常群英，曹 卉，閆夢(mèng)佩

現(xiàn)代血細(xì)胞分離技術(shù)開始于20世紀(jì)初，且在20世紀(jì)40～50年代得到了快速發(fā)展，該技術(shù)的最大優(yōu)點(diǎn)在于僅提取血液中所需特定成分，并將其他成分無損保留并完全歸還患者。血細(xì)胞分離術(shù)可治療各類導(dǎo)致血液成分改變的疾病。治療性血液成分單采能使患者因血細(xì)胞或血漿中質(zhì)和(或)量異常而產(chǎn)生的相關(guān)癥狀很快去除，是一種簡便安全的治療方法。因此，血細(xì)胞分離技術(shù)是近20年來醫(yī)學(xué)界里程碑性質(zhì)的技術(shù)進(jìn)步之一[1-2]。血細(xì)胞分離技術(shù)基礎(chǔ)是通過離心分離原理，將血液中的不同成分依照比重差異進(jìn)行精密分離，可以“獲取”或“去除”相應(yīng)血液成分，從而達(dá)到“采集”或“治療”相應(yīng)疾病的功能。現(xiàn)將血細(xì)胞分離技術(shù)在血液成分采集、去除置換等方面的臨床應(yīng)用進(jìn)展綜述如下。

1 基于血細(xì)胞分離技術(shù)的血液成分采集

1.1外周血造血干細(xì)胞(PBSC)采集技術(shù) 經(jīng)過動(dòng)員劑將骨髓中的造血干細(xì)胞(HSC)動(dòng)員釋放入外周血，通過精密連續(xù)式血細(xì)胞分離技術(shù)將外周血微量的HSC提取收集，并將其他血液成分無損歸還供/患者。因干細(xì)胞具有分化成各類血液細(xì)胞的能力，移植到白血病患者體內(nèi)的HSC可分化增殖替代病變的各類血液細(xì)胞，恢復(fù)它們的正常功能。近年來，隨著血細(xì)胞分離機(jī)應(yīng)用于PBSC的采集，PBSC動(dòng)員、分離和采集技術(shù)的改良，PBSC移植(PBSCT)已成為治療惡性血液病和某些實(shí)體瘤的重要方法，且發(fā)展極為迅速，逐步代替了骨髓移植BMT[3-5]。

PBSCT因細(xì)胞植入率高、造血和免疫功能重建快、移植相關(guān)并發(fā)癥少等優(yōu)點(diǎn)，臨床應(yīng)用日益廣泛。從供者骨髓中動(dòng)員足量的HSC是成功的關(guān)鍵。PBSCT后造血功能的重建及移植物抗宿主病(GVHD)的發(fā)生等，與采集的HSC質(zhì)量與數(shù)量密切相關(guān)。如何使用血細(xì)胞分離機(jī)通過最少采集次數(shù)而采集到足夠高質(zhì)量的PBSC，最大限度地控制供/患者其他血液成分的損失；同時(shí)滿足HSCT植成功的需要，減輕患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，是采集PBSC追求的目標(biāo)[6-7]。PBSC是存在于外周循環(huán)血液中的一種具有自我更新、分裂增收和分化功能的細(xì)胞，正常成人PBSC占外用血液單個(gè)核細(xì)胞的1‰左右，經(jīng)適當(dāng)動(dòng)員處理可提高至10‰。費(fèi)森尤斯血細(xì)胞分離機(jī)具有業(yè)界最高的CD34+干細(xì)胞采集效率，并可根據(jù)供/患者的具體情況，選擇不同的血細(xì)胞分離機(jī)采集模式，以達(dá)到最佳的PBSC采集效果[8-9]。

1.2外周血白細(xì)胞采集技術(shù) 通過血細(xì)胞分離技術(shù)迅速、安全的采集外周血液中的白細(xì)胞或類白細(xì)胞(單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞)，回輸其他血液成分并同時(shí)補(bǔ)充液體維持血容量平衡。采集的白細(xì)胞為自體治療疾病或?yàn)槠渌藛T提供血源。免疫細(xì)胞療法是通過對(duì)免疫細(xì)胞進(jìn)行體外改造，以激發(fā)或增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答殺傷腫瘤、抑制腫瘤生長。使用細(xì)胞的類型包括淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(LAK)、自然殺傷細(xì)胞(NK)、樹突狀細(xì)胞(DC)、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)、殺傷性T 細(xì)胞(CTL)、腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(TIL)、嵌合抗原受體T細(xì)胞(CAR-T)、嵌合T 細(xì)胞受體T 細(xì)胞(TCR-T)等。

近年來，CAR-T治療技術(shù)在臨床取得了良好的抗腫瘤效果。CAR-T 細(xì)胞已成為當(dāng)前免疫細(xì)胞療法研究的焦點(diǎn)，并于2017 年8 月正式投入市場，該技術(shù)主要通過提取患者體內(nèi) T 淋巴細(xì)胞，經(jīng)過體外培養(yǎng)改造形成CAR-T，被重新編碼的T細(xì)胞就能獲得特異性識(shí)別和攻擊殺傷腫瘤細(xì)胞的能力，將該處理并擴(kuò)增后的免疫細(xì)胞進(jìn)行人體回輸，發(fā)揮精準(zhǔn)殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。目前對(duì)急性白血病和非霍奇金淋巴瘤的治療效果顯著，被認(rèn)為是最有前景的腫瘤治療方式之一[10]。免疫細(xì)胞療法產(chǎn)業(yè)主要包括療法、藥物研發(fā)和相關(guān)服務(wù)、器材供應(yīng)，產(chǎn)業(yè)體系已初步成型，涵蓋免疫細(xì)胞分離、富集、激活、基因改造、體外擴(kuò)增或全過程自動(dòng)化處理及存儲(chǔ)運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)[11]。免疫細(xì)胞采集是生物治療的關(guān)鍵一環(huán)，T細(xì)胞等主要從捐獻(xiàn)者或患者收集外周血中采用密度梯度離心法和免疫吸附法獲得，包括費(fèi)森尤斯等血細(xì)胞分離技術(shù)顯示了高效的人體免疫細(xì)胞采集效率，在免疫細(xì)胞精準(zhǔn)治療領(lǐng)域作用獨(dú)特。

1.3外周血紅細(xì)胞采集技術(shù) 通過血細(xì)胞分離機(jī)迅速、安全的采集壓積紅細(xì)胞，回輸其他血液成分并補(bǔ)充液體維持血容量平衡，采集的壓積紅細(xì)胞為術(shù)前自體備血提供血源[12-14]。與同等身體條件而使用傳統(tǒng)采集自體全血方式的手術(shù)患者相比，術(shù)前深度單采自體紅細(xì)胞有以下優(yōu)點(diǎn)：降低異體血液使用量，減少需要輸注異體血的患者比例；緩解高血壓，降低心臟負(fù)荷，改善心功能；避免輸血后免疫抑制，維持或提高了患者免疫力；縮短術(shù)后住院時(shí)間，術(shù)后恢復(fù)快；術(shù)前單采深度自體紅細(xì)胞可降低患者血液紅細(xì)胞黏稠度、減少血管阻力、提高血液向組織供氧等[12]。臨床實(shí)踐證明一次深度采集的自體紅細(xì)胞，可使>90%擇期手術(shù)患者脫離對(duì)異體血液的依賴，有助于緩解當(dāng)前血源供不應(yīng)求的矛盾。

1.4外周血血小板采集技術(shù) 隨著血小板自身的組織修復(fù)特性和內(nèi)含多種生長因子的發(fā)現(xiàn)，血小板相關(guān)治療技術(shù)的已經(jīng)拓展了多項(xiàng)臨床用途。通過血細(xì)胞分離機(jī)迅速、安全的采集血小板， 回輸其他血液成分并同時(shí)補(bǔ)充液體維持血容量平衡，采集的血小板為術(shù)前自體備血或局部治療提供血源[15-18]。人體每天可生產(chǎn)約1200億個(gè)血小板，約0.5個(gè)治療劑量，采集1個(gè)治療劑量的自體血小板，患者2 d即可完全恢復(fù)到采集前水平。血小板的采集技術(shù)還應(yīng)用于心胸外科的血小板凝膠制備，美容治療中的PRP生長因子組織修復(fù)，糖尿病足的皮膚修復(fù)，慢性關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)腔修復(fù)[19-20]。

1.5血漿采集技術(shù) 通過血細(xì)胞分離機(jī)迅速、安全的采集血漿，回輸其他血液成分并同時(shí)補(bǔ)充液體維持血容量平衡。采集的血漿為術(shù)前自體備血或自體組織體外培養(yǎng)修復(fù)提供來源 。

2 基于血細(xì)胞分離技術(shù)的血液成分去除

2.1紅細(xì)胞去除技術(shù) 治療性紅細(xì)胞去除是指分離和去除血液中的病理性紅細(xì)胞，回輸其正常成分的治療技術(shù)；主要用于真性和繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥的治療。真性紅細(xì)胞增多癥是一種獲得性克隆性多能干細(xì)胞的骨髓增殖性疾病，臨床表現(xiàn)是多血質(zhì)，全血容量增多，血液呈高黏滯狀態(tài)，易形成血栓、脾腫大及合并一系列血管神經(jīng)癥狀。除紅細(xì)胞異常增高外，常伴有白細(xì)胞及血小板數(shù)量增多。治療性紅細(xì)胞去除可在短時(shí)間內(nèi)迅速使紅細(xì)胞容量降低從而全血容量正常，達(dá)到緩解癥狀的目的[21-22]。

2.2白細(xì)胞去除技術(shù) 白血病因免疫失衡及血白細(xì)胞過高(白細(xì)胞或幼稚細(xì)胞>100×109/L)可導(dǎo)致白細(xì)胞淤滯。治療性白細(xì)胞去除是指分離和去除患者血液中病理性白細(xì)胞，回輸其正常成分的治療技術(shù)。許多淋巴細(xì)胞去除術(shù)尤其是在激素治療無緩解或不能耐受激素治療的自身免疫性疾病患者。常見需行白細(xì)胞去除的疾病包括：白血病或類白血病引起的白細(xì)胞增多癥。血細(xì)胞分離技術(shù)可精準(zhǔn)采集白血病患者過多的特定種類異常增高白細(xì)胞，并將其棄除，達(dá)到特異性去除異常增生白細(xì)胞的作用?；谘?xì)胞分離技術(shù)的白細(xì)胞去除方法在發(fā)達(dá)國家作為白血病治療的基礎(chǔ)方案之一，可有效糾正該類患者血液細(xì)胞平衡，應(yīng)對(duì)白細(xì)胞淤滯[23-24]。

2.3血小板去除技術(shù) 治療性血小板去除是指分離和去除患者血液中的病理性血小板，回輸其正常成分的一種迅速、安全的治療技術(shù)[25]。主要適應(yīng)于由于血小板生成素的過量分泌引起的罕見的家族性疾病，以及由一系列的基礎(chǔ)性疾病引起的反應(yīng)性血小板增多癥，慢性骨髓源性白血病引起的骨髓增生異常，血小板數(shù)目迅速增高。同時(shí)，原發(fā)性血小板增多癥的爆發(fā)性增長，也使Com.Tec血漿吸附治療套件作為已知最高效的物理性血小板去除方法，填補(bǔ)了單純藥物治療療效慢，不良反應(yīng)大的治療壁壘。

2.4血脂等去除技術(shù) 近年來，由于健康人群血脂異常和兒童青少年高膽固醇血癥患病率的明顯升高，預(yù)示未來中國成人血脂異?；疾〖跋嚓P(guān)疾病負(fù)擔(dān)將繼續(xù)加重[26]；但臨床常用降脂藥物治療高脂血癥尤其是家族性高膽固醇血癥(FH)的效果差，LDL-C達(dá)標(biāo)率低，故脂蛋白血漿置換可作為此類患者的一種有效治療方式，顯著降低LDL-C 水平并延緩動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程。脂蛋白血漿置換可使純合性家族性高膽固醇血癥患者的LDL-C 水平降低55%～70%[27]。血漿置換是通過血濾機(jī)將血漿分離棄去高濃度脂質(zhì)血漿并將分離出的血液有形成分輸回體內(nèi)，可有效去除血漿中過高的甘油三酯；并給予異體血漿、免疫物質(zhì)、白蛋白和凝血因子等補(bǔ)充，改善術(shù)后內(nèi)環(huán)境紊亂，降低膽紅素和內(nèi)毒素水平，改善患者臨床癥狀；該技術(shù)不添加任何親和吸附化學(xué)藥物，一次治療可降低血黏度30%，血脂30%～60%，可調(diào)整體內(nèi)脂肪分布，改善脂肪肝程度，治療高脂血癥療效好[28-30]。

血脂清除技術(shù)除去脂外還可去除脂溶性毒物，降低自由基及炎性因子而應(yīng)用于美容領(lǐng)域。血漿置換技術(shù)可去除各類體內(nèi)毒物，微量血漿置換(<1500 ml不需供者血漿的置換技術(shù))在臨床廣泛用于各類毒物去除：藥物中毒清除及毒蘑菇、百草枯、蛇毒的搶救。血漿吸附作為近年血液凈化領(lǐng)域的先進(jìn)科技代表，在風(fēng)濕免疫性疾病的抗體吸附，缺血性腦卒中疾病輔助治療及重癥肝病的膽紅素吸附領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用。Com.Tec血漿吸附治療套件可適配接納各類目前幾乎已知的所有“吸附體和(或)吸附柱”，幫助治療各類由于血漿異常物質(zhì)導(dǎo)致的各類全身系統(tǒng)疾病。費(fèi)森尤斯血細(xì)胞分離機(jī)具備獨(dú)家技術(shù)可廣泛兼容上百種吸附體/吸附柱。

3 小結(jié)

血細(xì)胞分離技術(shù)是通過對(duì)血液成分的采集及糾正，快速治療各類疾病的新興手段。隨著該技術(shù)不斷改進(jìn)，雙重甚至多重血漿置換技術(shù)的優(yōu)化，其安全性更高，技術(shù)穩(wěn)定性更強(qiáng)，覆蓋領(lǐng)域更廣。在成分血液(紅細(xì)胞、血小板、血漿等)有效采集以保障臨床血液供應(yīng)的同時(shí)，因其在干細(xì)胞和免疫細(xì)胞精準(zhǔn)治療中的作用，可在白血病、高脂血癥、自身免疫性疾病、中毒急救、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、肝腎疾病等臨床治療中具有廣泛應(yīng)用前景[31-36]，有助于臨床開展各類治療，減輕疾病痛苦，挽救患者生命。