賀仁娟，趙 敏*

（1.山西醫(yī)科大學(xué)，山西 太原 030001；2.山西省婦幼保健院，山西 太原 030013）

宮頸癌是世界上第三常見的婦科惡性腫瘤[1]，其發(fā)生主要與高危型人乳頭瘤病毒（human paplilloma virus，HPV）持續(xù)感染密切相關(guān)。然而大部分高危型HPV感染多于首次發(fā)現(xiàn)后的6到12個(gè)月自然回歸陰性，多為一過性感染[2]。近些年來各種HPV 檢測(cè)方法層出不窮，廣泛用于宮頸癌的篩查中，但是HPV DNA檢測(cè)只能反映病毒存在，有研究指出HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)還可以反映病毒基因的活性[3]，用于宮頸癌篩查的有效方法之一。本研究對(duì)高危型HPV感染患者行HPV E6/E7mRNA檢測(cè)，分析HPV E6/E7mRNA與宮頸病變的關(guān)系，探究其對(duì)宮頸癌篩查的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

收集2016年11月至2017年11月就診于山西省婦幼保健院的高危型HPV感染婦女為104例，年齡28～66歲。入組標(biāo)準(zhǔn)：有正常性生活；就診的前3天內(nèi)未接受過陰道沖洗、上藥等局部處理；3個(gè)月內(nèi)未使用過性激素。排除標(biāo)準(zhǔn)：除外免疫疾患、內(nèi)外科疾??；除外合并其他陰道炎癥。

1.2 分組

在知情同意的前提下，取所有患者宮頸脫落細(xì)胞行HPV E6/E7mRNA檢測(cè)及陰道鏡宮頸活檢。組織學(xué)病理診斷結(jié)果判讀分為慢性宮頸炎（宮頸炎組）、低度鱗狀上皮內(nèi)病變（low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL）（低級(jí)別組）以及高度鱗狀上皮內(nèi)病變（high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL）（高級(jí)別組）。隨機(jī)選取30例患者同時(shí)對(duì)其宮頸脫落細(xì)胞及宮頸石蠟包埋組織標(biāo)本進(jìn)行HPV E6/E7mRNA檢測(cè)，編號(hào)分組，分為宮頸脫落細(xì)胞組和宮頸石蠟組織組。

1.3 方法

1.3.1 高危型HPV感染的檢測(cè)

暴露宮頸后，將宮頸刷于宮頸口慢慢搓動(dòng)，順時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)5周。拿出宮頸刷，放入取樣瓶內(nèi)，待檢測(cè)。用HC-2法測(cè)宮頸脫落細(xì)胞的13種高危型HPV DNA；試劑盒于美國DIGENE公司購買，按說明書中的步驟進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.2 HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)

針對(duì)14種高危型HPV E6/E7 mRNA，選用河南中美合資科蒂亞生物技術(shù)有限公司試劑，用核酸探針信號(hào)放大檢測(cè)技術(shù)即支鏈DNA技術(shù)，將樣本用特定裂解液裂解，然后經(jīng)探針雜交與信號(hào)放大，即得到基因定量結(jié)果。①宮頸脫落細(xì)胞檢測(cè)：將宮頸刷于宮頸口輕輕搓動(dòng)，順時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)5周，取出宮頸刷，折斷刷柄，放入取樣瓶內(nèi)待用；②宮頸石蠟包埋組織：所選患者陰道鏡檢查術(shù)后，石蠟包埋宮頸小塊組織活檢標(biāo)本，子宮頸石蠟標(biāo)本均40 μm厚連續(xù)切片，將切下的組織裝進(jìn)1.5 mL離心管內(nèi)，操作時(shí)對(duì)以上標(biāo)本對(duì)應(yīng)編號(hào)，嚴(yán)格按照試劑盒說明步驟進(jìn)行操作。

1.3.3 病理性檢查

入組患者均行陰道鏡活檢，以病理診斷確診，分組。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采取SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用x2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 研究對(duì)象一般情況

入選患者年齡在28～66歲（P=0.078）；孕次和流產(chǎn)次分別在0～5次和0～4次（P=0.174和P=0.820）；初孕年齡和初次性生活年齡在18～30歲和17～27歲（P=0.862和P=0.617）；組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)與病理結(jié)果比較

HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)在以下各組的陽性率不全相等，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=11.636，P＜0.05）。再進(jìn)行x2分割，以α'= 0.0125為界值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)宮頸炎組、低級(jí)別組分別和高級(jí)別組比較，陽性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2分割=9.32、8.98，P＜0.0125），宮頸炎組與低級(jí)別組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.0125）。隨著宮頸病變級(jí)別的升高，HPV E6/E7 mRNA陽性率增加，高級(jí)別組陽性率最高。見表1。

表1 HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)與病理結(jié)果比較

2.3 兩種標(biāo)本行HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)結(jié)果比較

宮頸脫落細(xì)胞組HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)（+）20例，檢出率為66.67%；宮頸石蠟包埋組織組HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)（+）16例，檢出率為53.33%。宮頸脫落細(xì)胞、宮頸石蠟包埋組織兩種標(biāo)本測(cè)定HPV E6/E7 mRNA結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=1.11，P=0.430）。見表2。

表2 兩種標(biāo)本的HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

宮頸癌的發(fā)生主要與HPV的感染密切相關(guān)，是最常見的婦科惡性腫瘤之一。研究表明HPV感染非常普遍，超過90%的女性將在一生中經(jīng)歷HPV感染，其中大部分為短暫性感染，90%的感染者兩年內(nèi)會(huì)自發(fā)消除，不會(huì)造成任何宮頸病變[4]，只有極少數(shù)患者，在持續(xù) HPV的感染下才進(jìn)展為宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌。

人乳頭瘤病毒（HPV）是一種小型環(huán)狀的雙鏈DNA，持續(xù)HPV感染后，其會(huì)與宿主細(xì)胞發(fā)生整合，HPV病毒的兩條癌基因片段E6、E7轉(zhuǎn)錄、翻譯出E6、E7蛋白，E6蛋白與腫瘤抑制基因P53結(jié)合，促進(jìn)P53退化，導(dǎo)致其功能障礙；E7蛋白與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白質(zhì)（Rb）結(jié)合，使Rb蛋白水解，刺激細(xì)胞周期失控，從而細(xì)胞進(jìn)入無限繁殖的狀態(tài)，導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生[5]。HPVE6/E7癌基因可以誘導(dǎo)惡性轉(zhuǎn)化，檢測(cè)HPV E6/E7 mRNA更能反映癌基因的活性，因此我們可以利用HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)來評(píng)估HPV陽性患者發(fā)展為宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)，識(shí)別暫時(shí)性感染，避免過度治療。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在3個(gè)組中高危HPV E6/E7 mRNA陽性率不全相等，宮頸炎組、低級(jí)別組分別與高級(jí)別組比較，陽性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，宮頸炎組與低級(jí)別組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨著宮頸病變級(jí)別的升高，HPV E6/E7 mRNA陽性率增加，高級(jí)別組陽性率最高。這一結(jié)果顯示：E6、E7癌基因可能促進(jìn)宮頸病變的進(jìn)展，與宮頸病變的嚴(yán)重程度關(guān)系密切。這與Castle等[6]的研究結(jié)果一致。

本研究收集同一患者的宮頸脫落細(xì)胞和陰道鏡活檢石蠟組織30例行HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)，宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本HPV E6/E7 mRNA檢出率為 66.7%，石蠟組織標(biāo)本HPV E6/E7 mRNA檢出率為 56.7%。宮頸脫落細(xì)胞、宮頸石蠟包埋組織兩種標(biāo)本測(cè)定HPV E6/E7 mRNA結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此在進(jìn)行宮頸癌篩查中，兩種標(biāo)本都可以用來進(jìn)行HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)，宮頸脫落細(xì)胞可以無創(chuàng)取材，具有更好的操作性。

本研究中存在以下問題：3例石蠟標(biāo)本結(jié)果陽性，而細(xì)胞學(xué)檢測(cè)陰性，可能與宮頸病變位于深層，或者宮頸表面病變細(xì)胞壞死有關(guān)。6例宮頸脫落細(xì)胞檢測(cè)陽性的患者，石蠟組織結(jié)果提示陰性，宮頸涂片采樣面積大，而宮頸活檢標(biāo)本只是在特定的點(diǎn)取樣以及石蠟標(biāo)本取材等原因均可以導(dǎo)致這一結(jié)果，確切的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，HPV E6/E7 mRNA與宮頸癌前病變、宮頸癌之間的關(guān)系密切，其作為新一代宮頸癌篩查方法，目前仍有許多新的內(nèi)容有待探索，需要進(jìn)一步大樣本研究，以便更多的宮頸早期病變被及時(shí)發(fā)現(xiàn)。

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