王船英，劉 圣，王成永

(1.安徽中醫(yī)藥大學，安徽合肥 230038；2.安徽醫(yī)學高等?？茖W校，安徽合肥 230601；3.安徽省立醫(yī)院，安徽合肥 230001)

桔梗(Platycodon grandiflorus)是桔?？撇荼局参?，可用于治療痰多、咽痛、抗炎、鎮(zhèn)靜等。桔梗中的化學成分很多，含有大量皂苷類、黃酮類、酚類、多糖類化合物等。其中桔梗皂苷D是主要皂苷，是其主要的有效成分，具有顯著的鎮(zhèn)咳祛痰、抗腫瘤、抗氧化及免疫增強作用[1]。因此，桔梗皂苷在食品、醫(yī)藥和化工領域都有著廣泛的應用。但市場上銷售的桔梗飲片質(zhì)量參差不齊，本實驗通過對15批桔梗飲片的質(zhì)量進行定性定量分析并作出總結，為市場和企業(yè)飲片質(zhì)量標準的制定提供參考和依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 藥材、儀器與試劑

1.1.1 藥材

桔梗飲片(安徽源和堂藥業(yè)股份有限公司提供)，桔梗藥材來源安徽亳州(1-3)、太和(4-6)、渦陽(7-9)、吉林(10-12)、撫松(13-15)。

1.1.2 儀器

硅膠G薄層板、稱量瓶、打粉機、馬弗爐、恒溫水浴鍋、超聲清洗儀(UP-2200H型)、萬分之一電子天平(上海越平科學儀器有限公司)、電熱恒溫鼓風干燥箱(PHG-9140A)、Waters1525 Binary HPLC泵、Waters2489紫外檢測器、AT-330柱溫箱。

1.1.3 試劑

桔梗皂苷D對照品(批號：11851-2016-07，中國食品藥品檢定研究院，純度94.0%)、桔梗對照藥材(批號：121028-201210，中國食品藥品檢定研究院)、娃哈哈純凈水、乙醇、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、無水硫酸鈉、甲醇、乙腈、乙醚、濃硫酸。以上試劑，甲醇、乙腈為色譜純級別，其余為分析純。

2 水分、灰分及浸出物的測定

2.1 測定方法

水分測定參照《中國藥典》2015年版四部通則中的水分測定法第二法(烘干法)，總灰分測定參照《中國藥典》2015年版四部通則中灰分測定法，浸出物測定參照《中國藥典》2015年版四部通則中浸出物測定法(熱浸法)。

2.2 結果分析

15批飲片的水分、灰分及浸出物檢查結果見表1所示。

表1 15批飲片的水分、灰分及浸出物檢查結果

3 鑒別

15批飲片，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學藥學院王成永教授和安徽省立醫(yī)院藥劑科主任藥師劉圣的鑒別，確認為桔?？浦参锝酃５母稍锴衅?。

按中國藥典第一部桔梗項下薄層色譜鑒別的處理方法制得15批飲片的供試品溶液。另取桔梗對照藥材一份，采用同樣的方法制成對照藥材溶液。用毛細管吸取上述溶液，分別點于相同規(guī)格的硅膠G薄層板上，將配置好的石油醚-乙酸乙酯(7∶4)的展開劑倒入展開槽內(nèi)進行展開，晾干后用10%硫酸乙醇溶液噴灑后，晾干[2]。將薄層板放置于烘箱中105℃下加熱至斑點顯色清晰，結果顯示：供試品色譜在與對照藥材色譜相應的位置上有相同顏色的斑點(圖1)。

圖1 DZYC為桔梗對照藥材；1-15為不同批次的桔梗飲片

4 桔梗皂苷D含量的測定

4.1 色譜條件

高效液相色譜儀(Waters1525二元高壓泵，Waters2489紫外檢測器),大連依利特C18色譜柱，流動相為乙腈-水(28∶72)，檢測波長210 nm,流速1mL/min,柱溫30℃。

4.2 對照品的制備

精密稱取桔梗皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1mL含桔梗皂苷D 1mg的溶液(1.0026 mg/mL)即得，備用。

4.3 供試品的制備

按藥典方法，制取供試品。取本品粉末(過二號篩)約2.0 g，精密加入甲醇50 mL，超聲處理30 min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻、濾過。精密量取續(xù)濾液25 mL，水浴蒸干，殘渣加水20 mL，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20 mL，合并正丁醇提取液。用氨試液50 mL洗滌，棄去氨試液，再用正丁醇飽和的水50 mL洗滌，正丁醇液蒸干，殘渣用甲醇3 mL使溶解，加硅膠0.5 g拌勻，置水浴上蒸干，加在以氯仿-甲醇(9∶1)裝好的硅膠柱(內(nèi)徑2 cm，10 g)上，以氯仿-甲醇(9∶1)50 mL洗脫，棄去洗脫液，再以氯仿-甲醇-水(60∶20∶3)100 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用氯仿-甲醇-水(60∶29∶6)100 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，搖勻，即得[3]。15批供試品溶液均用此法制得。

4.4 線性關系考察

分別精密吸取4.2項對照品溶液稀釋成0.1、0.25、0.5、0.75 mg/mL不同濃度的溶液，分別取0.1、0.25、0.5、0.75、1 mg/mL溶液20 uL注入液相色譜儀，得回歸方程Y=2×106X+15618，R2=0.9992。結果表明，桔梗皂苷D在2～20 ug之間，其濃度與峰面積呈良好的線性關系(圖2)。

圖2 不同濃度的樣品溶液的線性關系

4.5 精密度實驗

精密吸取4.4項制取的0.1 mg/mL對照品溶液連續(xù)進樣6次，每次20 uL。得到桔梗皂苷D的峰面積，其RSD值為2.4%，表明儀器精密度良好。

4.6 重復性實驗

精密吸取4.3項制取的同一供試品溶液6次，每次20 uL。其桔梗皂苷D的平均含量為1.0466 mg/g，其RSD值為1.6%。表明該方法的重復性較好。

4.7 穩(wěn)定性實驗

精密量取4.3項同一供試品溶液20 uL，在4.1色譜條件下，在放置0、2、4、10、24 h測定桔梗皂苷D峰面積，并計算RSD值為2.0%。說明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

4.8 加樣回收率實驗

精密稱定同一批烘干至恒重的飲片6份，每份約1 g，再精確加入1mg/mL桔梗皂苷D對照品溶液1mL，按4.3制成供試品溶液，記錄峰面積，計算回收率為101.2%,RSD值為2.1%。說明本實驗回收率良好。

4.9 供試品含量測定

分別取4.3項制得的15批供試品溶液和對照品溶液各進樣20 uL,在同一色譜條件下，測定出供試品桔梗皂苷D含量在0.10%～0.15%之間，均不低于國家藥典規(guī)定的0.1%的標準。桔梗皂苷D對照品和桔梗飲片的HPLC圖譜見圖3和圖4。

圖3 桔梗皂苷D對照品HPLC圖譜

圖4 桔梗飲片HPLC圖譜

5 結語

根據(jù)實驗結果，15批桔梗飲片的水分、灰分及浸出物和桔梗皂苷D含量均達到中國藥典2015版標準，經(jīng)檢查均達到合格標準。在進行薄層色譜鑒別時，在15版藥典基礎上，通過改變展開劑等方法，獲得了更清晰、更持久的薄層色譜圖譜，取得了更佳的實驗效果。

[參考文獻]

[1]李盈,王舉濤,桂雙英,等.桔梗的化學成分及藥理作用研究進展[J].食品與藥品,2016(1):72-75.

[2]鐘永康.桔梗、連翹、五倍子薄層色譜鑒別方法的研究與改進[J].中國現(xiàn)代藥物應用,2007(3):13-14.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[M].北京:化工出版社,2015:172.