梁俊青 蘇秀蘭 侯婧 吳金鎖 崔宏偉 牟永平

卵巢癌在婦科腫瘤中發(fā)病率居第三位，而其致死率卻占據(jù)首位[1]。卵巢癌早期治療，其5年生存率可達(dá)92%，然而進(jìn)展期卵巢癌5年生存率不足30%[2]。因此卵巢癌的早期診斷與早期治療可有效改善預(yù)后[3]。糖類抗原125(cancer antigen 125，CA125)是臨床第一個(gè)用于檢測(cè)卵巢癌的血清標(biāo)志物，于1981年首次被Bast等發(fā)現(xiàn)[4]。此后的臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)其在卵巢癌的診斷中特異性不高[5]。人附睪分泌蛋白4(human epididymis secretory protein 4,HE4)作為一個(gè)新的卵巢癌的腫瘤標(biāo)志物[6]，得到了人們更加深入的研究[7,8]。

目前常用的HE4檢測(cè)的方法有化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA)[9]，本項(xiàng)目采用以磁珠作為載體，吖啶酯標(biāo)記檢測(cè)抗體的化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)開發(fā)HE4定量檢測(cè)試劑盒，其操作簡(jiǎn)單，試劑較穩(wěn)定，用于輔助疾病預(yù)防與控制、臨床用藥等。

對(duì)象與方法

1.研究對(duì)象

選擇2014年9月—2015年10月在內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬人民醫(yī)院收治的經(jīng)手術(shù)病理檢查報(bào)告確診為卵巢惡性腫瘤組和盆腔良性腫瘤組患者，根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2009手術(shù)病理分期標(biāo)準(zhǔn)，56例上皮性卵巢癌患者，盆腔腫瘤組89例，婦科其他良性腫瘤88例，外科腫瘤48例，同期婦科體檢對(duì)照組84例。共入組了365例女性血清樣本，年齡分布在16～92歲，其中34歲及以下有52例(14%)、35～44歲有70例(19%)、45～54歲有106例(29%)、55～64歲有72例(20%)、65歲及以上有65例(18%)。獲得住院患者所在醫(yī)院的醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，經(jīng)簽署知情同意書后采集標(biāo)本。

2.試劑和儀器

試驗(yàn)組采用廣州市達(dá)瑞生物技術(shù)股份有限公司研制開發(fā)的“HE4定量測(cè)定試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)” (注冊(cè)號(hào)：國(guó)食藥監(jiān)械(進(jìn))字2012第3400236號(hào))，根據(jù)《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，本次臨床研究采用盲法、對(duì)比的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選擇已上市同類試劑德國(guó)羅氏HE4檢測(cè)試劑盒(電化學(xué)發(fā)光法)(注冊(cè)號(hào)：國(guó)食藥監(jiān)械(進(jìn))字2012第3400236號(hào))，作為復(fù)核試劑檢測(cè)，同時(shí)使用德國(guó)羅氏試劑盒檢測(cè)CA125水平。

3.檢測(cè)方法

血清檢測(cè)采用德國(guó)羅氏E601全自動(dòng)電化學(xué)免疫分析儀，所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒及儀器說明書進(jìn)行。陽性結(jié)果評(píng)價(jià)血清HE4及CA125的參考值分別0～140 pmol/L與0～35 U/mL。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié)果

1.兩種試劑盒分別檢測(cè)上皮性卵巢癌,盆腔良性腫物與其他婦科良性腫瘤，外科腫瘤及健康組血清HE4的濃度

國(guó)產(chǎn)達(dá)瑞試劑盒檢測(cè)卵巢癌組的血清HE4濃度中位數(shù)是189.8 pmol/L 高于盆腔腫物組(72.7 pmol/L)、婦科其他良性疾病組(47.7 pmol/L)、外科腫瘤組(69.4 pmol/L)及婦科體檢對(duì)照組(42.4 pmol/L)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；德國(guó)羅氏檢測(cè)試劑盒檢測(cè)的上皮性卵巢癌組，盆腔腫物組，婦科良性腫瘤組，外科腫瘤組，體檢對(duì)照組的HE4濃度中位數(shù)分別是209.3 pmol/L，77.2 pmol/L，51.5 pmol/L，74.2 pmol/L，45.2 pmol/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見表1)。

表1 兩種檢測(cè)試劑盒檢測(cè)HE4在不同人群中的濃度中位數(shù)比較

注：M為中位數(shù)濃度，Q1、Q3為第1和第3四分位數(shù)(pmol/L),*各組分別與上皮性卵巢癌組相比，均P<0.01

2.使用HE4-達(dá)瑞,HE4-羅氏，CA125試劑盒檢測(cè)I，II期，III、IV期卵巢癌HE4的濃度

達(dá)瑞試劑盒檢測(cè)卵巢癌III、IV 期HE4濃度中位數(shù)為(236.3 pmol/L)顯著高于I、II期HE4濃度(96.4 pmol/L)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；德國(guó)羅氏檢測(cè)卵巢癌III、IV 期HE4濃度(227.4 pmol/L)顯著高于I、II期(101.2 pmol/L)(P<0.01)；CA125 I、II期和III、IV 期濃度分別為67.8 U/mL和206.4 U/mL，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見表2)。

表2 使用HE4 -達(dá)瑞,HE4-羅氏，CA125試劑盒檢測(cè)不同期卵巢癌M(Q1-Q3)

*表示HE4-達(dá)瑞(pmol/L),§HE4-羅氏(pmol/L)，CA125(U/mL)檢測(cè)卵巢I，II期濃度中位數(shù)與卵巢癌III、IV期相比分別為P<0.01

3.HE4-達(dá)瑞，HE4-羅氏單獨(dú)與聯(lián)合檢測(cè)早期和晚期卵巢癌的敏感度比較

在早期卵巢癌I，II期，單獨(dú)使用HE4-達(dá)瑞檢測(cè)卵巢癌敏感度為80.6%，聯(lián)合CA125檢測(cè)為83.3%，HE4-羅氏單獨(dú)檢測(cè)為58.3%，聯(lián)合CA125為66.7%，HE4-達(dá)瑞在早期單獨(dú)或聯(lián)合檢測(cè)診斷卵巢癌其敏感度均優(yōu)于HE4-羅氏(P<0.05)。在晚期卵巢癌III、IV期，單獨(dú)使用HE4-達(dá)瑞檢測(cè)卵巢癌敏感度為85.0%，聯(lián)合CA125檢測(cè)為90.0%，HE4-羅氏單獨(dú)檢測(cè)為80.0%，聯(lián)合CA125為85.0%，HE4-達(dá)瑞與HE4-羅氏在晚期卵巢癌檢測(cè)中的敏感度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見表3)。

表3 56例上皮性卵巢癌HE4-達(dá)瑞，HE4-羅氏單獨(dú)與聯(lián)合檢測(cè)早期晚期的敏感度

注：+代表HE4大于170 pmol/L，或CA-125大于35(U/mL)；-代表HE4在0-170 pmol/L，或CA-125在0-35(U/mL);*表示HE4 -達(dá)瑞單獨(dú)檢測(cè)卵巢癌I，II期敏感性與HE4-羅氏檢測(cè)卵巢癌I，II期相比P均<0.05；§表示HE4-達(dá)瑞聯(lián)合CA125檢測(cè)卵巢癌I，II敏感度與HE4-羅氏聯(lián)合檢測(cè)卵巢癌I，II期相比P均<0.05

4.線性范圍內(nèi)測(cè)值的相關(guān)性分析

全部數(shù)據(jù)的散點(diǎn)圖顯示HE4達(dá)瑞與HE4羅氏間線性關(guān)系高度一致。對(duì)應(yīng)超出待考核試劑線性范圍的6例樣本，進(jìn)行稀釋后重檢,線性回歸方程為Y=5.017+1.006X，線性回歸的決定系數(shù)r值高達(dá)0.973(P<0.001)。(見圖1)。

圖1 線性范圍內(nèi)測(cè)值的相關(guān)性分析散點(diǎn)圖

討論

目前常用的HE4檢測(cè)的方法有酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)[10]、時(shí)間分辨熒光免疫分析法(TRIFA)[11]、化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA)[9,12]。傳統(tǒng)的ELISA檢測(cè)方法靈敏度低，適用于定性和半定量檢測(cè)；時(shí)間分辨操作復(fù)雜，反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，試劑成本高?；瘜W(xué)發(fā)光操作簡(jiǎn)單，試劑較穩(wěn)定[13]，進(jìn)口試劑成本較高，國(guó)產(chǎn)試劑合理。

本次臨床研究采用盲法、對(duì)比的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)廣州市達(dá)瑞生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)的“人附睪分泌蛋白4(HE4)定量測(cè)定試劑盒(化學(xué)發(fā)光免疫分析法)”進(jìn)行了臨床試驗(yàn)研究。整個(gè)臨床試驗(yàn)過程均在嚴(yán)格控制下進(jìn)行，由經(jīng)專門培訓(xùn)的測(cè)試人員進(jìn)行檢測(cè)分析。

本次臨床研究共入組了365例。入組的樣本中包含的疾病主要有：卵巢癌、盆腔腫物、婦科良性疾病、外科腫瘤。有359例樣本的待考核測(cè)值與對(duì)照測(cè)值均在對(duì)應(yīng)試劑盒的線性范圍內(nèi)，有6例超出了待考核試劑的線性范圍，超出待考核試劑線性范圍的6例樣本，進(jìn)行稀釋后重檢。對(duì)于線性范圍內(nèi)的359例樣本測(cè)值進(jìn)行相關(guān)性分析得：待考核測(cè)值與對(duì)照測(cè)值得相關(guān)系數(shù)r值為0.973。由此可見，本次臨床試驗(yàn)結(jié)果表明待考核試劑盒測(cè)定結(jié)果較為準(zhǔn)確、穩(wěn)定和可靠，與現(xiàn)行試劑檢測(cè)性能相同。

HE4首先在附睪遠(yuǎn)端的上皮中被發(fā)現(xiàn)，屬于乳清酸性4-二硫化中心蛋白家族,具有疑似胰蛋白酶抑制劑的特性[14]。分泌型HE4已經(jīng)在卵巢癌患者的血清中檢測(cè)到有高水平表達(dá)[15]。使用達(dá)瑞試劑盒和德國(guó)羅氏檢測(cè)試劑盒檢測(cè)卵巢癌組的血清HE4濃度高于盆腔腫物組、婦科良性疾病組、外科腫瘤組及體檢對(duì)照組。兩種試劑盒都可以較準(zhǔn)確地檢測(cè)到血清HE4濃度，兩種檢驗(yàn)方法無顯著性的差別。

近年來，CA125不同維度地運(yùn)用，使其增加了在卵巢癌篩查、診斷、評(píng)估及預(yù)后判斷方面的價(jià)值[16]。進(jìn)一步分析卵巢癌不同病理分期組的HE4與CA125的表達(dá)量，卵巢癌III、IV 期HE4濃度中位數(shù)明顯高于I、II期。卵巢癌組患者血 HE4水平均高于對(duì)照組和其他疾病組 且Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌患者、血清腫瘤標(biāo)志物水平分別高于Ⅰ、Ⅱ期患者，表明血清HE4檢測(cè)在卵巢癌的診斷中具有重要價(jià)值[17]。達(dá)瑞化學(xué)發(fā)光試劑盒HE4聯(lián)合CA125診斷早期卵巢癌敏感度為83.3%，羅氏化學(xué)發(fā)光試劑盒HE4 聯(lián)合CA125診斷早期卵巢癌敏感度為66.7%，達(dá)瑞、羅氏HE4 試劑盒聯(lián)合CA125檢測(cè)在晚期卵巢癌的診斷中的敏感度分別為 90.0%和80.0%。達(dá)瑞采用以磁珠作為載體，吖啶酯標(biāo)記檢測(cè)抗體的化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)開發(fā)HE4定量檢測(cè)試劑盒，在診斷早期卵巢癌方面較好。HE4聯(lián)合CA125測(cè)定有助于卵巢癌的診斷，可作為很好的卵巢癌標(biāo)志物，提高早期卵巢癌的診斷率[18]。

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