杜麗坤,楊超

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

結(jié)節(jié)性甲狀腺腫是一種常見(jiàn)的良性甲狀腺疾病，多是由于甲狀腺良性上皮細(xì)胞增生太過(guò)而形成[1]。本病發(fā)病率約為7%以上[2]，其中甲狀腺癌的比例為5%～15%左右，其影響因素多為年齡、自身免疫、放射線(xiàn)接觸史、碘攝入、遺傳及其他[3]。以女性和老年人群發(fā)病率高，多表現(xiàn)為不同程度的甲狀腺腫大,發(fā)病之初多為單個(gè)結(jié)節(jié)，隨著病情進(jìn)展，可觸摸到多個(gè)結(jié)節(jié), 大小不等，形態(tài)各異，患者僅有頸部不適感，甚至無(wú)自覺(jué)癥狀。中醫(yī)內(nèi)科將甲狀腺結(jié)節(jié)歸為 “癭病”的范圍，“癭”之稱(chēng)呼源自于戰(zhàn)國(guó)《莊子 德充符》。《外科正宗·癭瘤論》認(rèn)為：“夫人生癭瘤之癥，非陰陽(yáng)正氣結(jié)腫，乃五臟濁氣、瘀血、痰滯而成”[4]，認(rèn)為氣滯、血瘀、痰凝壅結(jié)于頸前乃本病的基本發(fā)病機(jī)理[5]。大量醫(yī)學(xué)研究報(bào)告顯示，以辨證論治及整體調(diào)節(jié)為基礎(chǔ)的中醫(yī)藥療法，在治療甲狀腺疾病方面有重要臨床意義，能從根本上改善患者體質(zhì)，藥物敏高度高，療效顯著。本文用PTU造成大鼠甲狀腺腫伴甲減的模型，觀察貝牡莪消丸、優(yōu)甲樂(lè)對(duì)甲狀腺腫伴甲減大鼠TSH的恢復(fù)情況并進(jìn)行療效對(duì)比，評(píng)價(jià)兩種藥物在甲狀腺腫伴甲減大鼠空間認(rèn)知能力、探究行為、視覺(jué)記憶等方面的影響。旨在論證貝牡莪消丸治療甲狀腺腫伴甲減的作用機(jī)理，為其更好應(yīng)用于臨床提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

40只SPF級(jí)健康雄性SD大鼠，體質(zhì)量(123±8.5)g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，隨機(jī)分為8籠，每籠5只。

1.2 藥品

貝牡莪消丸(浙貝母30 g、莪術(shù)20 g、牡蠣30 g、玄參20 g、夏枯草20 g)由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院制劑室提供，每只大鼠2 ml，每日1次灌胃；PTU(上海朝暉藥業(yè)有限公司，50 mg×100片/瓶，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H31021082)；優(yōu)甲樂(lè)(德國(guó)默克公司，50 μg×100片/瓶，批號(hào)H20140052)。

1.3 試劑

TSH放免試劑藥盒購(gòu)于北京北方生物技術(shù)研究所有限公司(貨號(hào)：E-EL-R0976c)。

1.4 儀器

BS223S天平，低溫冰箱，Gc-1500型γ放射免疫計(jì)算器，光鏡，曠場(chǎng)場(chǎng)箱。

1.5 方法

造模：選取40只SD大鼠，喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)選取10只作為空白組，給予生理鹽水2 ml/d。其余30只予以PTU 0.15 mg/g，每日1次，連續(xù)灌胃40天。40天后利用彩色多普勒判斷，模型均制備成功。造模成功后，將30只大鼠隨機(jī)分為3組，即模型對(duì)照組、貝牡莪消丸組、優(yōu)甲樂(lè)組，分別給予生理鹽水(2 ml/d)、貝牡莪消丸(3 ml/d)、優(yōu)甲樂(lè)(0.08 μg/g)。給藥30天后，以10天為一個(gè)周期，分別于給藥前、給藥10天后、給藥20天后、給藥30天后，進(jìn)行大鼠行為學(xué)指標(biāo)檢測(cè)(敞箱實(shí)驗(yàn))及新奇事物認(rèn)知試驗(yàn)檢測(cè)，并于給藥30天后處死大鼠，鏡下觀察大鼠甲狀腺細(xì)胞形態(tài)，并取血清測(cè)定TSH。

敞箱實(shí)驗(yàn)：(又稱(chēng)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn))曠場(chǎng)場(chǎng)箱采用長(zhǎng)100 cm，寬100 cm，高50 cm的木板，箱內(nèi)壁全部涂黑。箱底均分為25個(gè)正方格(長(zhǎng)20 cm，寬20 cm)，沿箱底周?chē)来尉幪?hào)，其中序號(hào)1～16均為外周場(chǎng)區(qū)，序號(hào)17～24均為中央場(chǎng)區(qū)，25為正中央場(chǎng)區(qū)稱(chēng)為正中格。實(shí)驗(yàn)時(shí)捏住大鼠尾巴根部將其輕放入25號(hào)正中格中，觀察4 min內(nèi)活動(dòng)情況，依次逐個(gè)測(cè)定其余大鼠，并于每次測(cè)定結(jié)束后清除箱內(nèi)動(dòng)物排泄物。統(tǒng)計(jì)各只大鼠正中格停留時(shí)間、穿格總數(shù)、直立次數(shù)。

新奇事物認(rèn)識(shí)試驗(yàn)：在試驗(yàn)前5天，每日在鼠籠中放置2個(gè)物體，允許大鼠探究2 h，每天1次。試驗(yàn)時(shí)，將大鼠單獨(dú)放入一鼠籠中，同樣放置2個(gè)物體，一個(gè)與試驗(yàn)前探索相似，另一個(gè)為新物體，允許探索4 min，依次逐個(gè)測(cè)定其余大鼠。統(tǒng)計(jì)各個(gè)大鼠探索新奇物體的時(shí)間與總時(shí)間，并計(jì)算兩時(shí)間之比。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 貝牡莪消丸和優(yōu)甲樂(lè)對(duì)甲狀腺腫伴甲減大鼠TSH值的影響

由表1可見(jiàn),與空白組相比，模型對(duì)照組的TSH值明顯增高(P<0.05)；而與模型對(duì)照組比較，貝牡莪消丸組的TSH值明顯降低(P<0.05)。

表1 貝牡莪消丸和優(yōu)甲樂(lè)對(duì)甲狀腺腫伴甲減 大鼠TSH值的影響

注：與空白組比較，#P<0.05；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05

2.2 貝牡莪消丸和優(yōu)甲樂(lè)對(duì)甲狀腺腫伴甲減大鼠行為學(xué)方面的影響

2.2.1 敞箱實(shí)驗(yàn)-正中格停留時(shí)間

如表2所示，給藥20天后貝牡莪消丸組與模型組相比在正中格停留時(shí)間顯著減少，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，給藥30天后其正中格停留時(shí)間較前幾組有下降趨勢(shì)，說(shuō)明應(yīng)用貝牡莪消丸治療后，甲減模型大鼠異常空降認(rèn)知能力得以明顯緩解。

表2 貝牡莪消丸和優(yōu)甲樂(lè)對(duì)甲狀腺腫伴甲減大鼠敞箱實(shí)驗(yàn)-正中格停留時(shí)間的影響

注：與空白組比較，#P<0.05；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05

2.2.2 敞箱實(shí)驗(yàn)-直立次數(shù)及穿越格數(shù)

如表3所示，大鼠直立次數(shù)及表4大鼠穿越格數(shù)所示，空白組、模型組、優(yōu)甲樂(lè)組、貝牡莪消丸組在各個(gè)給藥周期均無(wú)明顯差異，提示空白組、模型組、優(yōu)甲樂(lè)組、貝牡莪消丸組大鼠對(duì)陌生環(huán)境探究活動(dòng)未見(jiàn)明顯異常。

表3 貝牡莪消丸和優(yōu)甲樂(lè)對(duì)甲狀腺腫伴甲減大鼠敞箱實(shí)驗(yàn)-直立次數(shù)的影響

表4 貝牡莪消丸和優(yōu)甲樂(lè)對(duì)甲狀腺腫伴甲減大鼠敞箱實(shí)驗(yàn)-穿越格數(shù)的影響

2.2.3 新奇事物認(rèn)識(shí)試驗(yàn)-總時(shí)間及新事物優(yōu)先指數(shù)

如表5所示，優(yōu)甲樂(lè)組在給藥10天后及給藥20天后與空白組、模型組相比總時(shí)間顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，給藥30天后與模型組相比總時(shí)間顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。如表6所示，優(yōu)甲樂(lè)組在給藥30天后與模型組相比顯著減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明空白組、模型組、貝牡莪消丸組大鼠在事物認(rèn)知上未見(jiàn)明顯異常。

表5 貝牡莪消丸和優(yōu)甲樂(lè)對(duì)甲狀腺腫伴甲減大鼠新奇事物認(rèn)識(shí)試驗(yàn)-總時(shí)間的影響

注：與空白組比較，#P<0.05；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05

表6 貝牡莪消丸和優(yōu)甲樂(lè)對(duì)甲狀腺腫伴甲減大鼠新奇事物認(rèn)識(shí)試驗(yàn)-新事物優(yōu)先指數(shù)的影響

注：與空白組比較，#P<0.05；與模型對(duì)照組比較，*P<0.05

3 討論

甲狀腺是人體最大的內(nèi)分泌腺,是人體內(nèi)必不可少的器官[6-7]。甲狀腺疾病是內(nèi)分泌系統(tǒng)中的一種常見(jiàn)疾病，由于生活環(huán)境的變化，近年來(lái)甲狀腺疾病的發(fā)病率持續(xù)上升，而結(jié)節(jié)性甲狀腺腫是其中較為常見(jiàn)的疾病[8]?；颊叱３](méi)有自覺(jué)癥狀，多是在體檢時(shí)經(jīng)觸診和檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，其中經(jīng)過(guò)觸診而發(fā)現(xiàn)的甲狀腺結(jié)節(jié)約占4%，在甲狀腺結(jié)節(jié)的影像學(xué)檢查中超聲占首要地位，其檢出率約為17%～67%[9-11]，本病可由缺碘、輻射、細(xì)胞因子、遺傳因素等引起[12-14]。對(duì)于本病，西醫(yī)預(yù)防應(yīng)做到補(bǔ)充足量碘元素、緩解壓力，舒暢情緒、早戒煙、以及及早進(jìn)行甲狀腺超聲檢查等方面，西醫(yī)治療多采用藥物和手術(shù)治療，其中手術(shù)治療的復(fù)發(fā)幾率高達(dá)18%～30%[15]，而甲狀腺激素是目前治療甲狀腺結(jié)節(jié)最為常用的藥物，并且能改善血液中TSH偏高的狀態(tài)，但一方面長(zhǎng)期服用甲狀腺激素副作用大，可能會(huì)影響甲狀腺正常的生理功能，并誘發(fā)動(dòng)脈纖維化以及骨質(zhì)疏松，另一方面激素替代療法應(yīng)用于臨床時(shí)，會(huì)因患者的個(gè)體差異較大，給藥劑量難以把握，若劑量補(bǔ)充不足，則效果欠佳，若劑量補(bǔ)充過(guò)量，則易導(dǎo)致甲亢并且增加心血管風(fēng)險(xiǎn)，尤其是對(duì)于患有心血管疾病的老年患者，一旦出現(xiàn)不良反應(yīng)，須停藥終止治療，可見(jiàn)其臨床應(yīng)用之局限性[16-17]。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用PTU作用于大鼠的下丘腦-腺垂體-甲狀腺軸系統(tǒng)，通過(guò)抑制甲狀腺分泌甲狀腺激素使大鼠體內(nèi)產(chǎn)生負(fù)反饋調(diào)節(jié)，促進(jìn)體內(nèi)分泌更多的TSH，TSH升高作用于甲狀腺，使其腫大，而作為體內(nèi)最重要內(nèi)分泌腺體之一的甲狀腺通過(guò)代償性增大來(lái)分泌更多的甲狀腺激素來(lái)補(bǔ)充自身的不足，以上雙重原因以致甲狀腺腫，可見(jiàn)應(yīng)用TSH抑制藥物是治療本病的手段之一，或者說(shuō)TSH可以作為衡量本病治療進(jìn)展的一項(xiàng)指標(biāo)。單純從TSH抑制角度來(lái)說(shuō)，易氏主張從“腎”論治，選用腎陽(yáng)虛之主方右歸丸抑制亞臨床甲減患者的TSH，臨床療效顯示甲減患者臨床癥狀改善顯著并且TSH水平明顯下降[18]。潘氏應(yīng)用溫腎方改善亞臨床甲減雌鼠的TSH水平，實(shí)驗(yàn)證明溫腎方能使過(guò)高TSH水平抑制，使之明顯下降，臨床療效顯著[19]。劉氏自擬方劑益元癭消湯作用于甲減大鼠，經(jīng)過(guò)試驗(yàn)證明其有類(lèi)甲狀腺激素作用，可使TSH明顯下降，能夠有效調(diào)整下丘腦-腺垂體-甲狀腺軸系統(tǒng)，預(yù)后良好[20]。

敞箱實(shí)驗(yàn)又稱(chēng)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，以通過(guò)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在新異環(huán)境中某行為發(fā)生頻率與持續(xù)時(shí)間來(lái)評(píng)價(jià)其自主行為，探究行為及緊張度的一種方法。甲狀腺激素的合成過(guò)程需甲狀腺內(nèi)氧化物酶的參與，而PTU正是有抑制次酶的作用，從而阻止甲狀腺內(nèi)酪氨酸碘化及碘化酪氨酸縮合，致甲減的發(fā)生。甲減時(shí)，體內(nèi)甲狀腺激素水平下降，可出現(xiàn)中樞神經(jīng)功能異常，如空間認(rèn)知能力下降，探究性為異常，視覺(jué)記憶減退等。因此探究甲減大鼠的認(rèn)知行為，評(píng)價(jià)甲狀腺激素與大鼠認(rèn)知行為的關(guān)系，有助于闡明認(rèn)知功能障礙的機(jī)制，為治療認(rèn)知功能障礙提供新線(xiàn)索。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)貝牡莪消丸與優(yōu)甲樂(lè)在甲狀腺腫伴甲減大鼠行為學(xué)方面的影響，得出應(yīng)用貝牡莪消丸治療后大鼠異?？臻g認(rèn)知能力得以緩解，有一定臨床意義。

中醫(yī)藥治療結(jié)節(jié)性甲狀腺腫伴甲減歷史悠久，累積了豐富的經(jīng)驗(yàn)，大多數(shù)醫(yī)家應(yīng)用含碘量豐富的藥物，如海藻、昆布、貝母、牡蠣等治療本病[21]。杜麗坤教授在總結(jié)前人經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上提出以“活血行氣、消癭散結(jié)”為治療方法，針對(duì)其氣滯、痰凝、血瘀的主要病機(jī)，擬方貝牡莪消丸，標(biāo)本同治，其中貝母、莪術(shù)清熱化痰，消腫止痛，破血行氣；牡蠣、夏枯草軟堅(jiān)化痰，清肝瀉火，散結(jié)消腫，收斂固澀；玄參清熱涼血，滋陰解毒。本方寒溫并調(diào)，氣血并調(diào)，咸味藥和辛味藥聯(lián)合應(yīng)用，共奏活血行氣、消癭散結(jié)之功效。中藥能夠作用于多系統(tǒng)，多器官，具有副作用小，多靶點(diǎn)，療效持久等優(yōu)勢(shì)，因此應(yīng)用貝牡莪消丸治療甲狀腺腫伴甲減患者臨床療效更為明顯。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，PTU能夠?qū)е麓笫蟮募谞钕倌[大伴甲減，貝牡莪消丸可以促使甲狀腺腫伴甲減大鼠的TSH值明顯降低，顯著改善甲減大鼠異?？臻g認(rèn)知能力。綜上所述，貝牡莪消丸在縮小甲狀腺結(jié)節(jié)、改善甲減癥狀等方面可取得較滿(mǎn)意的效果，有較好的發(fā)展前景。

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