啟動子單核苷酸多態(tài)性與健康人的存在明顯變化，這些基因啟動子單核苷酸多態(tài)性的差異以及對應(yīng)血清內(nèi)細(xì)胞因子的濃度變化可以幫助我們解釋早發(fā)性冠心病患者體內(nèi)免疫炎癥反應(yīng)的誘發(fā)[30]。冠心病并發(fā)癥如牙周疾病等患者體內(nèi)，血清炎癥因子IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、TNF-γ的水平發(fā)生了明顯改變[31]。速效救心丸網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究中功能富集分析得到的功能模塊3主要包括了與免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應(yīng)相關(guān)的代謝通路如GO:0043406、GO:0002757、GO:0002253、GO:0050778等，此外有文獻(xiàn)報道藁本內(nèi)酯能夠抑制ERK、JNK和p38[32]，抑制MAPK通路，川芎嗪能夠增強(qiáng)Nf-κB抑制劑和抗炎因子IL-10的表達(dá)[33]。綜上，速效救心丸能夠通過發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)和改善炎癥反應(yīng)來發(fā)揮治療冠心病的作用。

腎素-血管緊張素系統(tǒng)的調(diào)節(jié)與內(nèi)皮功能密切相關(guān)，它能夠改善高血壓患者體內(nèi)的內(nèi)皮功能紊亂[34]，腎素-血管緊張素系統(tǒng)的抑制劑如血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、血管緊張素受體阻斷劑在治療心絞痛方面發(fā)揮了有效的作用[35]。功能模塊5顯示速效救心丸的藥效發(fā)揮與腎素-血管緊張素系統(tǒng)的調(diào)節(jié)相關(guān)如GO:0001991、GO:0002016、GO:0003081等，速效救心丸通過對腎素-血管緊張素系統(tǒng)的干預(yù)來實現(xiàn)對血壓等的調(diào)節(jié)。

綜上所述，本研究對速效救心丸中的主要成分進(jìn)行了吸收能力篩選，共篩得19個原型吸收較好的化合物，對19個化合物及相關(guān)蛋白靶點和對應(yīng)代謝通路進(jìn)行了整合，并對靶點進(jìn)行了蛋白互作分析，進(jìn)而對蛋白互作網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行了功能富集分析。研究結(jié)果顯示速效救心丸主要是通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和固醇荷爾蒙代謝、氨基酸代謝、免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應(yīng)、腎素-血管緊張素系統(tǒng)調(diào)節(jié)來改善冠心病患者的氧化應(yīng)激、能量供應(yīng)、免疫功能、炎癥反應(yīng)、血壓變化。本實驗借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究方法從分子網(wǎng)絡(luò)層面解釋了速效救心丸治療冠心病的潛在藥效機(jī)制，為速效救心丸的深入藥效研究奠定了基礎(chǔ)。

1 Ili? M D,Ili? S.Prevalence and prognostic significance of silent myocardial ischemia in patients after myocardial infarction.Vojnosanit Pregl,2007,64(8),519-523.

2 明磊,盧丹,劉金平等.抗心肌缺血中藥有效成分研究進(jìn)展.人參研究,2010(3):38-41.

3 王英杰,王肖龍.抗心肌缺血藥物治療進(jìn)展.世界臨床藥物,2009(12):761-764.

4 李璞.速效救心丸及其新對藥-川芎、冰片.北京中醫(yī)藥大學(xué),200625(9):575-576.

5 段可杰,張聰宇,楊曉燕.速效救心丸治療冠心病心絞痛40例臨床觀察.天津中醫(yī)藥大學(xué),2002,19(1):20-21.

6 謝大昌,沈建平.速效救心丸治療冠心病心絞痛的臨床研究進(jìn)展.中醫(yī)學(xué)報,2013,28(6):891-893.

7 Liang M J.,He L C,Yang G D.Screening,analysis and in vitro vasodilatation of effective components from Ligusticum Chuanxiong.Life Sci,2005,78(2):128-133.

8 Zou A H,Wang L,Xiao H B,et al.Identification of the absorbed components and metabolites in rat plasma after oral administration of Rhizoma Chuanxiong decoction by HPLC-ESI-MS/MS.J pharmaceut biomed,2011,56(5):1046-1056.

9 Lv L,Jiang S S,Xu J,et al.Protective effect of ligustrazine against myocardial ischaemia reperfusion in rats:the role of endothelial nitric oxide synthase.Clin Exp Pharmacol Physiol,2012,39(1):20-27.

10 Lin C M,Chiu J H,Wu I H,et al.Ferulic acid augments angiogenesis via VEGF,PDGF and HIF-1 alpha.J Nutr Biochem,2010,21(7):627-630.

11 Liu T,Huang H B,Lin Z C,et al.Exploring the potential molecular target proteins of Yinchenhao decoction using computer systemic biology.J Chin Med Mater,2011,34(10):1648-1651.

12 Liu P,Duan J A,Bai G,et al.Network pharmacology study on major active compounds of Siwu decoction analogous formulae for treating primary dysmenorrhea of gynecology blood stasis syndrome.China J Chin Mater Med,2014,39(1):113?120.

13 Cheng B F,Hou Y Y,Jiang M,et al.Anti-inflammatory mechanism of Qingfei Xiaoyan Wan studied with network pharmacology.Acta Pharm Sin,2013,48(5):686-693.

14 Liu X,Ouyang S,Yu B,et al.PharmMapper server:a web server for potential drug target identification using pharmaco-phore mapping approach.Nucleic Acids Res,2010,38:W609-W614.

15 Saito R,Smoot M E,Ono K,et al.A travel guide to Cytoscape plugins.Nat Methods,2012,9(11):1069-1076.

16 Bader G D,Hogue C W.Analyzing yeast protein-protein interaction data obtained from different sources.Nat Biotechnol,2002,20(10):991-997.

17 Bader G D,Hogue C W.An automated method for finding molecular complexes in large protein interaction networks.BMC Bioinformatics,2003,4(1):2.

18 Z Honda,S Ishii,T Shimizu.Platelet-activating factor receptor.J Biochem,2002,131:773-779.

19 Taylor C W.Controlling calcium entry,Cell,2002,111:767-769.

20 Meikle P J,Wong G,Barlow C K,et al.Lipidomics:potential role in risk prediction and therapeutic monitoring for diabetes and cardiovascular disease.Pharmacol Ther,2014,143(1):12-23.

21 Rizza S,Copetti M,Rossi C,et al.Metabolomics signature improves the prediction of cardiovascular events in elderly subjects.Atherosclerosis,2014,232(2):260-264.

22 Tivesten ?,Vandenput L,Carlzon D,et al.Dehydroepiandrosterone and its sulfate predict the 5-year risk of coronary heart disease events in elderly men.J Am Coll Cardiol,2014,64(17):1801-1810.

23 Xu X B,Gao B B,Guan Q J,et al.Metabolomic profile for the early detection of coronary artery disease by using UPLC-QTOF/MS.J Pharm Biomed Anal,2016,129:34-42.

24 Zhang J B,Zhuang P W,Lu Z Q,et al.Suxiaojiuxin pill enhances atherosclerotic plaque stability by modulating the MMPs/TIMPs balance in ApoE-deficient mice.J Cardiovasc Pharmacol,2014,64(2),120-126.

25 Stanley W C.Myocardial energy metabolism during ischemia and the mechanisms of metabolic therapies.J Cardiovasc Pharmacol Ther,2004,9 Suppl 1:S31-S45.

26 McNulty P H,Jacob R,Deckelbaum L I,etal.Effectof hyperinsulinemia on myocardial amino acid uptake in patients with coronary artery disease.Metabolism,2000,49(10):1365-1369.

27 Drake K J,Sidorov V Y,McGuinness OP,et al.Amino acids as metabolic substrates during cardiac ischemia.Exp Biol Med,2012,237(12):1369-1378.

28 Zhang Z,Wei T,Hou J,et al.Tetramethylpyrazine scavenges superoxide anion and decreases nitric oxide production in human polymorphonuclear leukocytes.Life sci.2003,72(22),2465-2472.

29 Madisetty M K,Kumaraswami K,Katkam S,et al.Assessment of oxidative stress markers and carotid artery intima-media thichness in elderly patients without and with coronary artery disease.Indian J Clin Biochem,2016,31(3):278-285.

30 Ansari W M,Humphries S E,Naveed A K,et al.Influence of cytokine gene polymorphisms on proinflammatory/anti-inflammatory cytokine imbalance in premature coronary artery disease.Postgrad Med J,2017,93(1098):209.

31 Cassio K,Montenegro M M,Ribeiro I W J,et al.Periodontal disease and inflammatory blood cytokines in patients with stable coronary artery disease.J Appl Oral Sci.2016,24(4),352-358.

32 Lu Q,Qiu T Q,Yang H.Ligustilide inhibits vascular smooth muscle cells proliferation.Eur J Pharmacol,2006,542(1-3):136-140.

33 Hu J Z,Huang J H,Xiao Z M,et al.Tetramethylpyrazine accelerates the function recovery of traumatic spinal cord in rat model by attenuating inflammation.J Neurol Sci,2013,324(1-2):94-99.

34 Goto K,Fujii K,Onaka U,et al.Renin-angiotensin system blockade improves endothelial dysfunction in hypertension.Hypertension,2000,36(4):575-580.

35 Luscher T F.Endothelial dysfunction:the role and impact of the reninangiotensin system.Heart,2000,84(suppl 1):i20-i22:discussion i50.